Комплексные соединения редкоземельных элементов с некоторыми биологически активными лигандами, страница 12

В ходе анализа (ИКспектроскопия, химический анализ, РФА) было показано, что комплексные соединенияацетатов РЗЭ с антипирином не образуются, а выпадают исходные соединения в виде смесифаз. Комплексные соединения при тех же мольных отношениях не удалось получить имеханохимическим методом синтеза. Для этого навески образцов помещали в осуществляющиерадиальные колебания размольные стаканы из нержавеющей стали объемом 25 млвибрационной шаровой мельницы Retsch MM400. Совместное движение размольных стаканов иразмольных шаров из нержавеющей стали диаметром 2 и 5 мм приводит к интенсивномуперемешиванию образца. Степень перемешивания может быть дополнительно увеличена припомощи большего количества шаров меньшего диаметра.

Продолжительность механоактивациисоставляла 30 мин, частота вибрации размольных стаканов – 25 Гц. Отсутствиекомплексообразования было подтверждено данными ИК-спектроскопии и РФА.Тетрафенилборат антипиринового производного неодима получали из водных растворовгексагидрата нитрата неодима, антипирина и тетрафенилабората натрия, взятых в мольномотношении 1:6:3 по модифицированной нами методике [228]. Комплексное соединениеполучали при постепенном добавлении к раствору гексагидрата нитрата неодима раствораантипирина, а затем раствора тетрафенилбората натрия (рН = 5.5-6.5). Выпавший осадокотфильтровывали и промывали 50 мл воды, а затем растворяли в ацетоне и оставляли на ночь вморозильной камере.

Тетрафенилборат гексакис(антипирин)неодима(III) получали в видесветло-сиреневого порошка, плохо растворимого в воде и этаноле. Вещество высушивали вэксикаторе над гидроксидом натрия.Nd(NO3)3·6H2O + 6AP + 3NaBPh4 = [Nd(AP)6](BPh4)3 + 6H2O +3 NaNO3Кроме того, были предприняты попытки синтеза комплексных соединений иодидовлантаноидов с 3-метил-1-фенил-2-пиразолин-5-оном (AP-Me), 1-(4-хлорофенил)-3-метил-5пиразолоном (AP-Me-Cl) и 4-аминоантипирином (ААР) из различных растворителей, которые,к сожалению, не увенчались успехом.Лиганды AP-Me и AP-Me-Cl крайне плохо растворяются в различных растворителях(кроме ДМСО и ДМФА). При попытке получения комплексных соединений с AP-Me и AP-MeCl в различных растворителях и их смесях, а также при различных температурах синтеза вместоцелевого продукта выпадали незакомплексованные исходные лиганды, тогда как сольваты РЗЭоставались в растворе.

При попытке синтеза комплексного соединения с 4-аминоантипириномполучалась вязкая стеклообразная масса, перекристаллизация которой из различныхрастворителей также не приводила к желаемому результату.603.2.2. Методы химического анализаОпределение содержания редкоземельного элемента проводили методомкомплексонометрического титрования раствором динатриевой солиэтилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, трилон Б) в присутствии ацетатного буфера(рН = 5.4–5.6) с использованием индикатора ксиленолового оранжевого [229]. Точкеэквивалентности соответствует переход окраски индикатора из малиновой в лимонно-жёлтую.Относительная ошибка определения: 0.15%.Содержание иодид-иона определяли гравиметрически (осаждением в виде иодидасеребра).

Осадок AgI отфильтровывали и высушивали до постоянной массы при температуре90о С [230]. Относительная ошибка определения: 0.2%.Определение содержания антипирина проводили иодометрически, с помощью обратноготитрования тиосульфатом натрия, при добавлении избытка раствора иода в иодиде калия [133].Метод анализа основан на способности антипирина взаимодействовать с галогенами засчёт подвижного атома водорода, находящегося рядом с карбонильной группой:CH3HONCH3IN CH3+I2ONN CH3+HIОбразующийся иодоантипирин растворяли в спирте, а избыток иода оттитровывалираствором тиосульфата натрия известной концентрации:I2 + 2Na2S2O3 = Na2S4O6 + 2NaIОтносительная ошибка определения: 0.5%.Определение содержания C, H, N вели на элементном анализаторе CHNSFlashEA1112фирмы ThermoFinnigan (Италия) с детектором по теплопроводности (TCD) и анализаторомCHNS, позволяющим одновременно определять содержание углерода, водорода, азота и серы.Относительная ошибка определения составляет 0.2-0.3%2.2Элементный анализ проводился в ЦКП ФГБОУ ВПО МИТХТ им.

М.В. Ломоносова ст.н.с., к.х.н. Федорова Г.А.613.2.3. ИК– и КР-спектроскопия3ИК-спектры поглощения были сняты в интервале 400–4000 см–1 и 600–50 см–1 (ИКФурье спектрометр EQUINOX 55, «BRUKER», Германия) в суспензии с вазелиновым масломили в таблетках KBr. Спектры КР в диапазоне 90–3300 см–1 были получены на Фурье-Раманспектрометре RFS100/S (Bruker).

