Диссертация (Получение и стандартизация биологически активных водорастворимых сополимеров на основе N-оксидов пиридина), страница 14

Полученныеданные, удовлетворяют предъявленным критериям, что позволяет сделатьзаключение о корректности применения метода определения остаточныхорганических растворителей.5.2.3.2. Четыреххлористый углерод и хлороформБыл разработан простой и точный метод определения следовых уровнейканцерогенных растворителей четыреххлористого углерода и хлороформа всополимере N-оксиде с использованием газовой хроматографии.

Данный методобеспечивает более низкий уровень обнаружения, чем другие существующиеметоды.При производстве фармацевтических препаратов применяют остаточныеорганические растворители, они позволяют увеличить выход и чистоту продукта.Недостатком данной технологии является невозможность полного удаленияданныхсоединенийвсовременныхметодахпроизводства.Остаточныеорганические соединения не обеспечивают терапевтического эффекта, и они101должны быть удалены в максимально возможной степени для удовлетворенияспецификации на субстанцию.Рис. 71.

Хроматограмма сополимера содержащего примеси хлороформа ичетыреххлористого углеродаХлорорганические соединения, такие как четыреххлористый углеродявляются одними из самых мощных гепатотоксинов и классифицируются какрастворители первого класса токсичности [8]. Поэтому важно контролироватьсодержание данных веществ с высокой точностью. Предельно допустимоесодержание в лекарственных средствах остаточных органических растворителей 1класса токсичности – четыреххлористого углерода составляет 4 ppm, 2 классатоксичности – хлороформа – 60 ppm.

Для разработанной методики проведенавалидация (Приложение 6). Алгоритм валидационных процедур описан выше напримеревалидацииметодикиопределенияостаточныхорганическихрастворителей циклогексана и бутилацитата.5.2.4.Количественное определениеРефрактометрическийметодбылиспользовандляопределенияколичественного содержания N-оксида сополимера.

По экспериментальным102данным построена зависимость показателя преломления от концентрации Nсополимера (рисунок 72).Содержание N-оксида сополимера в субстанции (Х, %) находят по формуле:(nD20  nD200 )  V100Х,F a100  Wгде:nD20 – показатель преломления раствора субстанции N-оксидасополимера при 20 °С;n D200 – показатель преломления раствора сравнения(вода) при 20 °С;V – объем мерной колбы, равный 25 мл;F – фактор, показывающий прирост показателя преломления растворасубстанции при увеличении концентрации N-оксида сополимера на 1%;a – навеска субстанции, г;W – потеря в массе при высушивании, %.Была определена область концентраций, в которой показатели преломленияизменяются линейно по уравнению у=0,0017х+1,3334.

(Величина достоверностиаппроксимации R2=0,999).Рис.72. Зависимость показателя преломления от концентрации субстанциисополимера N-оксидаПо результатам исследования 3 серий содержание сополимера в субстанциидолжно варьироваться в пределах 95,0 – 105,0 %.Метод рефрактометрии хорошо себя зарекомендовал как метод анализавеществ свободных от примесей, так как родственные примеси могут иметь иной103показатель преломления и вносить существенную ошибку в результатыопределения.

В качестве альтернативного метода был предложен метод ВЭЖХ.Детектирование проводили по звеньям пиридина по методике, описанной вовторой главе. Хроматограмма испытуемого раствора субстанции N-оксидасополимера представлена на рисунке 73.Рис.73. Хроматограмма испытуемого раствора субстанции N-оксидасополимераКак видно из рисунка, на хроматограмме отсутствуют пики, мешающиеопределению, эффективность хроматографического пика N-оксида сополимераболее 5 тыс. теоретических тарелок.По результатам анализа трех серий субстанции количественное содержаниеN-оксида сополимера в субстанции совпало с результатами, полученными методомрефрактометрии и вошло в диапазон 95,0 – 105,0 %.

Для разработанной методикипроведена валидация (Приложение 6). Алгоритм валидационных процедур описанвыше на примере валидации методики определения остаточных органическихрастворителей циклогексана и бутилацитата.104Таким образом, показано, что методы анализа воспроизводимы и могут бытьвключены в проект нормативной документации на субстанцию N-оксидасополимера так же, как и фармакопейные методы по обязательным показателямкачества субстанции: сульфатная зола, растворимость, потеря в массе привысушивании, тяжелые металлы.

Поскольку в дальнейшем предполагаетсяиспользоватьсубстанциюN-оксидсополимераввидеинъекционнойлекарственной формы, следующие требования были добавлены в спецификацию:цветностьраствора,рН,пирогенность,прозрачностьраствора,имикробиологическая чистота (для приготовления стерильных лекарственных формкатегория 1.2.Б).5.3.

