Заключение диссертационного совета (Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО СОВЕТА Д 212.131.06 НА БАЗЕ Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский технологический университет» Министерства образования и науки Российской Федерации ПО ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ХИМИЧЕСКИХ НАУК. аттестационное дело № решение диссертационного совета от 05.06.2017, протокол № 12 О присуждении Макарову Дмитрию Александровичу, гражданину РФ, ученой степени кандидата химических наук.

Диссертация «Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов» в виде рукописи по специальности 03.01.06— биотехнология (в том числе бионанотехнологии) принята к защите 22 марта 2017 года, протокол № 10, диссертационным советом Д 212.131.06, созданном на базе Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский технологический университет» Министерства образования и науки Российской Федерации (МИТХТ), 119571, Москва, пр-т Вернадского, д.86, приказ № 935/нк от 14.07.2016. Соискатель, Макаров Дмитрий Александрович, 1988 года рождения, окончил ГОУ ВПО «Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова» в 2011г., с присвоением квалификации «магистр» по специальности «химическая технология и биотехнология».

В 2011 г. поступил в очную аспирантуру кафедры биотехнологии и бионанотехнологии ГОУ ВПО «Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова» по направлению «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)». С 2012 г. работает в группе синтеза рекомбинантных белков и пептидов лаборатории биотехнологии ФГБУН «Институт био органической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН», в настоящее время — в должности ведущего инженера. Работа выполнена на кафедре биотехнологии и промышленной фармации Института тонких химических технологий Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский технологический университет» и лаборатории биотехнологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт биоорганической химии имени академиков М.М.

Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук». Научный руководитель: Есипов Роман Станиславович - кандидат химических наук, старший научный сотрудник лаборатории биотехнологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН». Официальные оппоненты: Клячко Наталья Львовна - профессор, доктор химических наук, профессор химического факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова»; Лунин Владимир Глебович - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им.

почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения РФ, дали положительные отзывы о диссертации. Ведущая организация - Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Институт молекулярной генетики РАН» - дала положительный отзыв, составленный д.б.н., профессором, зав. отделом вирусной и клеточной молекулярной генетики ИМГ РАН Тарантулом Вячеславом Залмановичем. Отзыв утвердил заместитель директора по научной работе ФБГУН «Институт молекулярной генетики» РАН д.б.н., проф.

Сломинский Петр Андреевич. В отзыве отмечается, что автором диссертации проведено актуальное научное исследование с целью разработки биотехнологических способов получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов. Создано пилотное производство рекомбинантного тимозина бета-4 человека, разработан метод региоселективной модификации М-концевой альфа аминогруппы пептида, получены аналоги тимозина бета-4 с пролонгированным временем действия. Разработана простая и эффективная биотехнология получения рекомбинантного тимо зина бета-4 с нативной структурой, включающая ацетилиро ванне 1Ч-концевой альфа аминогруппы гибридного белка т ию и автокаталитическое расщепление гибридного белка при добавлении тиольного реагента.

Показано на оригинальной спонтанной мышиной модели дерматита человека, что полученный рекомбинантный тимозин бета-4 человека обладает биологической активностью и способствует достоверному ослаблению симптомов хронического дерматита. Результаты исследований Макарова Д.А. могут быть рекомендованы к изучению и практической реализации в специализированных организациях, таких, как Институт молекулярной генетики РАН, Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, Институт молекулярной биологии им. В.А.

Энгельгардта РАН, Государственный научно-исследовательском институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов. Соискатель имеет 1 1 публикаций по теме диссертации, среди них 4 статьи в журналах, которые включены в перечень ВАК, 3 тезиса к международным и российскими конференциям, 4 патента РФ. В опубликованных работах соискателя отражены все основные результаты диссертации по выполнению поставленных задач.

Наиболее значимые научные работы по теме диссертации опубликованы: 1. Макаров Д.А., Муравьева Т.И., Степаненко В.Н., Швец В.И., Есипов Р.С. Оптимизация и масштабирование лабораторного метода получения рекомбинантного тимозина-бета 4 человека до пилотного производства // Биотехнология. — 2014. - № 4. - С. 35-44. 2. Моисеева Е.В., Бейрахова К.А., Семушина С.Г., Аронов Д.А., Макаров Д.А., Есипов Р.С. Эффективность рекомбинантного тимозина р4 в спонтанной мышиной модели хронического дерматита // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2014.

— Т. 158. - № 11. - С. 620-623. 3. Макаров Д.А., Есипов Р.С. Разработка способов получения аналогов тимозина бета 4 в виде конъюгатов, устойчивых к деградации в токе крови // Биотехнология. - 2016. - № 2. - С. 57-71 4. Котап Я. Еяро~, Ршйгу А.

Манаго~, Уаз11у М. Яерапеп1со, Апа1о1у 1. М1гозЬп11гоч. Рече1оршеп1 о1' 1Ье Ые1п-тейатес1 те1Ьос1 1ог ргодис11оп оГ гесотЬшап1 сЬушоз1п р4 1гот 1Ье асе1у1а1ес1 ш Ъо йз1оп рго1е1п // Уопгпа1 о1'В1о1есЬпо1о8у. — 2016. — У. 228.— Р. 73 — 8. На автореферат диссертации поступило 4 положительных отзыва. Отзывы от Скрипникова А.Ю., к.б.н., доцента кафедры биоорганической химии МГУ им.

М.В. Ломоносова; и от Швеца С.В., к.х.н., главного эксперта лаборатории биотехнологических препаратов Испытательного центра экспертизы лекарственных средств ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» МЗ России, замечаний не содержат. Отзыв от Н.И. Дергоусовой, к.х.н., научного сотрудника лаборатории инженерной энзимологии Института биохимии им. А.Н. Баха РАН, содержит замечания о том, что в автореферате метод ацетилирования дезацетилтимозина бета-4 описан весьма условно, описание того, что нативный тимозин бета-4 ацетилирован по Х-концевой альфа аминогруппе дано только на 10 странице текста, что усложняет восприятие текста. Имеется пожелание, касающееся раздела интеин-опосредованного получения рекомбинантного тимозина бета-4, в который было бы неплохо добавить иллюстрации электрофореграмм. Отзыв от Ю.С. Скоблова д.х.н., зав.

лабораторией изотопных методов анализа ИБХ РАН, содержит замечания о том, что результаты работы, связанные с получением аналогов тимозина бета-4, могут быть важными для технологии только после проведения биологических экспериментов с модифицированными пептидами т ~ л о. Выбор официальных оппонентов обоснован тем, что они являются успешными учеными, эффективно работающими в области биотехнологии, биохимии и био катализа, в частности, занимающимися проблемами функционирования ферментов и создания технологий получения рекомбинантных белков.

Выбор ведущей организации обоснован тем, что Институт молекулярной генетики РАН занимает ведущие позиции в стране в области молекулярной генетики, молекулярной биологии, биотехнологии и медицины. Диссертационный совет отмечает, что на основании выполненных соискателем исследований: разработана новая эффективная и масштабируемая технология получения рекомбинантного ТР4 человека с использованием интеин-опосредованной экспрессионной системы, обеспечивающая селективное высокоэффективное ацетилирование рекомбинантного ТР4 1п и~о; предложены нетрадиционные подходы по ацетилированию рекомбинантного белка т и~о с помощью Х-ацетилтрансфераз; доказана перспективность применения полученных результатов в качестве общих методических рекомендаций для производителей лекарственных средств на основе генно-инженерных белков; введены новые представления о способах получения и модификации рекомбинантных белков.