Технология получения текстильных и гидрогелевых депо-материалов с радиопротекторными свойствами, страница 19

Согласно технологическому регламенту на выпуск салфеток «Колетекс», доза облучения составляет 15 кГр, а гелей«Колегель» – 6 кГр.Таблица 11 – Антирадикальная активность ЛП и БАВ до и после радиационной стерилизацииНаименование ЛП и БАВ1 Деринат2 Мексидол3 Метилурацил4 Мочевина5 Экстракт облепихи6 Экстракт черникиАРА, мкмоль/г препарата0 кГр6 кГр200200800800000020 00017 76050 00050 00015 кГр2008000016 16050 000Согласно полученным данным, наличие АРА до и после облучения выявлено во всех исследуемых ЛП и БАВ, кроме образцов № 3 и № 4 – в указанных образцах АРА не зафиксирована. Наибольшие значения АРА установлены для образцов № 5 и № 6.

Значения определяемогопараметра для них составили 20000 и 50000 мкмоль/г препарата соответственно, что можнообъяснить наличием в составе экстрактов из растительного сырья полифенольных соединений,а также таких групп соединений, как лигнаны, терпеноиды, каротиноиды, эффективно нейтрализующих свободные радикалы [256, 257]. Исследование облепихи, в выпускаемой как лечебный препарат форме, являющейся по своим физическим свойствам сильно маслянистым веществом, представляет значительные технические трудности, в связи с чем, в дальнейшем АРАданного БАВ нами не изучалась.Как видно из таблицы 11, АРА мексидола в отношении радикала ДФПГ превышает данный показатель по сравнению с деринатом в 4 раза.

Полученные нами относительно активностиуказанных ЛП результаты можно сопоставить с данными, полученными в работе [60], в которой АРА ЛП – дерината и мексидола (в отношении пероксильных радикалов, воздействующихна активность энзимов, приводя к нарушению метаболических процессов [255]) была исследована методом хемилюминесценции с использованием модельной реакции инициированногоокисления кумола. Экспериментально установленная эффективная константа, характеризующая78скорость взаимодействия ЛП с пероксильными радикалами составляла 1,4∙10 -4 мс-1 для дерината и 2,8∙10-4 мс-1 для мексидола [60], что согласуется с полученными нами данными.Метилурацил и мочевина не проявили АРА в отношении радикала ДФПГ, что свидетельствует о возможно другом механизме их действия, так как известно, что в экспериментах invivo и в клинических условиях данные ЛП проявляют радиозащитные свойства [204, 208, 209].В связи с этим, не проводя дальнейшие исследования АРА данных ЛП другими методами, основываясь на литературных данных, тем не менее, представляет практический интерес использовать их для создания материалов с радиопротекторными свойствами.Радиационная обработка (стерилизация) препаратов в пределах указанных параметровионизирующего излучения преимущественно не оказала влияния на уровень АРА исследуемыхсоединений – только для экстракта облепихи падение данного показателя составило 11,2 % после радиационной обработки в дозе 6 кГр и 19,2 % после обработки в дозе 15 кГр по сравнениюс исходным значением до облучения.

На основании полученных результатов (их объяснениюможет быть посвящено дополнительное исследование) можно сделать вывод, что ЛП и БАВ непретерпевают изменений по этому показателю и в технологическом процессе.Таким образом, при оценке АРА указанным методом, ЛП и БАВ выстраиваются в ряд:метилурацил = мочевина < деринат < мексидол < экстракт облепихи < экстракт черники, причем предпочтение в дальнейших исследованиях, согласно значениям АРА, следует отдать фитоэкстрактам и, в частности, экстракту черники.3.1.2 Исследование антирадикальной активности лекарственных препаратов ибиологически активных веществ с использованием радикала 1,1-дифенил-2пикрилгидразила (растворитель – этиловый спирт)Результаты определения АРА исследуемых ЛП по отношению к радикалу ДФПГприведены на рисунке 14.Как видно из представленных данных, наиболее значительное падение оптической плотности, объясняемое наличием АРА в отношении радикала ДФПГ, наблюдалось при исследовании раствора, содержащего экстракт черники (71,6 %), что может быть обусловлено наличием всоставе данного экстракта антоцианов (включают, на основании хроматографических исследований, 3-галактозиды, 3-глюкозиды и 3-арабонизиды дельфинидина, цианидина, петунидина,пеонидина, мальвидина [258]), флавоноидных гликозидов, фенолкарбоновых кислот, обладающих высокой АОА [259].Оптическая плотность D517нм,отн.ед.791,61,41,21деринат0,8ДМСО0,6мексидол0,4метилурацилэкстракт черники0,2000,250,50,7511,251,51,752Объем добавок ЛП, млРисунок 14 – Изменение оптических плотностей ДФПГ в зависимости от концентрации добавокЛП и БАВ (аналитическая длина волны измерения λ = 517 нм)Структурно важными особенностями флавоноидов, которые определяют их АРА и АОА,являются характер гидроксилирования (наличие 3',4'-дигидрокси-структуры в кольце В, и вменьшей степени в кольце А), наличие двойной связи в С2-С3 положении, наличие гидроксильной группы в А5 положении, наличие гидроксильной группы в положении С3, особенно всовокупности с 4-оксо-группой в кольце С (Рисунок 15) [256, 260, 261].Рисунок 15 – Дифенилпропановый скелет, лежащий в основе структуры флавоноидов [260]Наличие в структуре экстракта черники фенольных гидроксилов, являющихся донорамиподвижного атома водорода, приводит к их взаимодействию с образующимися в ходе реакциисвободными радикалами.

