Диссертация (Влияние структуры агликона на иммунотропную активность гликозидов мурамилдипептида), страница 9

Ув.×400А – Культура клеток, выделенныхиз крови здорового донора(контроль).Б – Культура мононуклеарныхлейкоцитов, инкубированных сМДП.В – Культура мононуклеарныхлейкоцитов, инкубированных с βгептилгликозидом МДП.Рисунок 11. CD80+-клетки в культуре ДК, подвергнутых воздействиюМДП или β-гептилгликозида МДП62Иммунофлюоресценция (антитела кHLA-DR, меченные FITC).Инвертированный микроскоп, сподсветкой УФ излучением. Ув.×400A– Культура клеток, выделенных изкрови здорового донора (контроль).Б – Культура мононуклеарныхлейкоцитов, инкубированных сМДП.В – Культура мононуклеарныхлейкоцитов, инкубированных с βгептилгликозидом МДП.Рисунок 12.

HLA-DR+-клетки в культуре ДК, подвергнутых воздействиюМДП или β-гептилгликозида МДП63Таблица 3Влияние МДП или β-гептилгликозида МДПна экспрессию мембранно-ассоциированных молекул ДКМембранно-ассоциированные маркерыКонтроль02±0,201,4±0,12,4±1,50,5±0,213±22,2±1,22,3±1,10,9±0,2МДПCD14 CD86+ CD83CD1401,6±0,301,5±0,30,6±0,506,4±316,2±2*0,9±11,7±0,1ГептилгликозидМДПCD1а CD4 CD1а CD80 HLA- CD80+ CD860+DR HLACD40DR02,1±0,401,4±0,14,6±1011,9±39,9±1,1*0,7±0,81,5±0,2* – р<0,05 по сравнению с контролем64А – контроль.Б – инкубация с МДП.В – инкубация с β-гептилгликозидом МДП.Рисунок 13. Экспрессия мембранно-ассоциированных молекул CD1a иCD40 ДК, подвергнутыми воздействию МДП или β-гептилгликозидаМДП65А – контроль.Б – инкубация с МДП.В – инкубация с β-гептилгликозидом МДП.Рисунок 14.

Экспрессия мембранно-ассоциированных молекул CD86 иCD14мононуклеарнымилейкоцитамиздоровогоинкубированными с МДП или β-гептилгликозидом МДПдонора,66А – контроль.Б – инкубация с МДП.В – инкубация с β-гептилгликозидом МДП.Рисунок 15. Экспрессия мембранно-ассоциированной молекулы CD83ДК, подвергнутыми воздействию МДП или β-гептилгликозида МДП67А – контроль.Б – инкубация с МДП.В – инкубация с β-гептилгликозидом МДП.Рисунок 16. Экспрессия мембранно-ассоциированных молекул CD80 иHLA-DR ДК, подвергнутыми воздействию МДП или β-гептилгликозидаМДП68Таким образом, культивирование дендритных клеток мононуклеарногопроисхождения в среде, содержащей МДП или β-гептилгликозид МДП,вызывало существенное повышение экспрессии молекулы CD14, но неоказывало статистически значимого влияния на экспрессию другихмембранно-ассоциированных маркеров, характерных для созревающих изрелых дендритных клеток.Следует отметить наличие тенденции к увеличению экспрессии СD83под влиянием обоих гликопептидов, HLA-DR – под действием βгептилгликозида МДП, а также тенденцию к снижению экспрессии молекулHLA-DR и СD86 – под влиянием МДП, комбинаций молекул CD80+HLA-DRи CD86+CD14 – под действием обоих гликопептидов.69Глава 2.

ИММУНОТРОПНАЯ, ПРОТИВОПУХОЛЕВАЯ ИНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ βГЕПТИЛГЛИКОЗИДА МДП IN VIVO2.1. Изменение концентрации цитокинов в сыворотке крови мышейC57BL/6 после внутрибрюшинного введения МДП или βгептилгликозида МДПДля оценки влияния β-гептилгликозида МДП на продукцию цитокиновin vivo это соединение или МДП в качестве референс-контроля вводиливнутрибрюшинно мышам линии C57BL/6 в дозе 10 мкг/животное споследующим забором крови через 1, 8 и 24 часа.Концентрация IL-1β в сыворотке крови животных через 1 час послевведения β-гептилгликозида МДП была в полтора раза выше таковой вгруппах контроля и референс-контроля (рис. 17).

При этом статистическаязначимость этих различий подтверждалась при парных, но не множественныхмежгрупповых сравнениях.70201816141210864Гептилгликозид МДПМДП0Контроль2MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 17. Концентрация IL-1β (пг/мл) в сыворотке крови мышей через1 час внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозида МДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,063 (критерийКраскела-Уоллиса).

