Диссертация (Получение и стандартизация биологически активных водорастворимых сополимеров на основе N-оксидов пиридина), страница 15

Каждыйдвойной пакет заворачивают в бумагу оберточную и перевязываютлибо оклеивают липкой лентой.МаркировкаВ соответствии с НДХранениеВ сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 25оС.Срок годности2 года110Данная таблица представляет собой проект спецификации на субстанцию Nвинилпирролидонаи2-метил-5-винилпиридинаN-оксида.Проведенастатистическая обработка данных, полученных с помощью разработанныхметодов. Значение относительного стандартного отклонения для данных методикменее 3 %, что говорит о соответствии требованиям повторяемости [31].111ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 51.

Разработаны специфические методы анализа N-оксида сополимера, такиекак содержание доли звеньев N-оксида, количество пиридиновых звеньев,определены молекулярно-массовые характеристики субстанции.2. Разработаны общие методы анализа и проведена валидация некоторых изних: подлинность, родственные примеси (ацетат-ионы – двумя методами,перекисныеорганическиесоединения,α-пирролидон,растворители(бутилацетат,N-винилпирролидон),циклогексан,остаточныечетыреххлористыйуглерод, хлороформ), количественное определение (ВЭЖХ и рефрактометрия).3. Были установлены сроки годности субстанции N-оксида сополимераметодами ускоренного и естественного хранения.

Методы имеют хорошуюкорреляцию.4. Предложен проект спецификации на субстанцию N-оксид сополимера длявключения ее в состав нормативной документации.112ЗАКЛЮЧЕНИЕИтоги выполненного исследования (выводы)1.Впервые синтезированы сополимеры N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридин-N-оксида.ВкачествеN-оксидирующегоагентавыбрананадуксусная кислота. Получены шесть серий субстанций N-оксида сополимеров 2метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона c разной степенью оксидирования.Формулы и способ получения защищены евразийскими патентами №027934частично N-оксидированный сополимер и №027979 полностью N-оксидированныйсополимер.2.Изучена реакция N-оксидирования сополимера N-винилпирролидона и2-метил-5-винилпиридин-N-оксида, установлена зависимость кинетики реакции оттемпературы и рН среды.

Показано, что для проведения реакции без контроля рНсистемы синтез необходимо вести в ацетатном буферном растворе с рН 4,4 притемпературе 80°С для достижения 100% N-оксидирования и при 65°С дляполучения частично N-оксидированных сополимеров.3.Разработан метод контроля полноты протекания реакции. Методом 13СЯМР спектроскопии оценена структура вещества. Сигналы расшифрованы припомощи спектральной базы SDBS и двумерного гетероядерного спектра {13C;1H}HETCOR. Найдены величины химических сдвигов используя в качествемодельногосоединенияэкспрессныйметодN-оксидконтроля2-метил-5-этилпиридина.полнотыпротеканияПредложенреакцииспектрофотометрия. Показана корреляция данного метода с методом–УФ-С ЯМР13спектроскопии (коэффициент корреляции более 0,9).4.Предложена технологическая схема получения субстанций N-оксидасополимеров в составе лабораторного регламента.5.Выявленазависимостьбиологическойактивностиотстепениоксидирования сополимера N-оксида.

Установлено, что значения антигеннойактивности вакцины на основе 50% N-оксида сополимера в два раза больше чемсоответствующие показатели для сополимера МВП и N-ВП и для 100% N-оксидасополимера. Изучена иммуногенная активность: определен показатель ЕД50113вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ B. anthracis при применении полностью ичастично N-оксидированного сополимера в разные периоды вакцинации. ЧастичноN-оксидированный сополимер при введении за 14 дней до вакцинации снижаетпоказатель ЕД50 вакцины в 2,66 раз, при совместном введении в 4,8 раз. ПолностьюN-оксидированный сополимер снижает величину средне-эффективной дозывакцины в 1,6 раза при введении за 14 дней до вакцинации, что позволило выбратьдля дальнейшей стандартизации частично N-оксидированный сополимер.Разработаны6.методыконтролякачествасополимераN-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридин-N-оксида: специфические и общие,такие как содержание доли звеньев N-оксида, количество пиридиновых звеньев,молекулярно-массовые характеристики, подлинность, родственные примеси,остаточные органические растворители, количественное определение.Установлены сроки годности субстанции N-оксида сополимера7.составляющие два года.Подготовлен8.проектспецификациинасубстанциюN-оксидсополимера для включения ее в состав нормативной документации на субстанцию.Практические рекомендацииРезультаты диссертационной работы позволяют внедрить материалыдиссертации в учебный процесс в медицинских и фармацевтических вузах РФ, атакже производить достаточно точный, полный и достоверный контроль качествасополимераN-оксидаИспользованиеN-винилпирролидонасополимераN-оксидаи2-метил-5-винилпиридина.N-винилпирролидонаи2-метил-5-винилпиридина в качестве иммуноадъюванта в составе вакцин, позволяетусовершенствовать технологию получения вакцины.Перспективы дальнейшей разработки темыНаоснованиипроведенныхфизико-химическихибиологическихисследований показана целесообразность разработки и внедрения новыхиммуноадъювантов и новых эффективных фармацевтических препаратов на ихоснове, а также разработки современных методов, соответствующих требованиям,и их стандартизации с применением современных методик анализа.114СПИСОК СОКРАЩЕНИЙD2O – дейтерия оксидВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматографияГФ – государственная фармакопеяДНК – Дезоксирибонуклеиновая кислотаЕД – единица действияЛД50 – полулетальная доза веществаЛС – лекарственное средствоММ – молекулярная массаНД – нормативный документУФ-спектрофотометрия – спектрофотометрия в ультрафиолетовой областиЯМР – ядерный магнитный резонанс115СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.

