Протокол при защите диссертации (Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов)

Протокол № 12 от 05 июня 2017 г. заседания диссертационного совета Д 212.131.06 при Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего образования «Московский технологический университет» по диссертации Макарова Дмитрия Александровича на соискание ученой степени кандидата химических наук Ведет заседание заместитель председателя диссертационного совета, доктор химических наук, профессор Миронов А.Ф.

Секретарь — ученый секретарь совета, кандидат химических наук, старший научный сотрудник Лютик А.И. Присутствовали: 22 члена диссертационного совета: академик РАН, д.х.н. Швец В.И. (03.01.06), д.х.н. Грин М.А. (02.00.10), д.х.н. Миронов А.Ф. (02.00.10), к.х.н. Лютик А.И. (02.00.10), д.х.н. Белова Л.О.

(02.00.03), д.х.н. Борисова Е.Я. (02.00.03), д.х.н. Грицкова И.А. (03.01.06), чл.-корр. РАН, д.х.н. Громов С.П. (02.00.03), д.х.н. Демидюк И.В. (03,01.06), д.х.н. Каплун А.П. (03.01.06), д.х.н. Карлов С.С. (02.00.03), д.х.н. Кедик С.А. (03.01.06), д.х.н. Кирилин А. Д. (02.00.03), д.б.н. Красильников И.В. (03.01.06), д.х.н.

Маслов М.А. (02.00.10)„д.х.н. Овчинникова Т.В. (02.00.10), д.х.н. Пономарев Г.В. (02.00.03), д.х.н. Себякин Ю. Л. (02.00.10), д.х.н. Селищева А.А. (03.01.06), д.х.н. Чупин В.В. (02.00.10), д.х.н. Шапиро Б.И. (02.00.03), д.х.н. Шуталев А.Д.(02.00.03). Повестка дня: Защита диссертационной работы Макарова Дмитрия Александровича на тему «Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов», представленной на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальности 03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии). Научный руководитель: Есипов Роман Станиславович - кандидат химических наук, старший научный сотрудник лаборатории биотехнологии Института биоорганической химии им. академиков М. М. Шемякина и Ю. А.

Овчинникова РАН. Официальные оппоненты: Клячко Наталья Львовна - профессор, доктор химических наук, профессор кафедры химической энзимол огни химического факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова»; - Лунин Владимир Глебович, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научноисследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения РФ.

Ведущая организация; Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Институт молекулярной генетики» Российской академии наук. Сообщение сведений о диссертанте ученым секретарем совета Лютик А.И. Доклад Макарова Д.А. по диссертационной работе. Ответы диссертанта на задаваемые вопросы.

Вопросы задавали: 1. Д.х.н., проф. Миронов А.Ф. (2 вопроса) 2. Д.х.н., проф. Чупин В.В. (2 вопроса) 3. Д.х.н., проф. Пономарев Г.В. (2 вопроса). 4. Д.х.н., проф. Демидюк (1 вопрос) 5. Д.б.н., проф. Красильников И.В. (1 вопрос) Выступление научного руководителя Есипова Р.С. с отзывом о диссертанте, отзыв положительный. Сообщение ученого секретаря, к.х.н. Лютик А.И. об отзыве ведущей организации, ФГБУН «Институт молекулярной генетики» РАН, отзыв положительный, содержит замечания, а также об отзывах на автореферат (4 положительных отзывов, 2 отзыва содержат замечания).

Диссертант отвечает на замечания в отзывах ведущей организации и в отзывах на автореферат. Выступление официального оппонента — доктора химических наук, профессора Клячко Натальи Львовны. Отзыв положительный, содержит замечания. Ответы диссертанта на замечания официального оппонента.

Выступление официального оппонента — доктора биологических наук Лунина Владимира Глебовича. Отзыв положительный, содержит замечания. Ответы диссертанта на замечания официального оппонента. В дискуссии по диссертационной работе приняли участие: академик РАН, д.х.н., проф. Швец В.И., д.х.н., проф. Пономарев Г.В., д.х.н., проф. Миронов А.Ф. Заключительное слово диссертанта. Выборы счетной комиссии: д.х.н.

