Диссертация (Исследования по разработке и стандартизации комплексного урологического растительного средства)

федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образованияПервый Московский государственный медицинский университет имени И.М. СеченоваМинистерства здравоохранения Российской Федерации(Сеченовский Университет)На правах рукописиСМЫСЛОВА ОЛЬГА АЛЕКСАНДРОВНАИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ И СТАНДАРТИЗАЦИИКОМПЛЕКСНОГО УРОЛОГИЧЕСКОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозияДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степени кандидата фармацевтических наукНаучный руководитель:кандидат фармацевтических наук, доцентЛитвинова Татьяна МихайловнаМосква – 20182ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ………..…………………………………………………….…………..…5ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………………121.1 Распространенность мочекаменной болезни, её роль в структуреурологических заболеваний…………………………………………………………..121.2 Этиология и патогенез мочекаменной болезни………………………………….121.3 Фармакотерапия уролитиаза……………………………………………………...141.4 Лекарственные растительные средства в профилактике илечении заболеваний мочевыводящих путей……………….……………………….201.4.1 Листья брусники……………………………………………………….………...311.4.2 Трава хвоща полевого…………………….……………………………………..351.4.3 Корни лопуха………….…………………………………………………………391.4.4 Плоды укропа огородного……….……………………………………...………431.4.5 Трава полыни обыкновенной…….……………………………………………..461.5 Характеристика сборов, как лекарственных препаратов…...…………………..491.6 Сухие экстракты.

…………………………………………..……………………...521.7 Физико-химические методы анализа основных БАВ сбора…………………….521.7.1 Методы определения фенольных соединений…………………………………521.7.2 Методы определения полисахаридов…………………………………………..541.7.3 Методы определения эфирных масел………………………………………54ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 1………………………………………………………...……..56ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ………………………...572.1 Объекты исследования…….……………………………………………………...572.2 Методы исследования….………………………………………………………….582.2.1 Определение показателей качества сбора и экстракта сухого………………..582.3 Фитохимические методы изучения сбора и экстракта сухого………………….592.3.1 Тонкослойная хроматография…………………………………………………..612.3.2 Газожидкостная хроматография………………………………………………..662.3.3 Высокоэффективная жидкостная хроматография……………………………..672.3.4 Спектрофотометрия……………………………………………………………..732.3.5 Титриметрические методы……………………………………………………...762.4 Биологические методы исследования………………………………………...….772.5 Валидация методик………………………………………………………………..79ГЛАВА 3 РАЗРАБОТКА СОСТАВА И СТАНДАРТИЗАЦИЯРАСТИТЕЛЬНОГО СБОРА……………………………………………………….813.1 Разработка состава растительного сбора……………….……………………......813.2 Выбор оптимального соотношения компонентов сбора….……………………..833.3 Изучение специфической фармакологической активности3изучаемого сбора ……………………………………………………………………...843.4 Изучение морфолого-анатомических признаков изучаемого сбора …………..903.4.1 Внешние признаки………………………………………………………………913.4.2 Анатомо-диагностические признаки (Микроскопия)…………………………923.5 Изучение состава БАВ сбора ………………..

