Айала, Кайгер - Современная генетика - т.3 (947306), страница 66
Текст из файла (страница 66)
Для этого каждый из дочерних фатов скрещивают как с г168, так и с 7924. Фаги родительского типа г!6861695 при скрещивании с г168 не будут давать рекомбинантов дикого типа, а фагн родительского типа г16956924 не смогут дать рекомбинантов дикого типа при скрещивании с г924. В то же время при скрещивании ре- 2ВО Глава 7 атЬег ора! осаге Круг хозвев Хозяин 5и Чувствительность к тем пературе 1.4 О.З з — со — с-со ~ — 2.6 — ~ 6.4 26 — 26 втЯ гз1 комбинантов г168г1695г924 с обоими тестерными штаммами в потомстве фаговых частиц дикого типа не будет, а при скрещивании с этими штаммами рекомбинанта г1695 7Л. Мутации относятся к четырем комплементационным группам: А: гз1 и ы2; В: м3 и ы5; С: гз4; Гж М. 7.3.
Пермлссяввые Неяермвссивусловия иые условия Хозяин уи' атЬ«г Хозяин би ора(Хозяин Ви Хозяин уи~ осйгд(озлил Ви Чувствнтель- Устойчивый ный хозяин хозяин 30'С 40-42'С При выборе селективных маркеров по возможности используйте два маркера, проявляющиеся в одинаковых непермиссивных условиях. Тогда при культивировании в немермиссивных условиях в потомстве будут отбираться рекомбинанты дикого типа (а) атЬ«г (б) температурочувствительность (в) осйге (г) атЬег и температурочувствительность (л) осйге и ора! (е) круг хозяев 7.5.
27 — 210 — 29 7.7. 6Н вЂ” ыу — атй — гз2 — гз4 — атС вЂ” атл. 7.9. Три коьшлементационные группы: А: цм4; В: зиз11, зиз14; С: зиз2, зю13. 7.11. Проанализируйте этн данные так же, как это сделано для рнс. 7.4. 7.13. На основании данных по двум реципрокным трехфакторным скрещиваниям иден- Приложение 2. Ответы ла задачи фаговые частицы дикого типа обнаружить можно. Быстрый способ скрещивания, разработанный Бензером, делает эту громоздкую процедуру достаточно простой в исполнении. тнфицируют классы двойных рекомбииантов и выводят взаимное расположение трех генов.
На основании тех же данных рассчитывают и расстояния по карте з — со, (2,6 ед. карты) и со, — ли' (5,4 ед. карты). В оставшихся двух скрещиваниях рассматривают ли' как неселектируемый маркер, а феиотип «мутные бляшки» («+ + >г1 как тип селехтируемых рекомбинантов. Значения частот рекомбинации в этих скрешиваннях следует умножать на 2, поскольку не учитываются реципрокные рекомбинанты (ссо„) 7.15. Фаг 1 имеет больше обших генов с лямбдоидным фатом 434, чем с фатами 21 и 82, при этом он более схож с фатом 21, чем с фатом 82. Ни один нз трех упомянутых лямбдондных фагов не несет гена Ьс1.
Ген 2с! обеспечивает функцию (кодирует репрессор) поддержания лизогенного состояния и обусловливает иммуиность клетки к суперинфекпни фагом )ь но не фатом 434. Таким образом, сайт(ы) действия репрессора с! должны располагаться межлу генами сП и с1!1, в области, где отсутствует гомология мтклу последовательностями ДНК фагов )ь и 434. Эта обласп, называется областью иммуиите- 7.17. Порядок маркеров: тия — 200!— сал1 — 42 — О, 7.19. Фаг, инфицирующий Е. сой См но дающий потомство, неспособное реинфицнровать Е. сой С„ должен содержать ДНК дикого типа, заключенную в капсид фага Н„Нь Это явление носит название смешения фенотипов, поскольку в ходе инфекции фатами с двумя различными генотипами, ДНК одного нз ннх может инкапсулироваться в белковую оболочку, синтез которой направлялся ДНК другого генотипа.
Формирующиеся таким образом фаговые частицы будут обнаруживать фенотипическое проявление, нехарактерное для их истинного генотипа, 281 Глава 8 Сеяектяруемые маркеры Селективная среда 8.3. Е) —  — А- йг !еи+ й! гдг йг' !ек' ага+ тгl Порядок; А!к ггд Глава 9 9.1. Карта во зюа! у,р — !э— неполной реегрякквв Э !О 6 — С Приложение 2. Ответы иа задачи 8.1.
1У вЂ” А — С В вЂ” Е 8.7. Искомая мутация локализуется между генами кгг и А!з. Работая со штаммом АВ313 и используя стрептомицин для селекции против родительских клеток Нуг, студент создал условия, в которых любая мерозигога, получившая аллель дикого типа по интересующей его мутации, получит одновременно и тесно сцепленный с ним аллель кп'. Поэтому большинство рекомбинантов, несущих аллель дикого типа по искомой мутации, окажутся стрептомицин-чувствительными и погибнут на содержащей стрептомицин селективной среде. По совету преподавателя, удалив сгрептомицин из селективной среды, студент лля селекции против родительских клеток Н!г может использовать потребность в аделине (Ае)е ). Для этих же целей он может воспользоваться татке средой с аденином, применяя в качестве селектнрующето агента фаг Т1.
