Диссертация (1139917), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Производные МДП с модифицированным пептидомС точки зрения эффективности разработки новых лекарственныхпрепаратов наиболее легким элементом для модифицирования МДП являетсяолигопептид.В ходе поиска новых более эффективных и безопасных модификаций ианалогов МДП было проведено экспериментальное испытание гликомуридпептидов с измененной пептидной цепью. Для определения адъювантнойактивности у вновь синтезированных модификаций МДП испытуемоесоединение в растворе воды и минеральных масел вводилось морским свинкамсовместно с гетерологичными белковыми антигенами или азобензенарсонатN-Ацетил-L-Тирозином для определения влияния испытуемого соединения на30развитие реакции замедленного типа. В ходе испытания исследуемыхпрепаратов на модели индуцированного энцефалита, модифицированныемуропептидывводилисьлабораторнымживотнымсовместносэнцефалолитогенными антигенами.
Данные, полученные в ходе этой работы,указывают на то, что аминокислота L-Аланин, входящая в состав Nацетилмурамил-L-Аланин-D-Изоглутамина (МДП-L-D), может быть замененадругой L-аминокислотой, такой как L-Серин, в то время как замена L-Аланинана D-Аланин (МДП-D-D) резко снижает адъювантную активность.Также было выявлено, что функциональность D-глутамовой кислотыважна для общей иммунотропной активности, в то время, как изменениеструктуры α-амида не оказывает влияния на иммунотропность. Dаспартановый, D-норлейциновый и L-изоглутаминовый аналоги МДП (MDDL) не имели иммунотропной активности.
Но гликомуриды с заменой Dизоглутамина на D-глутамовую кислоту или на α, γ-диметил эфирные аналогиобладалиповышеннойиммунотропностьпосравнениюснемодифицированным соединением [41, 42, 78].Аналог МДП, у которого D-изоглутамин заменен на D-глутамин, Dглутаминовую кислоту или D-изоаспарагин, имеет значительно меньшуюадъювантную активность, в то время как замена D-аминокислот пептиднойцепи на L-аналоги вызывает полное исчезновение иммунотропности.Изменение структуры пептида МДП позволяет менять не только ихиммуномодулирующую активность, но и липофильность всей молекулы.Среди липофильных аналогов МДП с модифицированным пептидомиммунотропную активность в эксперименте показали Мурамилтрипептид(МТП)-Холестерол, содержащий гидролизуемый сложный эфир и МТПоктадеканилиМТП-гептадекафтороктадекан,содержащиенегидролизируемые эфиры. Изучение МТП-холестерола показало наличие унего выраженной иммунотропной активностью по отношению к макрофагамлинии RAW264.7.
На это указывает повышение концентрации нитритоввнутри этих клеток, что позволяет предположить об повышении активности31NO-синтетазы. Данный фермент является одним из основных факторовцитостатической активности макрофагов в противомикробных звеньяхиммунной системы. С другой стороны, липофильные эфиры МДП не имелииммунотропной активности, что позволяет предположить, что липофильныеаналоги МДП нуждаются в гидролизации внутри клеток для превращения виммунотропные гидрофильные метаболиты [139, 233].3.3.3. Полимурамил как активатор рецепторов NOD1 и NOD2Несмотря на то, что большинство изучаемых муропептидов являютсясинтетическими или полусинтетическими соединениями, поиск эффективныхиммуномодуляторов естественного происхождения остается актуальнойзадачей. Новые методики очистки позволили создать соединения, болеебезопасные, нежели адъювант Фрейнда. Перспективным препаратом наоснове продуктов лизоцимного гидролиза Salmonellae typhi являетсяполимурамил, представляющий из себя собой комплекс муропептидов [32].Данное соединение является смесью из трех муропептидов : β-N-ацетил-Dглюкозаминил-(1→4)-N-ацетил-D-мура-моил-L-аланил-D-изоглютаминилмезо-диаминопимелиновая кислота, β-N-ацетил-D-глюкозаминил-(1→4)-Nацетил-D-мурамоил-L-аланил-D-изоглютаминил-мезодиаминопиме - лоил-Dаланин); 3) димер предыдущего соединения в котором мономерные остаткисоединены амидной связью между карбоксильной группой терминального Dаланина одного остатка и ω-аминогруппой мезо-диаминопимелиновойкислоты другого остатка.В работах М.В.Пащенкова и соавторов показано, что данный комплекссоединений обладает иммунотропной активностью по отношению кширокому спектру иммунокомпетентных клеток, а также умереннойэффективностью в комплексной терапии гнойно-воспалительных заболеванийкожи и мягких тканей [33, 34].
Тем не менее, степень клиническойэффективностиполимурамилатребуетуточнениявдальнейшихконтролируемых испытаниях с большим количеством больных [30, 31].323.3.4. Влияние модификации сахаридной части мурамилпептидов на ихиммунотропную активностьВлияние изменения участка молочной кислоты (С3) на биологическуюактивность производных МДПХиральность участка молочной кислоты МДП влияет как настабильность, так и на иммунотропную активность соединения. В то же время,нор-МДП, не обладающий метиловым радикалом на той же позиции,отличается таким же уровнем иммунотропности при меньшей токсичности[73].Влияние изменения N-ацетильного участка (C2) МДП наиммунотропность производных МДПЗамена ацетоамидной группы на OH-, NH2- или N-группы не снижаетиммунотропности производных МДП.