………………………………….1073.5.1 Определение основных БАВ качественными реакциями в сборе……...…....1073.5.2 Идентификация БАВ методом УФ-спектрофотометрии……...……………..1083.5.3 Хроматографический анализ изучаемого сбора ………………………….….1123.5.3.1 Идентификация БАВ методом тонкослойной хроматографии………..…..1123.5.3.2 Идентификация БАВ методом высокоэффективнойжидкостной хроматографии .......................................................................................1163.5.3.3 Идентификация компонентов эфирного масламетодом газожидкостной хроматографии………………………………………….1203.6 Разработка методики количественного определениясуммы флавоноидов в изучаемом сборе……………………………………………1213.6.1 Валидация методики количественного определения суммыфлавоноидов в сборе…………………………………………………………………1253.7 Количественное определение основных БАВ в сборе ………………..………1323.8 Определение показателей доброкачественности сбора……………….………142ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 3………………………………………………….…………..145ГЛАВА 4 ПОЛУЧЕНИЕ ЭКСТРАКТА СУХОГОИ ЕГО СТАНДАРТИЗАЦИЯ……………………………………………………...1474.1 Получение экстракта сухого из сбора ………………………………………….1474.2 Лабораторная схема получения экстракта сухого из сбора ………………….1504.3 Изучение состава БАВ экстракта сухого ………………………………….……1534.3.1 Определение основных БАВ качественными реакциямив экстракте сухом ……………………………………………………………………1534.3.2 Идентификация БАВ в экстракте сухомметодом УФ-спектрофотометрии…………………………………………………..1524.3.3 Хроматографический анализ экстракта сухого……………….……………...1544.3.3.1 Идентификация БАВ методом ТСХ………..……………………….……....1544.3.3.2 Идентификация БАВ методом ВЭЖХ………….…………………………..1564.4 Разработка методики количественного определениясуммы флавоноидов в экстракте сухом……………………………………………..1604.4.1 Валидация методики количественного определениясуммы флавоноидов в экстракте сухом……………………………………………..1624.5 Количественное определение основных БАВ в экстракте сухом…….……….1694.6 Определение показателей качества экстракта сухого………..…………….….175ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 4………………………………..…………………………….1774ОБЩИЕ ВЫВОДЫ…………………………………………………………………178Практические рекомендации……………………………………………………..180Перспективы дальнейшей разработки темы…………………………………...180СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ………………………………………………………..181СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………………………182ПРИЛОЖЕНИЯ………………………………………………………………….....202Приложение 1..…………...…………………………………………………………..203Приложение 2………………………………………………..……………………….204Приложение 3……………………………………………………………..………….205Приложение 4…………………………………………….…………………………..206Приложение 5………………………………………………………………………...219Приложение 6………………………………………………………………………...220Приложение 7 ………………………………………………………………………..2235ВВЕДЕНИЕАктуальность темыСогласно данным медицинской статистики в последние десятилетиянаблюдается постоянный рост урологической заболеваемости населения, чтосвязано с одной из основных причин – недостаточной эффективностью системыпрофилактики и предотвращения заболеваний [41, 42].В структуре урологических заболеваний одно из ведущих мест занимаетмочекаменная болезнь (МКБ, уролитиаз) [4, 148, 166].Мочекаменная болезнь приводит к длительной потере трудоспособности иинвалидизации населения.

Кроме того, характерной особенностью заболеванияявляется высокая частота рецидивов [132, 137, 143, 191]. Эффективная терапия ипрофилактика МКБ включает методы воздействия, направленные на устранениеэтиологических факторов болезни и патогенетических условий камнеобразования.[2, 64]. Для профилактики заболеваний мочевыводящих путей, а также в качествеэффективнойсоставляющейконсервативногопредставляютмногокомпонентныесредстваналечения,основеособыйинтересфармацевтическихсубстанций растительного происхождения, сборы, обладающие комплекснымдействием на этиопатогенез заболевания. Растительные сборы отличаются мягкимдействием, отсутствием побочных эффектов, что делает возможным их длительноеприменение для обеспечения многонаправленного действия при хроническомтечении МКБ [54, 78].На сегодняшний день в Государственном реестре лекарственных средствзарегистрированы 6 растительных сборов, которые рекомендованы в комплекснойтерапии урологических заболеваний [30].

Но растительных композиций,предназначенных для консервативного лечения и профилактики мочекаменнойболезни, зарегистрированных и официально разрешенных, нет. Таким образом,имеется потребность в расширении ассортимента комплексных растительныхпрепаратов российского производства, что позволит обеспечить индивидуальныйподход к выбору фармакотерапии заболеваний мочевыводящих путей и расширитьвозможности консервативного лечения мочекаменной болезни.6Поэтому разработка и внедрение оригинального сбора, предназначенного дляконсервативного лечения и профилактики мочекаменной болезни, являетсяактуальной задачей.Степень разработки темы исследованияРазработкой многокомпонентных растительных сборов, предназначенныхдля профилактики и лечения группы инфекционно-воспалительных заболеваниймочевыводящих путей, занимались О.А. Елецкая, М.В.

