Айала, Кайгер - Современная генетика - т.1 (947304), страница 57
Текст из файла (страница 57)
А. Нор- мальная я мутантяая последовательности аминокислот и со- ответствующие им по- следовательности ну- клеотцаов в ДНК. Б. Карта сайтов рестрик- ции клоннруемого зои- ла лля участка гена б- цепи гемоглобина че- ловека. Широкой поло- сой изображен тран- скрибируемый участок ДНК, тонкой линией- нетраискрнбируемый участок на 5чконце ге- на. В нижней части ри- сунка показана локали- зация Рдс)-сайтов на рестрикционной карте нормальной и мутант- ной форм. В.
Размеры !7де1-рестриктов ДНК из нормальных клеток (бб) н клеток, гомози- готиых по мутации серповилнрклеточной анемии (б б ), опреде- ляли с помощью ра- диоактивного зонда. ) Сеесег й. Г, е1 а1. (!98!). Ргос. )Ча11. Асад. 5с1. ()8А, 8, 508!.) А Аминокислотная последовательность (кодоны 5, б и 7) и соответствующая нуклеотидная последовательность Организация и передачи генетического материи и Вследствие различия в механизмах экспрессии генов у прокарнот н эукарнот, Е, сой может оказаться хозяином, мою подходящим для производства белков зукариотических организмов.
Поэтому разработаны методы получения векторов для клонирования различных генов в кдетках дрожжей -одноклеточных эукарнот. Эти клонирующне векторы получают из репликонов дрожжевых клеток, так называемых 2рплазмид. Точки начала репликации этих векторов взяты у плазмид 2р и у рВК322, в результате чего они могут реплицироваться как в дрожжевых клетках, так н в Е.
со)1 Примером использования дрожжей для синтеза белков посредством клонирования генов эукариот может служить осуществленный таким образом синтез интерферона человека (интерферон — белок, обладающий противовнрусным действием в клетках человека и, возможно, противоопухолевым действием вообще). Дрожжевые клетки наиболее подходят, по-виднмому, для производства не содержащих вирусы вакцин против болезни человека, вызываемой вирусом гепатита В. Этот вирус состоит из нуклеопротеннового кора, содержащего геном вируса и окруженного фосфолипидной мембраной, поверхность которой составляют коднруемые геномом вируса белки. Антигенно активной составляющей является белок поверхности вируса, однако лля сильной антигенной активности необходимо, чтобы этот белок входил в состав фосфолипндной мембраны.
Мембранная система дрожжевых клеток аналогична системе других эукариотическь)х организмов и отлична от мембранной системы Е. со(1 Когда белок, коднруемый клонируемым геном вируса гепатита В, накапливается в дрожжевых клетках, то образуются фосфолнпидные частицы с белковой поверхностью, которые способны индуцировать производство вакцинируемым организмом антител против вируса в целом.
С другой стороны, при накоплении этого белка в клетках Е. сой он не связывается с фосфолипндами и поэтому не вызывает сильной антигенной реакции. Применение методов рекомбинантных ДНК к фундаментальным генетическим исследованиям мы рассмотрим в различных главах второй части. Литература АЬейоп Х (1977), КесогпЬьпап! РХА: ехатр!еь о( ргеьепг-дау геьеагсЬ, Вс(епсе, 196, 159 — 160. АЬейои А (1980). А гехо1ибоп !и Ъю!оду, Вс!епсе, 209, 1319-1 321.
АгЬег И'. (1979). Ргопюиоп апд Кпигабоп оГ 8епебс ехсЬапяе, 8сгепсе, 205, 361-365. Вегд Р. (198!). Рйьссгюпь апд гесопягисиопь оГ депе! апд сЬгопюьотеь, Бс!епсе, 213, 296 — ЗОЗ. В1н(е У.Е. е! а1. (1982). Рго!есгюп аяагпь1 Гоогапг)-гпоигЬ диеаье Ьу ипгоипяа!!оп иЬЬ а сЬеписа1!у ьуп!Ьеяхед рербде ргед!сгед Ггот гЬе тпа! пис!ео!где ьеииепсе, Ь)а!иге, 298, 30-33. Вппеп К.. Коьпе О. К (1968), Кереагед ья(иепсеь )п РЫА, Ясьепсе, 161, 529 — 540. СЬапд $., Соьеп Я.Ю.