В то же время, деаминые или деоксныемодификации теряют способность вызывать реакцию замедленного типа наазобензенарсонат-N-ацетил-L-тирозинуморскихсвинок.Введениелипофильной ацетиламидной группы увеличивает адъювантную активностьполученного соединения [46, 108].Влияние 4, 6-O-замещения D-глюкозамина (C4, C6) наиммуномодулирующую активность мурамилпептидовN-Ацетил-β-D-глюкозаминил МДП превосходил МДП в способностивызывать у морских свинок реакцию замедленного типа и повышать уровеньантител к овобулину [108, 140]. В положении C-6, гидроксильная группаможет быть заменена на тиольную, аминную или на неацилированнуюаминную группу без потери иммунотропности у полученного соединения46[4].
Уместно сравнение липофильных 6-S-ацил производных МДП с 6-Oацил производными МДП, которые обладают высокой активностью [109].Ацилация углевода в положении 6 при помощи миколических кислот,гидроокисных жирных кислот и хининалканоиков, усиливала активностьполученного препарата по отношению к ВИЧ-1 и опухолям различного генеза33[91,135].6-О-(тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглютамин (B30-МДП) показал наличие адъювантной активности прииндукции адаптивного иммунного ответа [192]. Модификации МДП,основанные на ваминоалканокарболовой кислоте, замещенной N-Акридином,показали наличие стимуляции цитотоксической активности NK клеток,полученных из селезенок здоровых животных и животных с меланомой AB[80,81]ДезмурамилпептидыКарбоциклический аналог МДП, в котором N-ацетилмурамовая кислотабыла заменена на циклогексанол, был не способен усиливать реакциюзамедленного типа у морских свинок [46].
Другие карбоциклические аналоги,синтезированные в реакции перестановки Ферье, не имели отличий вактивности от немодифицированного МДП, стимулируя неспецифическиемеханизмы защиты от вирусных и бактериальных инфекций, высвобождениеколониестимулирующих факторов, противоопухолевую активность и синтезIL-1 макрофагами [94].А-карбоциклический нор-МДП аналог, в котором N-ацетилмурановаякислота была заменена на транс-2-[[2′-(ацетиламино)циклогексил] окси]ацетиловую группу, а D-изоглутамин на D-глутамовую кислоту, обладал тойже степенью адъювантной активности, что и немодифицированный МДП.
Вто же время данное соединение было апирогенным и менее токсичным [130].Были проведены попытки замещения N-ацетилмурановой кислоты на Nфталоитированныеаминокислотыифталамидо-дополненнуюаминоэтоксиуксусную кислоту [99, 212]. Дезмурамилпептид LK423 усиливаетсинтезIL-10клеткамиселезенокмышей,подвергшихсядействиюциклофосфороамида, а также уменьшает тяжесть декстранового колита улабораторных животных.
Это делает данное соединение базой дляперспективной разработки новых противовоспалительных препаратов. LK423стимулирует продукцию фактора некроза опухоли у культуры человеческихмононуклеарных лейкоцитов, стимулированных 13-ацетатом и иономицином34[100, 159, 165, 194]. Аналоги LK 415 и LK 517 с добавлением Адамантана, атакже LK 423 являются регуляторами синтеза IL-12 и IFN-γ. Фосфонатныйучасток, введенный в LK 415 играет ключевую роль в усилении синтезацитокинов T-клетками [144, 213].
В ходе исследований было обнаружено, чтоDFK1012, производное МДП, обладает выраженным противовоспалительнымэффектом. Данное свойство этого соединения является следствием еговзаимодействия с TLR и NLR рецепторам.3.3.5. Влияние модификаций агликона на иммунотопопнуюактивность гликозидов МДПГидроксильная группа в положении C1 может быть удалена илизаменена тиольной группой без изменения иммунотропности [108]. Замена налипофильные α- или β-бензил-гликозидные группы и 1-O-ацильные и 1-Saцильные группы, изменяет адъювантную активность соединения [109].Отдельные исследования показали, что увеличение углеродного числаагликона соответственно увеличивает способность производного МДПусиливать цитотоксичскую активность натуральных киллерных клеток.
Этиданные противоречат исследованиями, проведенным коллективом во главе сО.В. Калюжиным [13]. 1-O-ариловый и 1-S-ариловые аналоги показали вэкспериментах способность стимулировать устойчивость макроорганизма кбактериальному заражению. Замещение в ароматическом кольце можетвызывать изменение цитолитической активности по отношению к клеткамлинии K562. На это указывает отсутствие заметного цитолитического эффектау незамещенного фенил-тиогликозида в отличие от его замещенных аналогов[213]. Некоторые исследования показали наличие большего адъювантногоэффекта у β-метилгликозида МДП по сравнению с α-метил гликозидом [63].Другие исследования показали полное отсутствие иммунотропности у αгликозидов МДП, что говорит о важности конформационной структурыгликозидов при их распознавании NOD2 рецептором.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
