Диссертация (Морфология лимфатических сосудов и узлов при компрессионной травме конечностей и коррекции инфузией перфторана (анатомо-экспериментальное исследование)), страница 7

15. Количество измерений по звеньям лимфатического русла в вариационном ряду составляло не менее 50 [76, 138].б) для проведения морфометрического анализа лимфатических узлов использовался основной принцип стереологии, согласно которому часть среза, занятая сечением какого-либо компонента, соответствует части объема, занимаемого соответствующим компонентом. Морфометрический анализ структурлимфатического узла проводили методом точечного счета [2, 3, 7, 138] с использованием бинокулярного микроскопа «МБС-9» с окулярным микрометром и морфометрической сеткой при увеличениях от 8 х 2 до 8 х 7 (в зависимости от размеров лимфатического узла), а также микроскопа МБИ-1 с морфометрической сеткой, вмонтированной в окуляр 10х (объектив 90) и гематологического счетчика форменных элементов крови [127]. Производилосьизмерение размеров лимфатических узлов.

Используя принципы стереометрии и метод наложения точечных морфометрических сеток, определяли количество узловых точек сетки, попадающих на каждую структуру лимфатического узла. Принимая площадь среза за 100%, находили относительнуюплощадь капсулы, краевых синусов, лимфоидных узелков с центрами размножения, межузелковой зоны, глубокой зоны коры, мякотных тяжей, мозговых синусов. Рассчитывали соотношение удельной площади коркового вещества к удельной площади мозгового (корково-мозговой индекс - К/М) длялимфатических узлов в каждой экспериментальной группе. Выделениеструктурных компонентов и дифференцировку клеточных форм в лимфатических узлах производили с учетом международной гистологической номенклатуры [1, 11].

Клетки подсчитывались на срезах в 5 полях зрения: в меж34узелковой зоне, центрах размножения, мякотных тяжах и мозговых синусах.В последующем производился перерасчет на 1 мм2 площади среза для объективной оценки клеточных сдвигов в лимфатических узлах в динамике РППСДС и на этапах его коррекции. Коэффициент перерасчета клеток на 1 мм2площади нами найден эмпирически (для нашей сетки составляет 0,25 х 103).Количество клеток, попадаемых на узловые точки сетки С.Б. Стефанова в 5полях зрения, умножали на 0,25 и получали количество клеток на 1 мм2 площади. В среднем подсчитано 30 полей зрения для каждой из указанныхструктур [7,118, 119,138].2.3.

Методы статистической обработки биологического материалаВсе полученные количественные и качественные данные в выборкахподвергались статистической обработке, используя пакет прикладных программ «Statistika» фирмы Statsoft, jns. (2001), Version 6.0. Показатели представлены в форме М±m, где М – среднее арифметическое, а m – ошибкасреднего. Значимость различия параметрических данных с правильным распределением оценивали, используя t критерий Стьюдента (в ряде случаев споправкой Йейтса), а при неправильном распределении данных – по критерию Крускала-Уоллиса. Разницу долей оценивали с применением z-критерияпосле фи- преобразования данных.

За критический уровень критерия былпринят уровень достоверности при Р = 0,05. Полученная информация позволила оценить достоверность различий величин и сделать корректные заключения по результатам исследований.35Глава 3. Результаты собственных исследований3.1.Морфологическаяхарактеристикавнутриорганноголимфатического русла фиброзной капсулы почки, брыжейки тонкойкишки, мышечной части диафрагмы и подкожной фасции бедра уинтактных животныхА. Морфология внутриорганного лимфатического русла фиброзной капсулы почки у интактных крысНа импрегнированных микропрепаратах микроциркуляторное русло(МЦР) капсулы почки крыс представлено однослойной капиллярной сетью,включающей кровеносные и лимфатические звенья. Основные микроциркуляторные блоки здесь имели модульное расположение.

На импрегнированных пленочных препаратах ФКП, чаще, чем в БТК выявляются звенья лимфатического русла. На рисунке 1 представлен лимфатический капилляр ввиде характерного «слепого» выроста с относительно четкими и ровнымиконтурами, а также прямолинейным ходом.ЛКРис.1. Лимфатический капилляр (ЛК) в виде «слепого» выроста с ровными,четкими контурами в ФКП интактной крысы. Импрегнация серебром по В.В.Куприянову. Микрофото. Ув. х 10036Морфометрия показала, что диаметр лимфатических капилляров ФКПколеблется от 14 до 82 мкм и в среднем составляет 49,0 ± 0,02 мкм. Учитываявысокую вариабельность границ колебания диаметров, мы выделили двегруппы лимфатических капилляров: 1) мелкие капилляры, имеющие диаметры от 14 до 48 мкм, доля которых в выборке составила 56%; 2) крупные капилляры, имеющие диаметры от 49 до 82 мкм, на долю которых приходилось44% выборки (табл.

