Определение флавоноидов горянки и их метаболитов методом тандемной хроматомасс-спектрометрии высокого разрешения, страница 23

Для контроляпромежуточной прецизионности используют рабочие пробы образцовбиологически активных добавок или ОО.Отобранные пробы анализируют по прописи настоящей методикиизмерений в условиях промежуточной прецизионности при соблюденииусловий и сроков хранения проб (два аналитика с разными наборами мернойпосуды, разными партиями реактивов, в разное время). При контролепромежуточнойпрецизионности с использованием ОО готовят двапараллельных образца, которые анализируют в условиях промежуточнойпрецизионности.Получают, соответственно, массовые концентрации C1 и C2 , мг вкапсуле (флаконе).Полученные результаты( C1 , C2 ) считаются удовлетворительными приусловииС 1 - С2 ≤ Rабс,гдеRабс – абсолютноезначение(9)пределапромежуточнойпрецизионности, мг в капсуле (флаконе), рассчитывается по формулеRабс  0,01  R  C ,(10)170гдеR – относительноезначениепределапромежуточнойпрецизионности, %, приведенное в таблице 4;С – среднееарифметическое значение результатов измерений,полученных в условиях промежуточной прецизионности, мг в капсуле(флаконе), рассчитывается по формулеCC1  C 22(11)Если условие (9) не выполняется, выясняют причины превышениянорматива промежуточной прецизионности, устраняют их и повторяютвыполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.13.3 Оперативныйконтрольпроцедурыанализа(контрольточности)Оперативный контроль процедуры анализа осуществляют на основеоценки точности (погрешности) результатов анализа при реализацииотдельно взятой контрольной процедуры с использованием ОО с учетомтребований ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.При проведении оперативного контроля рассчитывают результатконтрольной процедуры, норматив контроля точности и проводят сравнениерезультата контрольной процедуры с установленным нормативом контроляточности.Результат контроля считают удовлетворительным, если выполняетсяусловиеСатт  С  К абсгдеКабс – абсолютноезначение,норматива(12)контроляточности(погрешности), мг в капсуле (в флаконе), рассчитывается по формулеКабс = 0,01  К  Сатт,(13)171гдеСатт – опорноезначениесодержанияикариина,икаритина,икаризида I, икаризида II, эпимедина А, эпимедина В и эпимедина С в ОО, мгв капсуле (в флаконе);С – результат анализа ОО (среднее арифметическое результатовдвухпараллельныхопределенийсодержанияикариина,икаритина,икаризида I, икаризида II, эпимедина А, эпимедина В и эпимедина С в ОО),мг в капсуле (флаконе);К – норматив контроля точности (погрешности), %.Если условие (12) не выполняется, выясняют причины превышениянорматива контроля точности, устраняют их и повторяют выполнениеизмерений в соответствии с требованиями методики измерений.Периодичностьоперативногоконтроляпроцедурыанализарегламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.Проведение оперативного контроля является обязательным при сменепартии реактивов, набора мерной посуды, хроматографической кварцевойкапиллярной колонки, а также после промывки детектора, поверкихроматографа и ремонта используемого оборудования.В таблице 5 приведены значения показателей качества методики,которые используются при установлении показателей качества результатовизмерений при реализации методики измерений в лаборатории и контролестабильности результатов измерений (среднеквадратического отклоненияповторяемости σrл, среднеквадратического отклонения внутрилабораторнойпрецизионности σRл и погрешности результатов измерений ±Δл).Таблица 5 – Значения показателей точности, правильности, повторяемостипромежуточной прецизионности методики при доверительной вероятности Р=0,95Диапазонизмерений,мг в капсуле(флаконе)0,1 до 50,0включительноиПоказательПоказательпромежуточнойПоказатель правильностиповторяемости (среднеепрецизионности(границы, в которыхквадратическое(среднее квадратическое находится неисключеннаяотклонениеотклонениесистематическаяповторяемости)промежуточнойпогрешность методики),σr, %прецизионности)±ΔС, %σ R, %69617213.4 Контроль стабильности результатов измеренийКонтроль стабильности результатов измерений при реализацииметодики в лаборатории осуществляют в соответствии с разделом 6 ГОСТ РИСО 5725 и разделами 6-8 РМГ 76-2004.Процедуры и периодичность контроля стабильности результатованализа (на основе контроля стабильности СКО повторяемости σrл, СКОвнутрилабораторнойпрецизионностиσRли/илипогрешности±Δл)регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.14 Оформление результатов измеренийРезультаты измерений содержания икариина, икаритина, икаризида I,икаризида II, эпимедина А, эпимедина В и эпимедина С представляют в виде:С (мг в капсуле (флаконе)), характеристика погрешности δ (%), Р = 0,95или (С ± Δ ), мг в капсуле (флаконе), Р=0,95,где С – среднее арифметическое результатов n определений,признанных приемлемыми по 12.2, мг в капсуле (флаконе);Δ – абсолютная погрешность определения содержания анализируемоговещества, мг в капсуле (флаконе).Значение Δ, мг в капсуле (флаконе), рассчитывают по формулеΔ = δ ×С × 0,01,(14)где δ – границы относительной погрешности определения содержанияикариина, икаритина, икаризида I, икаризида II, эпимедина А, эпимедина В иэпимедина С, δ = ± 17 %.Числовыезначениямассовойдолиипогрешностидолжныоканчиваться цифрой одного и того же разряда.Результаты хромато-масс-спектрометрического анализа оформляютзаписью в рабочем журнале по форме, принятой на предприятии,использующем данную методику измерений.173Результаты измерений оформляют протоколом КХА, рекомендуемаяформа которого приведена в приложении Б.Результатыизмеренийудостоверяютсялицом,проводившимизмерения, утверждаются начальником лаборатории, а при необходимости –руководителем (главным метрологом) организации, подпись которыхзаверяется печатью организации (предприятия).174Приложение (обязательное)Процедура приготовления образцов для оцениванияОбразцы для оценивания предназначены для набора статистическихданных, необходимых для установления метрологических характеристикметодики измерений и для проведения контроля качества измерений.Образцами для оценивания являются сухие биологически активныедобавкисвнесеннойвнихдобавкойаттестованногорастворасаттестованным значением определяемого компонента.А.1 Приготовление аттестованных растворов (АР)А.1.1 Приготовлениеикаритина,икаризида I,промежуточныхикаризида II,растворовэпимедина А,(ПР)икариина,эпимедина Виэпимедина С в метиловом спирте с концентрациями 100,0 мг/мл.Ввиалевместимостью15 мл(7.3.1)навесахлабораторныхэлектронных (7.1.2) взвешивают (100,0 ± 0,1) мг лабораторного образцаикариина (7.4.4 ).Количество метилового спирта V, мл, которое необходимо добавитьдля приготовления ПР, вычисляется по формулеVm с  100(А.1)где μ – массовая доля икариина в лабораторном образце, %, указанная впаспорте (7.4.4 );m – масса навески икариина, мг;с – концентрация икариина в ПР, с = 100,0 мг/мл.Расчетное количество метилового спирта (7.4.1) отбирают дозатороммеханическим с варьируемым объемом дозирования (1,0-5,0) мл (7.1.4) ивносят в виалу с навеской.