В сравнении с контролем: * – p=0,092 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни). В сравнениис МДП: # – p=0,187*#(критерий Данна) или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).71Через 8 часов после введения β-гептилгликозида МДП повышеннаяконцентрация этого цитокина сохранялась. В этот период также повышалосьсодержание IL-1β под влиянием референс-препарата (рис. 18).262422*20&18161412108642Гептилгликозид МДПМДПКонтроль0MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 18. Концентрация IL-1β (пг/мл) в сыворотке крови мышей через8 часов после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,051 (критерийКраскела-Уоллиса).

В сравнении с контролем: * – p=0,051 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни); & – p=0,303 (критерий Данна) илиp=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).72Через 24 часа более высокие цифры этого показателя, чем в контроле,были только у животных, получавших внутрибрюшинную инъекцию βгептилгликозида МДП (рис. 19).201816*1412108642Гептилгликозид МДПМДПКонтроль0MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 19. Концентрация IL-1β (пг/мл) в сыворотке крови мышей через24 часа после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,088 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * – p=0,092 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).73Концентрация IL-2 в сыворотке животных через 1 час после введения βгептилгликозида МДП была выше показателей контрольной группы, чтоподтверждалось в рамках парного сравнения с помощью критерия МаннаУитни. При множественном сравнении группы животных, получившихиммуномодуляторы, и контрольная группа не различались по этомупоказателю (Рис.

20).3,02,5*2,01,51,00,5Гептилгликозид МДПМДПКонтроль0,0MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 20. Концентрация IL-2 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через 1час после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,079 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * – p=0,076 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).74Через 8 часов после введения препаратов при сохранении несколькоповышенной концентрации IL-2 у животных, которым вводили βгептилгликозид МДП, статистически значимые различия между группамиотсутствовали (Рис.

21).3,02,52,01,51,0Гептилгликозид МДПМДП0,0Контроль0,5MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 21. Концентрация IL-2 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через 8часов после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЧерез 24 часа после введения МДП и в несколько большей степени βгептилгликозид МДП проявляли тенденцию к повышению содержания этого75цитокина в сыворотке крови животных в сравнении с контролем. В случае сβ-гептилгликозидом МДП эта тенденция лишь немного не достигала порогастатистической значимости (Рис.

22).2,62,42,22,0&1,8*1,61,41,21,00,80,6Гептилгликозид МДПМДП0,2Контроль0,4MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 22. Концентрация IL-2 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через24 часа после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,088 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * – p=0,092 (критерий Данна)или p=0,077 (U-критерий Манна-Уитни); & – p=0,470 (критерий Данна) илиp=0,127 (U-критерий Манна-Уитни).76Через 1 час после внутрибрюшинной инъекции мурамилпептидовстатистически значимые различия между уровнями IL-5 в сыворотке кровиживотных разных групп отсутствовали (Рис. 23).5432Гептилгликозид МДПМДП0Контроль1MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 23.

Концентрация IL-5 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через 1час после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДП77Через 8 часов от начала эксперимента концентрация IL-5 у животных,получивших β-гептилгликозид МДП, достоверно превышала таковую вгруппах контроля и референс-контроля (Рис. 24).70*#6050403020Гептилгликозид МДПМДП0Контроль10MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 24. Концентрация IL-5 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через 8часа после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,027 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * – p=0,022 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).

В сравнении с МДП: # – p=0,539(критерий Данна) или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).78Через сутки после начала эксперимента содержание IL-5 в сывороткекрови животных обеих групп, получавших мурамилпептиды, превышалосоответствующий показатель в группе контроля при парных сравнениях сиспользованием критерия Манна-Уитни. В рамках множественного сравненияэти отличия математически не подтверждались (Рис. 25).987&6*5432Гептлгликозид МДПМДПКонтроль1MeanMean±SEMean±2*SDOutliersExtremesРисунок 25. Концентрация IL-5 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через24 часа после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,061 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * – p=0,220 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни); & – p=0,076 (критерий Данна) илиp=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).79Уровень IL-6 через 1 час после введения β-гептилгликозида МДПпревышал таковой в группах контроля и референс-контроля (Рис.

26).35*#3025201510Гептилгликозид МДПМДП0Контроль5MeanMean±SEMean±2*SDРисунок 26. Концентрация IL-6 (пг/мл) в сыворотке крови мышей через 1час после внутрибрюшинного введения МДП или β-гептилгликозидаМДПЗначимость различия при множественном сравнении: p=0,032 (критерийКраскела-Уоллиса). В сравнении с контролем: * – p=0,027 (критерий Данна)или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни). В сравнении с МДП: # – p=0,470(критерий Данна) или p=0,0495 (U-критерий Манна-Уитни).80Через 8 часов от начала эксперимента концентрация IL-6 в сывороткекрови мышей, которым вводили β-гептилгликозид МДП, была вышесоответствующих показателей в других сравниваемых группах.