Изучение сроков годности субстанцииДля установления срока годности субстанции образцы 3 серий сополимераN-оксида помещали в полимерные пакеты и были изучены в естественныхусловиях и методом «ускоренного старения» Образцы субстанции были заложенына естественное хранение на 2 года, данные представлены в таблице 19.Результаты, полученные методом «ускоренного старения» коррелируют с даннымиполученными при естественном хранении, что говорит о возможности примененияметода «ускоренного хранения» для данного класса соединений.105Таблица 19СерияДанные по изучению сроков годности субстанции N-оксида сополимера в полимерных пакетах на естественном храненииСрокОписаниеРастворимостьПодлинностьПрозрач Цветностьхраненностьия, мес.раствораТребования поАморфный,НДОчень легко1.Образованиегигроскопичный растворим в воде, желтого осадка1%рНраствораыепримесидо 7,8 не болеепорошок отлегко растворим в творожистого вида субстанц раствора (1%белого доспирте, умеренно 2.Образованиежелтоватогорастворим вкоричневого осадка водеатная металлы0,1 %ООРмассеКоличествоМ-5-ВПНе более Не более ЦГ не более Не менееболее 0,001 %5,0 %0,388%17,0 и неХФ не более более 20,00,4 %Количествозвеньев 2- звеньев 2-М-5-золаОкраска 1 От 6,0 Ацетаты, Нераствор %ии вРодственн Сульф Тяжелые Потеря вМолекулярно- КоличественнмассовоеоеВП–N-оксида.

распределение определениеНе менее 17,0 и СреднемассовНе менеене более 20,0ая ММ95 % и немол.%.От 30 000,0 до более 105 % всубстанци раство Пер.соед-я0,006%и в водене болееЧХУ неСр. НМФ (10%) сухое, нер)мол.%.40 000,0 Дапересчёте нацвета со слабым хлороформе.3.Наличие сигналов должен должна0,1 %, α-ПболееНе менее 200 ДасодержащееспецифическимПрактическиядер углерода вбытьне более0,0004%Ср. ВМФ (10%) ООРзапахом,нерастворим вобласти 125-175прозрач интенсивн0,6%, N-БА не болееНе болееэлектризуетсяциклогексане.м.д.нымее эталонаВП не0,5 %50 000 ДаY5болеебыть не0,2%.исхСоотв.СоотвСоотвСоотв.СоотвСоотв6,2Соотв.Соотв.6СоотвСоотвСоотв.СоотвСоотв6,30,01; 0,05;0,1;0,050,10Менее0,0010,01; 0,04; 0,11Менее0,1;0,060,0010,25; 0,001 18,63,33,3150114Соотв.Соотв.12СоотвСоотвСоотв.СоотвСоотв6,2СоотвСоотв.18СоотвСоотвСоотв.СоотвСоотв6,20,01; 0,05;0,10Менее3,40,0010,1;0,040,01; 0,04; 0,11Менее0,1;0,050,0013,3Соотв.Соотв.24СоотвСоотвСоотв.Соотв.СоотвСоотв6,30,01; 0,05; 0,10,1;0,051Менее0,00132 6120,00013720,1146 7430,24; 0,001 18,918,43790,1245 9820,25; 0,001 18,718,43760,1244 51118,696,632 5790,00013770,1146 01318,196,532 8430,00010,26; 0,001 18,696,532 7420,00010,24; 0,001 18,73,418,596,5336530,00013700,1046 74896,6106исхСоотв.СоотвСоотвСоотв.0,01; 0,04;СоотвСоотв6,10,1;0,05Соотв.Соотв.6СоотвСоотвСоотв.СоотвСоотв6,2050214Соотв.Соотв.12СоотвСоотвСоотв.Соотв6,30,1;0,050,1;0,06Соотв.Соотв.18СоотвСоотвСоотв.СоотвСоотв6,2Соотв.Соотв.24СоотвСоотвСоотв.Соотв6,20,1;0,060,1;0,05Соотв.исхСоотв.СоотвСоотвСоотв.СоотвСоотв6,1Соотв.Соотв.6СоотвСоотвСоотв.Соотв6,10,1;0,050,1;0,05040314Соотв.Соотв.12СоотвСоотвСоотв.0,01; 0,05;СоотвСоотв6,20,1;0,04Соотв.Соотв.18СоотвСоотвСоотв.СоотвСоотв6,3Соотв.Соотв.24СоотвСоотвСоотв.Соотв.Соотв6,3870,2710,320,330,01; 0,05; 0,30,1;0,050,01; 0,06;Соотв0,20,01; 0,05; 0,30,01; 0,06;Соотв90,01; 0,04; 0,20,01; 0,04;Соотв80,01; 0,06; 0,20,01; 0,05;Соотв0,20,1;0,0620,32Менее0,0010,23; 0,001 17,63,818,20,00014110,08Менее0,0010,23; 0,001 17,83,718,20,00010,0010,24; 0,001 17,53,80,0013,818,30,0013,818,40,0013,518,40,0013,417,90,0013,517,70,0013,517,80,0013,50,00010,1098,642 95517,80,00010,20; 0,001 17,235 96755136 4735430,10Менее98,642 0240,00010,20; 0,001 17,235 9165310,09Менее98,542 6650,00010,19; 0,001 17,335 7585350,08Менее97,943 4830,00010,18; 0,001 17,3346244840,09Менее97,944 8350,00010,19; 0,001 17,1344064150,09Менее97,846 3470,00010,25; 0,001 17,534 3994130,09Менее97,947 1130,00010,25; 0,001 17,535 3024070,08Менее97,947 3160,09Менее34 42498,643 71917,836 52753543 31298,51075.4.