Авдеева, Ж.И. Вакцины с адъювантами. Доклинические исследования /Ж.И.Авдеева, Н.А.Алпатова, В.П.Бондарев // Биопрепараты. – 2015. №1. – С.15–20.2. Беленький, Б.Г. Хроматография полимеров / Б.Г.Беленький, Л.З.Виленчик.– М.: Химия, 1978. – 344 с.3. Береговых, В.В. Валидация аналитических методик для производителейлекарств / В.В.Береговых. – М.: Литтерра, 2008. – 132 с.4.

Березин, И.В. Инженерная энзимология / И.В. Березин, А.А. Клесов. – М.:Высш. шк., 1987. – 143 с.5. Богданская, Н. И. Профилактическое действие поливинилпиридин-Nоксидаразныхмолекулярныхвесовнаэкспериментальныйсиликоз/Н.И.Богданская, М.С.Толгская // Гигиена и санитария. – 1973. – №. 4. – С. 102-104.6. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность)методов и результатов измерений, часть 1 «Основные положения и определения».– М.: Госстандарт России, 2002.7. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность)методов и результатов измерений, часть 2 «Основной метод определенияповторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений». – М.:Госстандарт России, 2002.8.

Государственная фармакопея Российской Федерации. Ч.1. / РФ. - 13-е изд.- М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2015. – 1470с.9. Иоффе, Б.В. Рефрактометрические методы химии / Б.В. Иоффе. – Л.:Химия – 1983. - С. 8 – 10.10. И 42-2-82. Инструкция по проведению работ с целью определения сроковгодности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» приповышенной температуре. – М.: Минздрав РФ, 1982.

– 13 с.11. Калистратов, Г. В. Противолучевые и другие биологические свойствасополимера 2-метил-5-винил-пиридина и N-винилпирролидона / Г.В. Калистратов,С.А. Кедик, В.И. Свергун // Мед. Радиология. – 1993. – №. 10. – С. 21-25.11612. Катрицкий, А. Химия гетероциклических соединений. / А.Катрицкий,Дж.Лаговская пер. с англ. В. С. Володиной.

– М.: Издатинлит, 1963. – 288 с.13. Кедик, С.А. Количественное определение соотношения мономерныхзвеньев в сополимерах N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина методомспектрофотометрии / С.А.Кедик, Д.В.Еремин, Ю.В.Кочкина // Вестник МИТХТ. –2014. – № 9. – С. 64–67.14.Кедик,С.А.Синтезимолекулярно-массовыехарактеристикисополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина / С.А.Кедик,А.В.Панов, И.В.Сакаева // Химико-фармацевтический журнал. – 2012. – №8. –С.110-113.15.

Кедик, С.А. Количественное определение в водных растворахфизиологически активных сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5винилпиридина / С.А.Кедик, А.В.Панов, И.В.Сакаева // Химико-фармацевтическийжурнал. – 2013. – №10. – С.54–56.16. Кирш, Ю.Э. Поли-N-винилпирролидон и другие поли-N-виниламиды:синтез и физико-химические свойства / Ю.Э.Кирш. – М.: Наука, 1988. – 252 с.17.Краснюк,И.И.Фармацевтическаятехнология:Технологиялекарственных форм: учеб.