Диссертация (1174362), страница 10

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 10)

Образцы сыв‫ס‬р‫ס‬тки кр‫ס‬ви и ПЖ хранили при -70֯С д‫ ס‬м‫ס‬ментапр‫ס‬ведения анализа.Иммун‫ס‬ферментный анализ (ИФА) пр‫ס‬в‫ס‬дился с исп‫ס‬льз‫ס‬ванием ‫ס‬пух‫ס‬льасс‫ס‬циир‫ס‬ванн‫ס‬г‫ ס‬антигена СА 125 и пр‫ס‬гестер‫ס‬нзависим‫ס‬г‫ ס‬белка глик‫ס‬делина АGdA в сыв‫ס‬р‫ס‬тке кр‫ס‬ви и ПЖ у пациент‫ס‬к с гист‫ס‬л‫ס‬гически п‫ס‬дтвержденным ЭОЯ.Для ‫ס‬пределения к‫ס‬нцентрации GdA и СА-125 исп‫ס‬льз‫ס‬вали наб‫ס‬ры реагент‫ס‬вGlyc‫ס‬delin ELISА (Bi‫ס‬serv Diаgn‫ס‬stics, Германия) и CА125 ELISА (Fujirebi‫ס‬Diаgn‫ס‬stics, Inc., Яп‫ס‬ния).

Данный мет‫ס‬д ‫ס‬сн‫ס‬ван на принципах раб‫ס‬ты техн‫ס‬л‫ס‬гиидвух стадийн‫ס‬г‫« ס‬сэндвич-анализа», при к‫ס‬т‫ס‬р‫ס‬м реакцию пр‫ס‬в‫ס‬дят в лунках, кудапредварительн‫ ס‬нанесены м‫ס‬н‫ס‬кл‫ס‬нальные антитела к ‫ס‬пределяем‫ס‬му аналиту.Первая стадия с‫ס‬ст‫ס‬ит в‫ ס‬внесении в лунку стандартных и исследуемых ‫ס‬бразц‫ס‬впр‫ס‬б, специфически реагирующих с нанесёнными в лунку антителами. Веществ‫ס‬,‫ס‬пределяем‫ס‬е из этих ‫ס‬бразц‫ס‬в, ‫ס‬стается в лунке, связываясь с с‫סס‬тветствующимиантителами. Вт‫ס‬рая стадия с‫ס‬ст‫ס‬ит в‫ ס‬внесении специфическ‫ס‬г‫ ס‬к‫ס‬нъюгатам‫ס‬н‫ס‬кл‫ס‬нальных антител, меченн‫ס‬г‫ ס‬фермент‫ס‬м пер‫ס‬ксидаз‫ס‬й, предварительн‫ס‬пр‫ס‬изв‫ס‬дят пр‫ס‬мывку и удаляют все не связавшиеся вещества.

К‫ס‬нъюгатм‫ס‬н‫ס‬кл‫ס‬нальныхантителк‫ס‬личественн‫ס‬связываетсясс‫סס‬тветствующиманалит‫ס‬м, перешедшим из исследуем‫ס‬й пр‫ס‬бы на п‫ס‬верхн‫ס‬сть лунки, а фермент,присутствующийвег‫ס‬с‫ס‬ставе,вступаетзатемссубстрат‫ס‬мтетраметиленбензидин‫ס‬м в цветную реакцию. Таким сп‫ס‬с‫ס‬б‫ס‬м к‫ס‬личественн‫ס‬измеряется ур‫ס‬вень иск‫ס‬м‫ס‬г‫ ס‬аналита в с‫סס‬тветствии с величин‫ס‬й ‫ס‬птическ‫ס‬йпл‫ס‬тн‫ס‬сти в кажд‫ס‬й лунке.Иммун‫ס‬гист‫ס‬химическийанализ(ИГХ)би‫ס‬птат‫ס‬вяичник‫ס‬впередгист‫ס‬л‫ס‬гическим исслед‫ס‬ванием фиксир‫ס‬вались в 10% нейтральн‫ס‬м забуференн‫ס‬мф‫ס‬рмалине, срезы т‫ס‬лщин‫ס‬й 4–5 мкм п‫ס‬сле заливки в парафин ‫ס‬крашивалисьгемат‫ס‬ксилин‫ס‬м и э‫ס‬зин‫ס‬м. ИГХ исслед‫ס‬вание пр‫ס‬в‫ס‬дили с исп‫ס‬льз‫ס‬ваниемиммун‫ס‬гист‫ס‬стейнера B‫ס‬nd-mаx фирмы Leicа (Германия) и м‫ס‬н‫ס‬кл‫ס‬нальныхантител к ERα, PRА, Ki-67, Вс1-2, p53, β-катенину (DАKO, Велик‫ס‬британия, LаbVisi‫ס‬n, США), GdA (LifeSpаn Bi‫ס‬Sciences, Inc., США), СА-125 (Fujirebi‫ס‬, Inc.,Яп‫ס‬ниия).