Бабаева, А.Д. Таляль.Анализ литературных данных показал, что имеются сведения об изучениидоклинических исследований растительной композиции, предназначенной дляпревентивнойтерапииуролитиаза(И.С.Бутуханова),безпроведенияфармакогностических исследований.В настоящий момент сбор для консервативного лечения и предупреждениямочекаменной болезни отсутствует, что делает разработку и исследованиеактуальным.Цель и задачи исследованияЦелью исследования диссертационной работы является разработка истандартизация комплексного урологического растительного средства.Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:1.Провести информационно-аналитического исследование урологическихлекарственных средств;2.Обосноватьсоставрастительныхкомпонентовиоптимальноеихсоотношение в сборе;3.Провести фармакогностическое исследование растительного сбора (изучениевнешних и микроскопических признаков, числовых показателей, методиккачественного и количественного анализа);4.Получить экстракт сухой на основе изучаемого сбора и провести изучениесостава БАВ;5.Разработатьметодикиоценкифлавоноидов в сборе и экстракте сухом;количественногосодержаниясуммы76.Определить показатели качества сбора, экстракта сухого и установить ихнормы;7.Провестиизучениеспецифическойфармакологическойактивностикомплексного урологического сбора in vivo на экспериментальной моделимочекаменной болезни;8.На основании результатов исследования разработать проект НД накомплексный урологический сбор - «Фитоурол».Научная новизнаНа основании данных обзора литературных источников, фармакологическихи фитохимических исследований впервые был обоснован состав и оптимальноесоотношение компонентов сбора «Фитоурол»,включающего пять видоврастительного сырья: брусники листья, хвоща полевого трава, лопуха корни,укропа огородного плоды, полыни обыкновенной трава.С использованием различных методик in vivo, впервые установлено, чтоводное извлечение комплексного урологического растительного средства вэкспериментально-терапевтическойдозеобладаетвыраженнойфармакотерапевтической эффективностью при экспериментальном уролитиазе,индуцированным внутрижелудочным введением витамина Д 2, способствуянормализации морфофункционального состояния почек лабораторных животныхна стадиях патологического процесса.Сприменениемсовременныхинструментальныхфизико-химическихметодов (ТСХ, ВЭЖХ, СФМ) в сборе идентифицированы: флавоноиды (рутин,гиперозид,лютеолин,лютеолин-7-гликозид,кверцетин,нарингенин),фенологликозид (арбутин), фенолкарбоновые кислоты (галловая, эллаговая),гидроксикоричныекислоты(хлорогеновая,феруловая,неохлорогеновая,изоферуловая, кофейная, цикориевая, коричная), свободные сахара (фруктоза,сахароза, глюкоза), производные дубильных веществ (эпикатехин, катехин,эпигаллокатехингаллат), кумарины (дикумарин, метоксикумарин) и органическиекислоты (янтарная, щавелевая); исследован компонентный состав эфирного масласбора; проведено определение содержания: экстрактивных веществ, флавоноидов,8арбутина, эфирных масел, полисахаридов (инулина), дубильных веществ,органических кислот.Получен экстракт сухой из разработанного сбора: установлена зависимостьвыхода БАВ от условий экстрагирования (тип экстрагента, измельченность сырья,соотношение сырья и экстрагента, температурный режим, кратность и времяэкстракции), определены параметры сушки экстракта сухого; установлен составБАВ экстракта сухого.Определены критерии подлинности (внешние признаки, микроскопия,хроматографические характеристики), показатели качества (влажность, зола общаяи зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте, измельченность, примеси),показатели безопасности (радионуклиды, микробиологическая чистота) сбора;определены показатели качества экстракта сухого (описание, потеря в массе привысушивании) и показатели безопасности (радионуклиды).

Разработаны ивалидированы методики количественного определения суммы флавоноидов впересчете на лютеолин-7-гликозид.Теоретическая и практическая значимость исследованияПредставленный в исследовании экспериментальный материал можетслужить теоретической базой для создания и исследования новых урологическихлекарственных растительных средств.