Чупин В.В, д.х.н. Белова Л.О., к.х.н. Лютик А.И. Утверждается единогласно открытым голосованием. Счетная комиссия выдает под расписку бюллетени для тайного голосования и подводит итог голосования. Председатель счетной комиссии д.х.н. Чупин В.В. оглашает результаты голосования: Состав совета -27 человек Присутствовали: 22 члена совета (д.х.н. по 03.01.06 — 7). Роздано бюллетеней — 22. Осталось не розданных бюллетеней - 5 Оказалось в урне бюллетеней — 22. Результаты голосования по вопросу о присуждении ученой степени кандидата химических наук Макарову Д.А.: За-22. Против — нет. Недействительных бюллетеней — нет. Диссертационный совет открытым голосованием утверждает результаты тайного голосования, доложенные счетной комиссией, и постановляет присудить Макарову Д.А. ученую степень кандидата химических наук.

Диссертационный совет обсуждает проект заключения по диссертационной работе Макарова Дмитрия Александровича на тему «Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов» н после внесения изменений по предложению д.х.н. Овчинниковой Т.В. открытым голосованием единогласно принимает заключение по диссертационной работе Макарова Д.А. Диссертационный совет отмечает, что на основании выполненных соискателем исследований: разработана новая эффективная и масштабируемая технология получения рекомбинантного Тр4 человека с использованием интеин-опосредованной экспрессионной системы, обеспечивающая селект и нное высокоэффективное ацетилиро ванне рекомбинантного Тр4 ~и тп о: предложены нетрадиционные подходы по ацетилированию рекомбинантного белка гл пю с помощью Х-ацетилтрансфераз; доказана перспективность применения полученных результатов в качестве общих методических рекомендаций для производителей лекарственных средств на основе генно- инженерных белков; введены новые представления о способах получения и модификации рекомбинантных белков.

Теоретическая значимость исследования обоснована тем, что: доказана возможность селективного ацетилирования Х-концевой альфа аминогруппы рекомбинантного белка в процессе посттрансляционной модификации т пю посредством рибосомальных сериновой и аланиновой Х-ацетилтрансфераз, позволяющая получать нативный тимозин бета-4 простым и эффективным способом; применительно к проблематике диссертации результативно использован разработанный способ региоселективной модификации тимозина бета-4 по Х-концевой альфа аминогруппе для получения стабильных в токе крови аналогов пептида, что определяет научную новизну исследований диссертанта; изложены доказательства эффективности полученного рекомбинантного тимозина бета-4 в спонтанной мышиной модели дерматита человека, обработка кожи спины мышей рекомбинантным ТР4 человека способствовала достоверному ослаблению симптомов хронического дерматита и привела к долгосрочному сохранению терапевтического эффекта в оригинальной спонтанной мышиной модели дерматита человека; раскрыты связи между существующими теоретическими сведениями о химической модификации белков для получения аналогов с улучшенными фармакокинетическими показателями и полученными экспериментальными данными; изучены биологическая активность полученного рекомбинантного тимозина бета 4 и стабильность полученных аналогов рекомбинантного пептида: моногексаноилтимозина бета-4, моносиалированного тимозина бета-4 и моноПЭГилированного тимозина бета-4 в сыворотке крови кролика, все аналоги Тр4 показали пролонгированное время жизни по сравнению с нативной молекулой; проведена модернизация лабораторной методики получения рекомбннантного тимозина бета-4, в результате разработана пилотная технология получения рекомбинантного пептида„увеличен выход конечного продукта в 4 раза.

Значение полученных соискателем результатов исследования для практики подтверждается тем, что: разработана технология для пилотного производства рекомбинантного тимозина бета-4 человека, составлен лабораторный регламент., на основе которого была наработана опытная партия массой 2,5 г тимозина бета-4 с чистотой, соответствующей требованиям. предъявляемым к фармацевтическим субстанциям; определены перспективы практического использования разработанной пилотной технологии получения рекомбинантного тимозина бета-4 для наработки опытных партий пептида для проведения биологических испытаний; созданы эффективные методики хроматографической очистки аналогов рекомбинантного тимозина бета-4 с улучшенными фармакокинетическими показателями; представлены методические рекомендации по применению региоселектив ной модификации пептидов для получения их аналогов с улучшенными фармакокинетическими показателями.

Оценка достоверности результатов исследования выявила: для экспериментальных работ результаты получены на сертифицированном оборудовании на основе серии экспериментов, данные статистически обработаны, показана воспроизводимость результатов исследования в различных условиях; теория построена на известных и проверяемых данных, а также согласуется с опубликованными экспериментальными данными по теме диссертации; идея базируется на анализе практики и обобщении опыта передовых стран Европы и Америки; использовано сравнение авторских данных и данных, полученных ранее по рассматриваемой тематике; установлено качественное совпадение авторских результатов с результатами, представленными в независимых источниках по данной тематике; использованы современные методики статистической обработки экспериментальных данных.