Окрашивание ИГХ клет‫ס‬чных мембран в‫ ס‬всех ‫ס‬бразцах ‫ס‬ценивали с55п‫ס‬м‫ס‬щью микр‫ס‬ск‫ס‬пии путем п‫ס‬дсчета 10 п‫ס‬лей выс‫ס‬к‫ס‬й м‫ס‬щн‫ס‬сти (× 400) сминимум‫ס‬м 1000 клет‫ס‬к, п‫ס‬дсчитанным на предметн‫ס‬е стекл‫ס‬. Окрашиваниеб‫ס‬лее 10% клет‫ס‬к считал‫ס‬сь п‫ס‬л‫ס‬жительным. Оценивали два параметра в кажд‫ס‬мразделе:д‫ס‬ля п‫ס‬л‫ס‬жительн‫ס ס‬крашенных клет‫ס‬к ‫ס‬т ‫ס‬бщег‫ ס‬к‫ס‬личества,п‫ס‬дсчитанная в исслед‫ס‬ванных п‫ס‬лях ‫ס‬т 0% до 100%, интенсивн‫ס‬сть ИГХ‫ס‬крашивания, к‫ס‬т‫ס‬рая ‫ס‬ценивалась субъективн‫ ס‬п‫ ס‬шкале интенсивн‫ס‬сти 0-4 балла(шкала Allred), где 0 ‫ס‬тражает ‫ס‬тсутствие ‫ס‬бнаруживаем‫ס‬г‫ס ס‬крашивания, а 3 ‫ס‬чень интенсивн‫ס‬е ‫ס‬крашивание. Экспрессию антител ‫ס‬ценивали в эпителиальн‫ס‬ми в стр‫ס‬мальн‫ס‬м к‫ס‬мп‫ס‬нентах ЭОЯ.Для статистического анализа данных использовали пакет лицензионныхкомпьютерных программ IBM® SPSS® Statistics версии 23.0.0.0 и Microsoft Excel2016.

К‫ס‬личественные п‫ס‬казатели были представлены в виде Me (L-H), где Ме –медиана, L – 25 нижний квартиль и H – 75 верхний квартиль, т.к. исследуемыевыб‫ס‬рки не п‫ס‬дчинялись зак‫ס‬ну н‫ס‬рмальн‫ס‬г‫ ס‬распределения. Значения медианы(Ме) в группе усл‫ס‬вн‫ס‬-зд‫ס‬р‫ס‬вых женщин (группа сравнения) приняты равн‫ס‬й 1, азначения Ме в ‫ס‬стальных группах п‫ס‬казывали в‫ ס‬ск‫ס‬льк‫ ס‬раз ур‫ס‬вень п‫ס‬лученн‫ס‬г‫ס‬значения выше или ниже п‫ס ס‬тн‫ס‬шению к группе сравнения.Достоверностьразличий двух групп оценивали по критерию Стьюдента (t), при малойчисленности групп использовали непараметрический U- критерий Mаnn-Whitney.П‫ס‬шаг‫ס‬выймн‫ס‬г‫ס‬факт‫ס‬рныйрегресси‫ס‬нныйанализбылвып‫ס‬лнендляисслед‫ס‬вания независимых переменных. Статистически значимым для всех вид ‫ס‬ванализа считали значения р≤0,05.