В качестве источника возбуждения использовалось излучениеNd:YAG лазера с длиной волны 1.06 μm.3.2.4. Рентгенофазовый анализ4Дифрактограммы образцов были получены на приборе Shimadzu XRD-6000, (CuKαизлучение, графитовый монохроматор) в интервале углов 10– 80о с шагом 0.02о, в непрерывномрежиме.3.2.5. Рентгеноструктурный анализ5Экспериментальные интенсивности дифракционных отражений кристаллов получалипри комнатной температуре (293(2)K) на дифрактометре EnRaf-Nonius CAD – 4 [231] (Cu-, Моили Ag Кα- излучение, графитовый монохроматор,/2 , ω-сканирование).

Поправка напоглощение приведена методом ψ-сканирования отдельных рефлексов. Первичную обработкумассива экспериментальных данных проводили по комплексу программ WinGX [232], всепоследующие расчеты – по SHELXL-97. Визуализация строения соединений осуществлялась спомощью программы MERCURY [234].3.2.6.

Термический анализ6Термический анализ проводили на синхронном (TG-DSC) дифференциальном сканирующемкалориметре STA – 409 фирмы Netzsch (Германия) в тиглях из оксида алюминия с крышечкамив атмосфере гелия в интервале температур 20–300° С и cо скоростью изменения температуры10°/мин. Сенсор представлял собой чувствительную контактную площадку на основе платинородиевых термопар, погрешность в измерении температуры которых составляла 0.02 °С.Калибровка сенсора осуществлялась по реперным веществам: In, Sn, Zn, Al, Ag, Au.Отклонение от реперных температур не превышало 0.1-0.2° С, а погрешность измерениятемпературычувствительности3составляла 0.22 0.022дляопределения0.2 C .

Проводиласьэнтальпииразложения.такжеНо,длякалибровкапредупрежденияСпектры снимались в лаборатории ЦКП ФГБОУ ВПО МИТХТ им. М.В. Ломоносова ст. н. с., к.х.н. В.В.Кравченко и в лаборатории спектроскопии конденсированных сред ИСАН (г. Троицк) гл.н.сотр., д.ф.-м.н. Б.Н.Мавриным.4Дифрактограммы снимались в лаборатории ЦКП ФГБОУ ВПО МИТХТ им. М.В. Ломоносова.5РСА монокристаллов проводил м.н.с., к.х.н. Д.В. Альбов (Химфак МГУ).6Термический анализ проводился ст.н.с., к.х.н. Мудрецовой С.Н. (Химфак МГУ).62загрязнения калориметра продуктами разложения, эксперимент заканчивался сразу послеопределениятемпературыразложениякомплексов.Температурафазовыхпереходовопределялась с помощью программы фирмы Netzsch (Германия) автоматически.Как правило, проводят минимально 3 измерения (получение базовой линии, калибровкаприбора и измерение для исследуемого образца):1) Получение базовой линии (тигель эталона и тигель образца пустые) (Рисунок 25).Рисунок 25.

Схема получения базовой линии.2) Калибровочный цикл (тигель эталона пуст, а стандартное вещество с известнойтеплоемкостью помещается в тигель образца, Рисунок 26).Рисунок 26. Схема калибровочного измерения.3) Цикл с исследуемым образцо: исследуемое вещество помещается в тигель для образца, атигель эталона пуст (Рисунок 27).Рисунок 27. Схема проведения измерения для исследуемого вещества.3.2.7. Изучение цитотоксичности7ЦитотоксичностьполученныхсоединенийопределялиспомощьюМТТ-теста,основанного на восстановлении бесцветной соли метилтиазола тетразолия (бромида3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия, МТТ) посредством митохондриальных ицитоплазматических дегидрогеназ живых метаболически активных клеткок с образованиемвнутриклеточных голубых кристаллов формазана, растворимых в диметилсульфоксиде (ДМСО)[235, 236].7Исследования выполнялись в лаборатории роста клеток и тканей Института Теоретической иЭкспериментальной Биофизики РАН (г.

Пущино) к.ф.-м. н., ст.н.с. Давыдовой Г. А. и асп. Мироновой Е. А.63Жизнеспособность клеток в присутствии тестируемых соединений изучалась нафибробластах линии NCTN клон L929, полученных из клеток подкожной соединительнойткани мышей С3H/An [237] (flow laboratory, Great Britain), и на эпителиальных клетках линииНер-2 (эпидермоидная карцинома гортани человека [238]) из коллекции НИИ вирусологии им.Д.И. Ивановского РАМН, г. Москва. Клетки высевали в лунки 96-и луночного планшета приплотности 25-30 тыс. клеток/см3 в среде DMEM/F-12 (1:1), содержащей 5% (v/v) эмбриональнойтелячьей сыворотки (FBS). Через 18 ч.

среду удаляли и добавляли 100 мкл раствораисследуемого соединения в DMEM/F12, содержащего 0.001, 0.01, 0.1 или 1 мг/мл, или готовилирастворы в интервале концентраций 1.10-7–1.10-3 моль/л путем последовательного разбавления в10 раз. Клетки инкубировали в течение суток при 37º C в атмосфере 5% СО2 при 90%-нойвлажности воздуха. Затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл раствора МТТ (0,5 мг/мл вDMEM/F12). Планшеты помещали в СО2-инкубатор на 3 часа (37º C, в атмосфере 5% СО2 и90%-ной влажности воздуха).