Диссертация (1335845), страница 29

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 29)

Так, Shughrue и соавт. (1997)обнаружили умеренное количество мРНК ЭР mRNA и отсутствие мРНК ЭР вТМЯ самок крыс, тогда как Laflamme и соавт. (1998) выявили незначительноеколичество мРНК ЭР и отсутствие мРНК ЭР в ТМЯ крыс обоего пола.Причиной указанных противоречий являются возможные видовые, половые иметодологические различия. По данным Fekete и соавт. (1999) ЭР выявляетсяв 76% гистаминэргических нейронов ТМЯ крыс и человека.

Их аксоны205формируют аксо-дендритические и аксо-соматические синапсы на нейронах,продуцирующих люлиберин (LHRH) (Fekete et al., 1999). Высокая пропорциягистаминэргическихнейронов,содержащихЭРсоответствует результатам собственного исследования.вТМЯчеловека,Локализация ЭР иЭР в ядре и цитоплазме нейронов ТМЯ, а также в нервных волокнахподтверждаетлитературныеданные,демонстрирующиеналичиеобоихподтипов эстрогеновых рецепторов в ядрах нейронов, их перикарионах,аксонах, дендритах, пресинаптических терминалях аксонов и дендритныхшипиках (Adams et al., 2002; Azcoitia et al., 1999; Kallo et al., 2001; Milner et al.,2001; Wagner et al., 1998). Глиальная локализация эстрогеновых рецепторов,отмеченная в настоящей работе, также соответствует исследованиям у крыс ичеловека, показавшим наличие ЭР и ЭР в астроцитах (Azcoitia et al., 1999;Donahue et al., 2000; Milner et al., 2001; Savaskan et al., 2001), а ЭР вмикроглиальных клетках (Li et al., 2000).Учитывая отсутствие связанных состарениемизмененийядерныхрецепторов и снижение экспрессии цитоплазматических ЭР и ЭР в ТМЯ умужчин,выраженныевлиянияэстрогеновнавозрастныеизмененияметаболической активности нейронов ТМЯ, опосредуемые через эстрогеновыерецепторы, маловероятны.цитоплазматическихЭРНе исключено, что увеличение экспрессиивТМЯприБоАлсвязанососнижениемметаболической активности нейронов.Принимая во внимание высокий уровень экспрессии ядерных ЭР и ЭРпри БоАл, ТМЯ, участвующее в регуляции возбуждения, обучения и памяти,может служить мишенью для эстрогенов, назначаемых с заместительной цельюу женщин в период менопаузы.Медиальное мамиллярное ядроЛитературные сведения об экспрессии ЭР/ЭР в ММЯ на уровне белкаи мРНК, оцениваемой с помощью иммуноцитохимических методов игибридизации in situ довольно противоречивы.

В некоторых работах мРНК ЭР206и мРНК ЭР не были обнаружены в ММЯ крыс (Laflamme et al., 1998; Shughrueet al., 1997) и человека (Osterlund et al., 2000). В то же время слабое илиумеренное мечение мРНК ЭР продемонстрировано Laflamme и соавт. (1998).Внутриядерное иммуноокрашивание эстрогеновых (скорее всего ЭР) ипрогестероновых рецепторов было показано в ММЯ самок обезьян (Goldsmithet al., 1997). Более того, иммуноцитохимическая экспрессия ЭР и ЭРнаблюдалась в ММЯ молодых (Kruijver et al., 2004) и пожилых (в настоящейработе) людей.

Несомненное наличие мРНК ЭР в замороженной ткани ММЯчеловека доказано с помощью цепной реакции полимеразы (Ishunina et al.,2005). Расхождения литературных данных можно объяснить видовыми,половыми, возрастными и методологическими различиями, такими какограниченная чувствительность антител и проб.ЭР и ЭР в ММЯ случаев с БоАлВнастоящейработебыловпервыепоказаноувеличениеиммуноцитохимической экспрессии ЭР в ММЯ случаев с БоАл. Причём вбольшей степени оно было выражено у пациентов мужского пола.

Ранееповышение содержания ядерных ЭР и ядерных и цитоплазматических ЭРпри БоАл было отмечено в БЯМ и ВЯДБ (Ishunina and Swaab, 2001). Savaskan исоавт. (2001) продемонстрировали увеличение экспрессии ядерных ЭР вгиппокампе при БоАл.

В настоящей работе более высокий процент нейроновММЯ с ядерными ЭР коррелировал с большими размерами АГ у женщинконтрольной группы и группы с БоАл, что указывает на стимулирующийэффект эстрогенов на метаболизм нейронов, опосредуемый через ЭР.Увеличение экспрессии ядерных ЭР у мужчин с БоАл скорее связано снейропатологическимипроцессамиприБоАл,анесповышениемметаболической активности нейронов ММЯ. Действительно, метаболическаяактивность нейронов была снижена в БЯМ (Salehi et al., 1994), увеличена вВЯДБ (Ishunina and Swaab, 2003) и не изменена в ММЯ случаев с БоАл, тогда207как содержание ядерных ЭР оказалось повышенным во всех этих случаях.

Этоговорит о том, что повышение экспрессии ядерных ЭР скорее являетсяфеноменом типичным для БоАл.Накопление ЭР в ядрах нейронов передне-базального мозга игипоталамуса при БоАл может быть связано с нарушением деградациирецептора в протеасоме, а также с накоплением мутантных сплайсинговыхформ.