Полученный раствор тщательно перемешивают сиспользованием орбитального шейкера (7.2.7).Приготовленный раствор обрабатывают в ультразвуковой ванне (7.2.2)в течение 5 минут.175Аналогичным образом готовят ПР для икаритина (7.4.5), икаризида I(7.4.6), икаризида II (7.4.7), эпимедина А (7.4.8), эпимедина В (7.4.9) иэпимедина С (7.4.10).ПослеприготовленияПРнавиалынаклеиваютэтикеткиснаименованием растворов, их концентраций и датой приготовления.Срок хранения ПР икариина, икаритина, икаризида I, икаризида II,эпимедина А, эпимедина В и эпимедина С в метиловом спирте притемпературе (4,0±1,0) С – не более 7 сут.Относительная погрешность приготовления ПР не превышает 0,86 %.А.1.2 ПриготовлениеАР № 1икариина,икаритина,икаризида I,икаризида II, эпимедина А, эпимедина В и эпимедина С в метиловом спирте сконцентрацией 10,0 мг/мл.Дозатором механическим с варьируемым объемом дозирования(0,1-1,0) мл (7.1.3) отбирают по 1,0 мл каждого из ПР икариина, икаритина,икаризида I, икаризида II, эпимедина А, эпимедина В и эпимедина С сконцентрацией 100,0 мг/мл и вносят в виалу вместимостью 15 мл (7.3.1),затем дозатором механическим с варьируемым объемом дозирования (1,05,0) мл (7.1.4) вносят 3,0 мл метилового спирта (7.4.1) и тщательноперемешивают с использованием орбитального шейкера (7.2.7).СрокхраненияАРвхолодильнике(7.2.3)притемпературе(4,0±1,0) ºС – не более 72 ч.АР соединений с массовой концентрацией 10,0 мг/мл используют дляприготовления образцов для оценивания.

Относительная погрешностьаттестованного значения массовой концентрации АР не превышает 3,04 %.А.1.3 ПриготовлениеАР № 2икариина,икаритина,икаризида I,икаризида II, эпимедина А, эпимедина В и эпимедина С в метиловом спирте сконцентрацией 1,0 мг/млДозатором механическим с варьируемым объемом дозирования (0,11,0) мл (7.1.3) в виалу вместимостью 15 мл (7.3.1) вносят 1,0 мл АР № 1икариина, икаритина, икаризида I, икаризида II, эпимедина А, эпимедина В иэпимедина С в метиловом спирте с концентрацией 10,0 мг/мл и 9,0 мл176метилового спирта (7.4.1) и тщательно перемешивают с использованиеморбитального шейкера (7.2.7).СрокхраненияАРвхолодильнике(7.2.3)притемпературе(4,0±1,0) ºС – не более 72 ч.АР № 2 икариина, икаритина, икаризида I, икаризида II, эпимедина А,эпимедина В и эпимедина С с массовой концентрацией 1,0 мг/мл используютдля приготовления образцов для оценивания.