Для первичного продукта окисления фенола – фенокси-радикала, характерной является резонансная стабилизация, затрудняющая его взаимодействие с другимиреагентами, что приводит к ингибированию цепной реакции и, соответственно, к нивелированию отрицательного воздействия свободных радикалов [262].Падение оптической плотности в растворе, содержащем мексидол, составило 4,2 %, чтопозволяет говорить о возможном снижении риска повреждающего действия свободных радикалов на субклеточные структуры. Полученные данные относительно соотношения значений АРАэкстракта черники и мексидола коррелируют с результатами, изложенными в разделе 3.1.1.Представляло интерес изучить АРА ЛП – ДМСО, относительно которого имеются данные о радиозащитном эффекте [180, 210, 253]. Однако данный ЛП, так же как деринат и метилурацил, не проявляет АРА по отношению к радикалу ДФПГ.803.1.3 Исследование антирадикальных свойств лекарственных препаратов и биологическиактивных веществ по их способности взаимодействовать с супероксидныманионрадикаломСупероксидный анионрадикал Ообразуется в результате протекания процесса восста-новления кислорода и вызывает в результате цепной реакции при взаимодействии с полиненасыщенными жирными кислотами разрушение мембранных структур [255].

Нами проведены исследования АРА ЛП и БАВ по отношению к супероксидному анионрадикалу, эффективностьинактивации которого оценивали по скорости его взаимодействия с ЛП и БАВ. Результатыпредставлены в таблице 12.Таблица 12 – Относительные константы скорости взаимодействия ЛП и БАВ с супероксидныманионрадикаломЛП и БАВДеринатДМСОМексидолМетилурацилЭкстракт черники23,401,331,791,814,92Согласно полученным результатам исследования, АРА исследуемых соединений по отношению к супероксидному анионрадикалу уменьшается в следующем ряду: деринат, экстрактчерники, мексидол, ДМСО, метилурацил.

Наибольшее значение относительной константы скорости реакции отмечено для дерината.Механизм радиозащиты клеточных структур деринатом может быть обусловлен одновременным разрывом в одной спирали обеих полинуклеотидных цепей (двойной разрыв), в результате которого «обломки» молекул могут присоединиться к неповрежденным структурамДНК («сшивка») с образованием разветвленных молекул [207]. АРА в отношении супероксидного анионрадикала проявляет также экстракт черники.3.1.4 Исследование антирадикальной активности лекарственных препаратов ибиологически активных веществ по отношению к гидроксильному радикалуГидроксильный радикал ОН образуется как при радиолизе водных растворов, так и в результате взаимодействия супероксидного анионрадикала с пероксидом водорода в присутствииметаллов переменной валентности (реакция Хабер-Вейса), при каталитическом разложении перекиси водорода в присутствии ионов железа (реакция Фентона) и других перекисных соедине-81ний [263].

Гидроксильный радикал является сильным окислителем, индуцирующим пероксидацию липидов, белков и нуклеиновых кислот [146]. Результаты определения относительной константы скорости взаимодействия ЛП и БАВ с гидроксильным радикалом представлены в таблице 13. АРА исследуемых соединений по отношению к гидроксильному радикалу уменьшается в следующем ряду: мексидол, экстракт черники, ДМСО, метилурацил, деринат.Таблица 13 – Относительные константы скорости взаимодействия ЛП и БАВ с гидроксильнымрадикаломЛП и БАВДеринатДМСОМексидолМетилурацилЭкстракт черники1,02,221,31,910,0Высокий защитный эффект мексидола обусловлен АОА 3-оксипиридинов, представляющих собой группу азотсодержащих гетероциклических фенолов, являющихся синтетическими аналогами витамина В6, которая определяется полярностью ОН-связи.

Введение в молекулу электроно-донорных заместителей облегчает подвижность гидроксильного атома водорода, повышая тем самым антиоксидантные свойства соединений [264]. Экстракт черники такжепроявляет АРА в отношении гидроксильного радикала. Относительная константа скорости реакции для ДМСО составила 2,2, что позволяет говорить о вероятном наличии определенногорадиозащитного эффекта и согласуется с литературными данными о ДМСО как эффективной«ловушке» для гидроксильного радикала [253].Таким образом, на основании результатов изучения АРА исследуемых веществ различными методами, можно сделать вывод о том, что возможные радиозащитные свойства соединений нельзя сопоставлять только на основании их активности по отношению к одному конкретному радикалу.