Обе гипотезы были проверены в следующих экспериментах.Сплайсинговые варианты мРНК ЭР в медиальном мамиллярном ядреВ настоящем исследовании впервые в ММЯ человека были обнаруженысплайсинговые варианты мРНК ЭР э7, э4 и э2. В первом экзонеидентифицирована новая изоформа MB1. Также, установлена возможностьвыпадения небольших фрагментов из мРНК ЭР, например, 57 нуклеотидов изчетвёртого экзона у мужчины с БоАл.Экспрессия классической мРНК ЭРα была значительно повышена приБоАл, что подтверждает предыдущие результаты, свидетельствующие обувеличении иммунореактивности ядерных ЭРα в ММЯ случаев с БоАл(Ishunina et al., 2003).

Увеличение экспрессии белка и мРНК ЭРα в ММЯ приБоАл можно объяснить отрицательной обратной связью в условиях недостаткациркулирующих в плазме и локально синтезирующихся в ММЯ эстрогенов приБоАл (Ishunina et aal., 2005). Действительно, ранее было показано, чтосодержание белка и мРНК ЭРα может увеличиваться в отсутствие эстрогенов(Alarid et al., 1999).

Относительно высокий уровень экспрессии классическоймРНК ЭРα, а также повышение иммунореактивности ядерных ЭРα при БоАлуказывают на возможность благоприятного воздействия эстрогенов напознавательные функции, ассоциированные с ММЯ. К ним относятся: памятьна недавние события, обучение, эмоции, ориентировка в пространстве иобидчивость (Swaab, 2003; Ishunina et al., 2003).

С другой стороны, достаточновысокий уровень экспрессии сплайсинговых форм мРНК ЭРα э7, э4 и э2 и208MB1свидетельствуетоналичиивММЯмутантныхрецепторовсповреждениями основных функциональных доменов ЭРα.Результаты настоящего исследования, касающиеся альтернативногосплайсинга мРНК ЭРα, подтверждают данные литературы о том, что посравнению с другими сплайсинговыми вариантами, содержание изоформ э4,э2 и особенно э7 как в нормальных, так и в неопластических тканях, самоевысокое и близко к уровню экспрессии полных транскриптов (Ferro et al., 2003;Poola and Speirs, 2001; Horvath et al., 2002; Fasco et al., 2002), а такжепредоставляют новые данные относительно сплайсинговых вариантов мРНКЭРα при старении и БоАл.

Статистически достоверные различия уровнейтранскрипции сплайсинговых вариантов э7, э4, э2 между пациентами сБоАл и контрольными случаями отсутствовали. Однако, следует отметитьвысокую вариабельность данных. Например, содержание изоформы э7 былоповышено приблизительно в два раза у случаев с БоАл #7 и #10 по сравнению сконтрольными случаями #2 и #5 и не изменялось или уменьшалось в остальныхслучаях.

Аналогично, экспрессия сплайсингового варианта э2 была увеличенана 30% - в 4 раза у пациентов с БоАл #9 и #10 по сравнению с контрольнымислучаями #4 и #5 и не изменялась или уменьшалась в остальной группе с БоАл.В отношении отсутствия достоверных различий в экспрессии э7 и э4 междупациентами с БоАл и контрольными случаями, следует отметить, чтосодержание этих вариантов не отличалось в здоровых и поражённыхновообразованиями тканях молочной железы и эндометрия (Poola and Speirs,2001; Rice et al., 1997).Вариант э7Интересно, что чаще всего в ММЯ пожилых людей встречается вариант свыпадением седьмого экзона, кодирующего часть домена ЭРα, отвечающего засвязывание с лигандами. В соответствии с этим, по данным литературы, э7является основным сплайсинговым вариантом в здоровой и неопластическойткани лёгкого человека (Fasco et al., 2002).

Утрата седьмого экзона209подразумевает потерю значительной части домена для связывания с гормонамии лиганд-зависимой трансактивационной функцией AF2, что приводит кневозможности связывания с лигандами, нечувствительности варианта э7 кэстрогенам и анти-эстрогенам и отсутствию ассоциации с ко-активаторами(Garcia-Pedrero et al., 2003).

Помимо этого для этой изоформы характернонарушение распознавания эстроген чувствительных элементов и дефектсвязывания с ДНК (Garcia-Pedrero et al., 2003). Более того, э7 известен вкачестве доминантного негативного сплайсингового варианта, ингибирующегосвязывание ЭР и ЭР с их чувствительными элементами, а, следовательно, иэстроген-зависимуютранскрипционнуюактивациюпосредствомобоихклассических эстрогеновых рецепторов, при экспрессии на достаточно высокомуровне по сравнению с ЭР и ЭР (Garcia-Pedrero et al., 2003). В настоящемисследовании пропорциональное содержание изоформы э7 к классическоймРНК ЭРα было выше в контрольных случаях, чем у пациентов с БоАл. Этоозначает выраженное снижение содержания функционально активных ЭРα, атакже снижение или отсутствие эффектов от потенциального леченияэстрогенами на нейроны и глиальные клетки ММЯ у пожилых случаев.

Сдругой стороны, существует предположение о том, что доминантная негативнаяфункция сплайсинговых вариантов ЭРα может защищать ткани от избыточноговоздействия эстрогенов. Этот вывод основан на 30-кратном увеличенииэкспрессии варианта э3 в здоровых по сравнению с неопластическимитканями молочной железы (Ferro et al., 2003; Erenburg et al., 1997).Действительно, введение эстрадиола уменьшает содержание классическогобелка ЭР и увеличивает концентрацию варианта э7 в аденокарциномеэндометрия (Horvath et al., 2002).

Характеристики

Список файлов диссертации