8.9. 1) Клетки Р' в отличие от клеток Р чувствительны к инфекции РНК-содержащими фатами. 2) Клетки Н легко передают селектируемые маркеры другим штаммам Р ВВ! П Нйа 1 5та 1 5 5 3 2 в то время как клетки Р подобной способностью не обладают. 8.11. Минимальная среда с глюкозой + лейции Минимальная среда с глюкозой + треоннн Минимальная среда с глюкозой Минимальная среда с арабинозой + лейцин + треонин йг агаЗ !еи 8.13. Для появления стабильного трансдуктанта должны произойти два события: ДНК агаЗ ' должна проникнуть в клетку и вступить в рекомбинацию с клеточным геномом. Мельчайшие колонии возникают в резулътате абортивной трансдукцин, при которой ДНК агаЗ+ проникает в клетку, но не рекомбинирует с клеточным геномом.
В ре. зультате ген агаЗ' не реплицируется и не передается всем дочерним клеткам. Образование таких микроколоний становится возможным за счет экспрессии полученного гена агаЗ , обеспечивающей клетку, несущую этот ген, ферментом, необходимым для утилизации арабннозы в качестве источника углерода. Такая клетка может расти и подвергаться делению с образованием дочерних клеток, рост которых останавливается из-за отсутствия у них гена агаЗ'. 8.15. В этих экспериментах не осуществляется целенаправленное прерывание конъюгации. При спонтанном прерывании возникает градиент переноса маркеров с убыванием частоты переноса по мере удаления от точки начала переноса. Порядок; йг + !еи да!е 82 ).
434 381 2! 424 252 Н)са 1 Нйа 1 К! сп с(!1! !и сПП ЬДп сп11 + Н)м 1 -0 2>5 1сЬ + 5,0 1сЬ -0 1,0)сЫ- б,5 )сЬ Глава 10 9.5. Обрззовавшийся смешанный сайт ВатН!/Вдв! (ООАТСТ) не содержит последовательности, которая могла бы быть узнана какой-либо из рестриктаз Вага Н! илн ВдП1. В то же время рестриктаза МЬо! может расщепить ДНК по этому сайту, поскольку узнаваемав ею последовательность короче, чем последовательности, узнаваемые ВатН! или ВдЛ1. 9.7.
9.9. С использованием полинуклеотидкниазы осуществляют перенос 33Р от [7= = 33Р! АТР к бьконцу интактной молекулы ДНК фага Х. Затем необходимо провести полное расщепление меченой ДНК рестриктазой И(я сПП. Рестрикционные фрагменты разделяют с помощью электрофореза и идентифицируют положение каждого из фрагментов после окрашнваиия геля в растворе бромистого этидия. После этого гель накладывают на рентгеновскую пленку для идентификации двух меченых концевых фрагментов с помощью радиоавтографнн. 9.11.
Космидный вектор следует предпочесть вектору для клонирования на основе фага Х, поскольку при использовании космид для полного перекрывания человеческого генома представительная библиотека должна включать меньшее количество клонов. Необходимое в каждом нз случаев количество клонов можно рассчитать, как описано в прнло:кении 9.2: 101 2030 1024 1033. 20300 1253 10330. 203000 3 б,)03303 10.3. Приведенное в тексте обсуждение развития глазных дисков генотипов оп сп по- Прилозссеиие 2. Опыты на задачи ?43= =7,27 10', 1п(0,01) Х, = — = 3,14 103. 1и (0,01) 9.13. Решение этой задачи вытекает из ответа к задаче 9.12. При сравнении общего количества ДНК, составляющей гаплоидный геном (48,0.
100 пар оснований у троглодита), со сложностью минимально повторяющегося компонента генома можно поставить вопрос; какое количество копий минимально повторяющегося компонента может содержатьсв в гепоме? В данном случае очевиден ответ— одна копия. Таким образом, хромосомы троглодита должны быть унинемны. Сравнение такого рода, проведенное иа основании данных для целого ряда эукарнотических организмов, подтверждает представление об унинемной природе эукариотнческих хромосом. еле трансплантации этих дисков личинкам с диким или мутантным генотипом дает необходимую базу для интерпретации влияния мутации са на развитие диска. Наиболее суще- гВ3 10.5. ею А вш )т зив С гш Р вив 1. эив У зиз У вш )г Глава ! ! Приложение 2. Ошеешы на задачи огненным фактором является отмеченный в задаче неавтономный характер развития диска дикого генотяпа после трансплантации мутантам типа са.
Это может быть обусловлено неспособностью клеток диска дикого типа синтезировать достаточное количество компонента, необходимого для развития нормальной окраски глаза. Можно полагать, что искомый компонент синтезируется в каком- либо ином компартменте нормальной личинки, а мутанты са являются дефектными по биосинтезу этого компонента. Однако такая гипотеза не подтверждается наблюдаемым автономным характером развития дисков типа са в хозяине дикого типа. Другая гипотеза не противоречащая имеющимся паиным, основана на представлении о том, что клетви диска и целого насекомого типа са синтезиРуют лиффундирующий ингнбитор развития нормальной окраски глаза, который способен проникать в клетки трансплантированного диска дикого типа и направлять его неавтономное развитие.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
