Диссертация (Исследования по разработке и стандартизации комплексного урологического растительного средства), страница 11

Скорость подачиэлюента и продолжительность анализа для фенольных соединений и арбутина – 0,8мл/мин и 70 мин; для сахаров и органических кислот – 1 мл/мин и 20,38 мин. Объемпробы 50 мкл [110, 112, 118].Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора «Gilson» UV/VISмодель 151, при длине волны для фенольных соединений и арбутина – 254 нм; длясахаров и органических кислот – 190 нм [110, 112, 118, 180].Идентификацию разделенных веществ проводили путем сопоставлениявремен удерживания пиков, полученных на хроматограмме компонентов смеси, современами удерживания стандартных образцов.Фенольные соединенияКачественное определение фенольных соединений в сбореПробу сырья (анализируемый сбор) измельчали до величины частиц,проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

Далее отмеряли точнуюнавеску сбора массой 3,0 г, помещали в колбу (объемом 150 мл), добавляли 60 мл70% этилового спирта. Колбу с навеской в спиртоводной смеси соединяли собратным холодильником и нагревали на кипящей водяной бане с моментазакипания в течении 1 ч. Охлаждали при комнатной температуре в естественныхусловиях. После охлаждения для отделения частиц сырья от полученной вытяжкипроводили фильтрование через фильтровальную бумагу в мерную колбувместимостью 100 мл. Полученный объем вытяжки доводили до метки69соответствующим растворителем – 70% этиловым спиртом (испытуемый раствор)[118].По 50 мкл испытуемого раствора и СО образцов вводили в хроматограф ихроматографировали при вышеуказанных условиях.Качественное определение фенольных соединений в экстракте сухомТочную навеску экстракта сухого массой 0,5 г помещали в колбу (объемом150 мл), прибавляли 20 мл 70% этилового спирта.

Колбу оставляли навибрационном встряхивателе на 30 мин, далее помещали в ультразвуковую банюна 20 мин. Для отделения нерастворившихся частиц экстракта от полученногораствора проводили фильтрование через фильтровальную бумагу в мерную колбувместимостью 100 мл. Полученный объем раствора доводили до меткисоответствующим растворителем – 70% этиловым спиртом (испытуемый раствор).По 50 мкл испытуемого раствора и растворов СО вводили в хроматограф ихроматографировали при вышеуказанных условиях.Приготовление растворов стандартных образцов для ВЭЖХ анализафенольных соединений: точную навеску СО массой по 0,05 г рутина, кофейнойкислоты, кверцетина, лютеолина, цикориевой кислоты, лютеолин-7-гликозида,галловой кислоты, хлорагеновой кислоты, изоферуловой кислоты, эллаговойкислоты, коричной кислоты, неохлорагеновой кислоты, гиперозида, геспередина,апигенина, нарингенина, феруловой кислоты, эпикатехина, катехина, кемпферола,дикумарина, метоксикумарина, арбутина, эпигаллокатехингаллата помещали вмерные колбы (объемом 100 мл), растворяли в 50 мл 70% этилового спирта идоводили тем же растворителем до метки – 70% этиловым спиртом.Органические кислоты и сахараКачественное определение органических кислот и сахаров в сбореПробу сырья (анализируемый сбор) измельчали до величины частиц,проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

Далее отмеряли точнуюнавеску сбора массой 4,0 г, помещали в колбу (объемом 100 мл), добавляли 80 млводы очищенной. Колбу с навеской в водной смеси соединяли с обратнымхолодильником и нагревали на кипящей водяной бане с момента закипания в70течении 1 ч. Охлаждали при комнатной температуре в естественных условиях.После охлаждения для отделения частиц сырья от полученной вытяжки проводилифильтрование через фильтровальную бумагу в мерную колбу вместимостью 100мл. Полученный объем вытяжки доводили до метки соответствующимрастворителем – водой очищенной (испытуемый раствор) [110].По 50 мкл испытуемого раствора и растворов СО сахаров: рамнозы, ксилозы,мальтозы, сорбитола, глюкозы, арабинозы, сахарозы, фруктозы, галактозы и СОорганических кислот: аскорбиновой, лимонной, щавелевой, яблочной (маликовой),янтарной, виннокаменной кислот вводили в хроматограф и хроматографировалипри вышеуказанных условиях [110].Качественное определение органических кислот и сахаров в экстрактесухомТочную навеску экстракта сухого массой 0,5 г помещали в колбу (объемом50 мл), прибавляли 20 мл воды очищенной.

Колбу оставляли на вибрационномвстряхивателе на 30 мин, далее помещали в ультразвуковую баню на 20 мин. Дляотделения нерастворившихся частиц экстракта от полученного раствора проводилифильтрование через фильтровальную бумагу в мерную колбу вместимостью 100мл. Полученный объем раствора доводили до метки соответствующимрастворителем – водой очищенной (испытуемый раствор).По 50 мкл испытуемого раствора и растворов СО сахаров: рамнозы, ксилозы,мальтозы, сорбитола, глюкозы, арабинозы, сахарозы, фруктозы, галактозы и СОорганических кислот: аскорбиновой, лимонной, щавелевой, яблочной (маликовой),янтарной, виннокаменной вводили в хроматограф и хроматографировали привышеуказанных условиях.Приготовление растворов стандартных образцов для ВЭЖХ анализасахаров: точную навеску СО массой по 0,60 г рамнозы, ксилозы, мальтозы,сорбитола, глюкозы, арабинозы, сахарозы, фруктозы, галактозы помещали вмерную колбу (объемом 50 мл), растворяли в 25 мл 0,005М раствора сернойкислоты и доводили тем же растворителем до метки, перемешивали.71Приготовление растворов стандартных образцов для ВЭЖХ анализаорганических кислот: точную навеску СО массой по 0,025 г аскорбиновой,лимонной, щавелевой, яблочной (маликовой), янтарной, виннокаменной кислотпомещали в мерную колбу (объемом 50 мл), растворяли в 25 мл 0,005М растворасерной кислоты и доводили тем же растворителем до метки.АрбутинКоличественное определение арбутина в сбореПробу сырья (анализируемый сбор) измельчали до величины частиц,проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