Проект спецификацииВ дальнейшем предполагается использование субстанции сополимера Nоксида в составе вакцины, поэтому необходима разработка нормативнойдокументации на субстанцию.Показано, что методы анализа воспроизводимы и могут быть включены впроект нормативной документации на субстанцию N-оксид сополимера, так же, каки фармокопейные методы по обязательным параметрам качества субстанции:тяжелые металлы, растворимость, потеря в массе при высушивании, сульфатнаязола [17].Таблица 20Проект спецификации108ПоказателиОписаниеМетодыВизуальныйНормыАморфный, гигроскопичный порошокот белого до желтоватого цвета сослабымспецифическимзапахом,электризуетсяРастворимостьГФ XIIIВ воде очень легко растворим, легкорастворимврастворимспирте,вумереннохлороформе.Вциклогексане практически нерастворимПодлинностьКачественные реакции:1.ЯМР 13С спектроскопия.1.

Наличие сигналов ядер углерода вобласти 125-175 м.д.2.С йодом2. Наличие коричневого осадка3.С кислотой пикриновой3. Наличие желтого осадкатворожистого видаПрозрачностьГФ XIIIРастворрастворасубстанцииконцентрацией1%окраски1вводедолженсбытьпрозрачнымЦветность раствораГФ XIIIСтепень%растворасубстанции в водном растворе должнабыть не интенсивнее эталона Y5рНГФ XIIIОт 6,0 до 7,8 (1% раствор)потенциометрическиПосторонние примеси:Ацетаты,ЯМР13Сспектроскопия, Не более 0,1 %ионная хроматографияПерекисные соединенияТитриметрияНе более 0,1 %α-пирролидонГЖХНе более 0,6 %N-винилпирролидонГХЖНе более 0,2%Сульфатная золаГФ XIIIНе более 0,4 %Тяжелые металлыГФ XIIIНе более 0,001 %Потеряввысушиваниимассепри ГФ XIIIНе более 5,0 %109ООР:Четыреххлористый углеродГЖХНе более 0,0004 %ЦиклогексанГЖХНе более 0,388 %ХлороформГЖХНе более 0,006 %БутилацетатГЖХНе более 0,5 %ПирогенностьГФ XIIIДолжна быть апирогеннойМикробиологическаяГФ XIIIКатегория 1.2.БчистотаДолязвеньев2-метил-5- ПотенциометрическоевинилпиридинаКоличествозвеньевНе менее 17,0 и не более 20,0 мол.%.неводное титрование2- ЯМР 13С спектроскопияНе менее 17,0 и не более 20,0 мол.%.метил-5-винилпиридина NоксидаСреднемассоваяЭксклюзионнаямолекулярная массахроматографияОт 30 000,0 до 40 000,0 ДаСредняянизкомолекулярнаяфракция (10%)Не менее 200,0 ДаСредняявысокомолекулярнаяфракция (10%)КоличественноеНе более 50 000 ДаВЭЖХ и РефрактометрияопределениеНе менее 95 % и не более 105 % впересчётенавысушенное,несодержащее остаточных органическихрастворителей веществоУпаковкаОт 10 г до 1 кг помещают в двойные пакеты из плёнкиполиэтиленовой, каждый из которых термосваривают.