2 и 3).В стенках капилляров постепенно увеличивается количество эндотелиальных клеток, а в их просвете появляются клапаны. Капилляры, сливаясь иувеличиваясь в диаметре, формируют собирательные лимфатические сосуды,которые имели прямолинейный или слегка волнистый ход и нередко сопровождались кровеносными капиллярами.

Стенки лимфатических сосудов характеризовались более плотной концентрацией круглых и овальных по форме ядер клеток эндотелия. Морфометрия показала, что диаметр лимфатических сосудов колеблется в пределах от 35 до 157 мкм, в среднем составляет94,4 ± 0,01мкм. Лимфатические сосуды также подразделили на две группы. Кпервой группе отнесли сосуды диаметром от 35 до 96 мкм, которые составляли 55%, а к сосудам 2-й группы – диаметром от 97 до 157 мкм, которые составляли 45%.

(табл. 2 и 3).Б. Морфология внутриорганного лимфатического русла брыжейки тонкой кишки (БТК) интактных крысНа микропрепаратах БТК, импрегнированных азотнокислым сереброммы выявили основные звенья лимфатического русла, которые обнаруживались наряду с гемомикроциркуляторным. Однако необходимо подчеркнуть,что на одном и том же препарате лишь иногда удавалось проследить все звенья лимфоносного русла, в отличие от кровеносного. Модульное строениемикроциркуляторного русла подтвердило изучение импрегнированных пленочных препаратов БТК. Анатомически лимфатические капилляры также,как и в ФКП, имели вид «слепо» начинающихся микротрубочек, имеющихтонкую стенку, состоящей из одного слоя эндотелиальных клеток.37Необходимо отметить контуры лимфатических капилляров которыечаще были четкими и относительно ровными (рис.2).ЛКРис.2.

Фрагмент лимфатического капилляра (ЛК) с чёткими, относительноровными контурами в БТК интактной крысы. Импрегнация серебром по В.В.Куприянову. Микрофото. Ув. x 200Морфометрический анализ диаметра лимфатических капилляров выявил значительное превосходство над диаметром кровеносных капилляров,который варьировал в пределах от 10 до 124 мкм и в среднем составлял65,3±0,01 мкм. Капилляры диаметром от 10 до 67 мкм мы отнесли к первойгруппе, которые составили 30% в выборке капилляров. Вторая группа капилляров имела диаметр от 68 до 124 мкм, доля которых в выборке составила70%.Появление одно- или двустворчатых клапанов, образованных складками всей стенки сосуда указывало на переход лимфатические капилляров БТКв лимфатические сосуды с (рис.3).38КЛСРис.3.

Фрагмент лимфатических сосудов (ЛС) БТК интактной крысы с заметным сужением диаметра в области расположения клапанов (К). Импрегнация серебром по В.В. Куприянову. Микрофото. Ув. x 100Чаще всего лимфатические сосуды располагаются независимо от кровеносных и в стенке их обнаруживались хорошо дифференцируемые клапаны. Диаметры лимфатических сосудов варьировали в пределах от 50-156 мкми в среднем составляли 102,7±0,06 мкм (табл. 2).В общей выборке по диаметру лимфатических сосудов мы также ихподразделили на две группы.

Сосуды 1-й группы более мелкие, диаметром от50 до 103 мкм, сосуды 2-й группы крупные, диаметром от 104 до 156 мкм. Вобщей выборке лимфатических сосудов, сосуды 1-й группы составили 60%, а2-й группы – 40% (табл. 3).В. Морфология внутриорганного лимфатического русла мышечнойчасти диафрагмы интактных крысМышечная часть диафрагмы в качестве объекта была выбрана для изучения влияния интоксикации РПП СДС тяжелой степени на соматическуюмышцу. Данная мышца у крыс является тонкой, и может быть импрегнирована тотально. Ее стабильная функциональная отягощенность исключает выявление дополнительных сосудистых изменений, связанных с рабочей гиперемией или гиподинамией.39Анатомически в МЧД кровеносное МЦР сформировано по типу объемного сплетения [28,76, 138].

На ряде импрегнированных пленочных препаратов мышечной части диафрагмы, удалось выявить наряду с кровеноснымизвеньями микроциркуляторного русла и лимфатические звенья.Лимфатические сосуды имели относительно ровные, четкие контуры,характеризовались прямолинейным ходом. Стенка лимфатических сосудовносит тонкостенный характер, с клапанами в виде дубликатуры эндотелия.(рис. 4).КЛСРис.4. Фрагмент лимфатического сосуда (ЛС) МЧД интактной крысы с клапаном (К), имеющий ровные четкие контуры и прямолинейный ход.