Далее отмеряли точнуюнавеску сбора массой 3,0 г, помещали в колбу (объемом 150 мл), добавляли 60 мл70% этилового спирта. Колбу с навеской в спиртоводной смеси соединяли собратным холодильником и нагревали на кипящей водяной бане с моментазакипания в течении 1 ч. Охлаждали при комнатной температуре в естественныхусловиях. После охлаждения для отделения частиц сырья от полученной вытяжкипроводили фильтрование через фильтровальную бумагу в мерную колбувместимостью 100 мл.

Полученный объем вытяжки доводили до меткисоответствующим растворителем – 70% этиловым спиртом (испытуемый раствор).По 50 мкл испытуемого раствора и раствора СО арбутина вводили вхроматограф и хроматографировали при вышеуказанных условиях.Расчёт количественного содержания арбутина в сборе производили методомабсолютной калибровки с помощью компьютерной программы «Мультихром для«Windows» и по формуле (1):Sис × Сст. × 100 × 100 × 100.С (%) =Sст. × 25 × а × (100 – W),гдеS ис. – площадь пика арбутина в испытуемом растворе;S ст. – площадь пика раствора СО арбутина;С (%) – концентрация арбутина, %;С ст. – масса СО арбутина, г;(1)72а – масса навески изучаемого сбора, г;W – потеря массы при высушивании изучаемого сбора, % [112].Количественное определение арбутина в экстракте сухомТочную навеску экстракта сухого массой 0,5 г помещали в колбу (объемом150 мл), прибавляли 20 мл 70% этилового спирта.

Колбу оставляли навибрационном встряхивателе на 30 мин, далее помещали в ультразвуковую банюна 20 мин. Для отделения нерастворившихся частиц экстракта от полученногораствора проводили фильтрование через фильтровальную бумагу в мерную колбувместимостью 100 мл. Полученный объем раствора доводили до меткисоответствующим растворителем – 70% этиловым спиртом (испытуемый раствор).По 50 мкл испытуемого раствора и растворов СО вводили в хроматограф ихроматографировали при вышеуказанных условиях.Расчётколичественногосодержанияарбутинавэкстрактесухомпроизводили методом абсолютной калибровки с помощью компьютернойпрограммы «Мультихром для «Windows» и по формуле (2):Sис × Сст.

× 100 × 100 × 100.С (%) =Sст. × 25 × а × (100 – W),(2)гдеS ис. – площадь пика арбутина в испытуемом растворе;S ст. – площадь пика раствора СО арбутина;С (%) – концентрация арбутина, %;С ст. – масса навески СО арбутина, г;а – масса навески экстракта сухого, г;W – потеря в массе при высушивании экстракта сухого, %.Приготовление растворов стандартных образцов для ВЭЖХ анализаарбутина: точную навеску СО массой 0,0103 г арбутина помещали в мерную колбу(объемом 25 мл), растворяли в 20 мл 70% спирта этилового и доводили тем жерастворителем до метки – 70% этиловым спиртом, перемешивали.732.3.4 СпектрофотометрияСпектрофотометрический анализ фенольных соединений, полисахаридов(инулина), флавоноидов проводили на саморегистрирующем спектрофотометре«Helios Alfa» (Spectronic Unicam, Великобритания).

Кювета с толщиной слоя 10 мм.Фенольные соединенияОбнаружение фенольных соединений в сбореПробу сырья (анализируемый сбор) измельчали до величины частиц,проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Далее отмеряли точнуюнавеску сбора массой 10,0 г, помещали в колбу (объемом 200 мл), добавляли 70 мл70% этилового спирта.

Колбу с навеской в спиртоводной смеси соединяли собратным холодильником и нагревали на кипящей водяной бане с моментазакипания в течение 1 ч. Охлаждали при комнатной температуре в естественныхусловиях. После охлаждения для отделения частиц сырья от полученной вытяжкипроводили фильтрование через фильтровальную бумагу в мерную колбувместимостью 100 мл. Полученный объем вытяжки доводили до меткисоответствующим растворителем – 70% этиловым спиртом (раствор А).10 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводилисоответствующим растворителем до метки, перемешивали и снимали спектрпоглощения в диапазоне длин волн 220-360 нм.Параллельно снимались УФ-спектры растворов СО: арбутина, рутина,кверцетина, галловой кислоты, лютеолина, кофейной кислоты, лютеолин-7гликозида, кемпферола, хлорогеновой кислоты, апигенина, гиперозида и водноспиртовых извлечений компонентов, входящих в сбор.Обнаружение фенольных соединений в сырье – компонентах сбораПробы сырья травы хвоща полевого, листьев брусники, травы полыниобыкновенной, плодов укропа огородного, корней лопуха измельчали до величинычастиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.