(1977). Ги с!со я!е-ьресрбю 8епебс гесогпЬгпа1юп ргогпо!ед Ьу гбе Есо К! геяпсбоп епдопис!еаье, Ргос. Ыап Асад. Боб (38А. 74, 4811 "4815. Г ВЬггг И'. (! 98!). РЬ)А ьеяиепс!пд апд депе ягисюге, 8с!епсе, 214, 1305 — 1312. Огеесег К. К е! а!. (1981). Рдгес! гдепгрбсагюп оГ яс1г!е се1! апепиа Ьу Ь(о! Ьуьг(д!га!!оп, Ргос. Хаг(, Асад. Вс!. ()ВА, 78, 5081-5085, !гакига К. е! а1, (!977). Ехргеьйоп ш Еьсьеяс!иа соВ о( а сЬепьюайу ьуп!Ьеяхед депе Гог гЬе Ьоппопе ьогаа!оаа!1, Всьепсе, 198, 1056 -1063. Ьа!гд С. О., МсСаггяу В.
Д (1969). Мо!еси1аг сЬагас!епхабоп оГ !Ье РгоьорЬВа депоте, Репе!1сь, 63, 865 — 882. Кл1очевые слова -и понятия Задачи Размеры фряэ ментов (т. и. в.) ФермЕнт Хта ! МЬа 1 Хта! н МЬа1 20 1О 3,7и10 Размеры фрягмеигв (в т.п.в.) (! г.п.и = = 1ООО п.
и ) Фврмиит Вд! И Нда 1 ута ! Вд1ии Нда) Вд! В и бта 1 Г(да 1 и Вта 1 5 и 1О 5 и 10 2 и 13 5 2,5их 2, 3 и 1О 9. Методы работы с ДНК Матаня Т. е1 а1. (1978). ТЬе Во1вбоп о( з1гис1ига) Вспея Ггош 1!Ьгапея оГеисагуонс РЫА, Се!1, 15, 687 701. Мал1агн Т., Тппсб Е. Р., Ватбгаа)г 3., 1982. Мо!еси1аг С!ошп8: А ЬаЬогагогу Манив(, Сом брппд НвгЬог 1.аЬогв1огу, СоЫ Врпвд НагЬог, Н. 'г'.
[Имеется перевал: Маииатис Т., Фрич Э., Сэыбрук Длс. 1984. Молекулярное клонирование, М., Мир.) Иайалз Г). (1979). Кеыпсбоп епбопис!еаяез, Ыгп!вп Ыгия 40, япб йе везя Вепенся, 86епсе, 206, 903 — 909. КаЬсг(я К. д (1976).Кез1псноп евбопис!еазез, СКС Сгп. Кеч. ВюсЬеш., 4, 123 — 164. Библиотека генома Вектор для клонирования ДНК Зонд Карта сайтов рестрикции Кинетика ренатурации ДНК Линкер Метод Саузерна Определение нуклеотидной последова- тельности 9.1.', Препарат линейной вирусной ДНК оббабатывают указанными ниже ферментами и их комбинацией. Получившийся набор рестриктов подвергают электрофорезу. На основе представленных в таблице результатов постройте карту рестрикции вирусной ДНК.
Кадг(дисг К. 1... Таи К. С., 1983 КесогиЬтвпг РЫА Тесив!Оиез: Ав 1п(гобисг!оп, Абб!зоп-%ея!еу, Кевб!п8, Маяя. Яаидег К (!981). Регепшпацоп оГ пис1ео1Ые зециепсез эп РЫА, 8с1епсе, 214, 1205-1210. Ялий Н. О. (1979). Нис!еоббе зег)ивисе зреббсиу о( геыпс1юп епбопис1еаяез, Вс!енсе, 205, 455-462. )а(елгие(а и. е( а1. (1982). Вупйеця апб азяешЫу оГ Ьерв66з В чггия зигГасе апбдеп рвпэс1ея !в усам, Ыа(иге, 298, 347-350. )регтиг 2., Гэап(дяал Аэ.
(1968). Кэпе6ся оГ гепвщга1юп оГРНА, !. Мо!. В!о!., 31, 349-370. Палиндромная нуклеотидная последова- тельность Прогулка по хромосоме Рекомбинантная ДНК Уравнение Си( Фермент модификации ДНК Фермент рестрикции ДНК Электрофорез в геле ( 9.2. Препарат кольцевой плазмидной ДЙЫ-'подвергают действию указанных ферментов, а затем анализируют фрагменты при электрофорезе в геле. Используя представленную информацию, постройте карту рестрикции этой плазмидной ДНК. , 9.3.
Препарат линейной вирусной ДНК обрабатьгвают рестриктазой Ята 1 до полного расщепления. Электрофорез в геле выявляет присутствие фрагментов сле- Организация и передача генетического материала дуюших размеров (т.п.н.): 10, 7, б, 3 и 2. Параллельно интактную вирусную ДНК расщепляют той же эндонуклеазой неполностью, Полученные при неполном расшеплении пять фрагментов обозначены в порядке убывания размеров буквами от А до Е. Затем каждый из этих фрагментов обработан рестриктазой 5та 1 до полного расщепления и подвергнут электрофорезу.
Полученные результаты представлены в таблице. Постройте карту рестрикции Вта 1 вирусной ДНК. Фрагменты, полученные Размер фрагментов при поповной рвотрнв- паоле полной рвотрнации ции (в т.п.н.) А В С (э Е !О; 6; 2 7; 6; 2 10; 3 7; 2 6; 2 фрагменты при полол- Ратмиры фРагментов ной рвстрнппии попав полной Рвотрп». [[нн А В С (э Е 5,0; 3,0; 1,0 3,5; 3,0; !,0 5,0; 1,5 3,5; 1,0 4,0; 3,0; (,0 9.4. Препарат кольцевой плазмидной ДНК длиной 18 т.п.
н подвергают полной рестрикции эндонуклеазой Ки( 1. Электрофорез в геле выявляет наличие фрагментов следую[цих размеров; 5,0; 4,0; 3,5; 3,0; 1,5 и 1,0. Неполная рестрикция интактной плазмидной ДНК той же эндонуклеазой с последующим разделением фрагментов посредством электрофореза в геле показывает существование пяти фрагментов, обозначенных в порядке убывания размеров буквами от А до Е.
Результаты последующей полной рестрикции этих фрагментов представлены в таблице. Постройте рестрикционную карту кольцевой плазмидной ДНК. 95. Фрагмент, полученный при расщеплении рестриктазой ВРН1 ДНК СаллаЬ(з яаг!Ра клонируется в сайте ВатН1 плазмиды рВВ 322. При попытке выделить этот важный участок из плазмидной ДНК оказывается, что ни Вап[Н1, ни Ва! П не вырезают ДНК С. лаг!па из плазмидной.
Почему? Какой фермент рестрикции следует использовать, чтобы выделить растительную ДНК из рекомбннантной плазмиды". 9.6. При конструировании векторов серии харон оказывается, что все фаговые частицы несут встроенные участки ДНК. Почему не обнаруживаются фаговые частицы, которые несут лишь левое и правое плечо молекулы ДНК вектора. р9.7ч(Линейный фрагмент ДНК Есой! длинф 2,5 т. и, и, с единственным сайтом рестрикции НЬа1 клонируется в сайте Есой! плазмиды длиной 5 т,п.н. Карты рестрикции этих двух молекул ДНК изображены на рис. 9.20.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