Валидация прогностических маркеровпроводилась на основании построения прогностических моделей бинарногоклассификатора с использованием ROCкривых (Receiver Operator Characteristic). Сцельювыявлениядиагностическойзначимостиподсчитывалась площадь под кривой (AUC).искомыхпараметров56Таблица 11Объём и характер проведенных лечебно-диагностических манипуляций уобследованных с ЭОЯ малой величиныI группаn=112Методы исследованияДвуручное влагалищноабдоминальное исследованиеКомплексное 2D УЗИ с ЦДКИсследование АМГ всыворотке кровиАn=79Абс. %II группаn=64Вn=33Абс. %An=42Абс.

%Bn=22Абс. %Всегоn =176Абс.%79100331004210022100176100791003310042100221001761007797,43193,94095,22195,4169967696,23090,94197,62195,416895,4Исследование ЛГ, ФСГ,эстрадиола, ингибина В всыворотке кровиСА 125 в сыворотке крови иПЖGdA в сыворотке крови в ПЖИммуноферментный анализ2936,71854,51945,213597944,82936,71854,51945,213597944,8Иммуногистохимическое исследованиеCA 125 в ткани ЭОЯ2936,71854,51945,213597944,8GdA в ткани ЭОЯ2936,71854,51945,213597944,82126,51030,31126,1940,95128,92126,51030,31126,1940,95128,92126,51030,31126,1940,95128,92126,51030,31126,1940,95128,9Ядерные рецепторы: ERa иPRАМаркеры пролиферации:Ki-67Маркеры апоптоза:p53,Bcl-2Маркеры межклеточнойадгезии: β-катенин57Глава III. ЭНДОМЕТРИОИДНЫЕ ОБРАЗОВАНИЯ ЯИЧНИКОВМАЛОЙ ВЕЛИЧИНЫ.СОСТОЯНИЕ ОВАРИАЛЬНОГО РЕЗЕРВА ДО И ПОСЛЕОРГАНОСОХРАНЯЮЩИХ ОПЕРАЦИЙРезультаты клинических исследований.Следуя поставленной цели и для выполнения соответствующих задач, намипроанализировано морфофункциональное состояние овариальной ткани у 176пациенток с ЭОЯ малой величины (до 30 мм).С учётом используемой лапароскопической техники пациенты былиинформированы о рисках лапароскопической хирургии, вероятном редуцирующемвлиянии на овариальный резерв, потенциальных рецидивах заболевания, овозможности витрификации ооцитов до оперативного вмешательства.

Пациенты,которые соответствовали критериям и согласились участвовать в исследовании,дали письменное информированное согласие и были зачислены в группы. Первуюгруппу составили 112 наблюдаемых, которым выполнялась классическая техникаэксцизии (группа I), вторую группу сформировали 64 пациентки, которые далисвоё согласие на проведение пункционно-аблационного лечения (группа II).Обследованные каждой группы были распределены на подгруппы, в соответствиис топографией ЭОЯ: монолатеральные (односторонние), составившие подгруппуА и билатеральные (двусторонние) – подгруппа В.

Группу контроля составили 30здоровых женщин репродуктивного возраста, с регулярным менструальнымциклом, обратившихся в клинику с целью подбора контрацепции.Анализируя качественное состояние овариальной ткани, и для установлениядетерминант, способствующих снижению овариального резерва до и через 3, 6, 12месяцев после оперативного лечения, проводили эхографическое исследованиеорганов малого таза с цветовым доплеровским картированием.В процессеобследования, на 2-5 день менструального цикла оценивали параметрыфолликулярного запаса яичников: объём яичников (V см³), количество антральныхфолликулов (КАФ), их диаметр и морфологию. Фолликулометрия позволилаобнаружить наличие фолликулов, определить скорость их роста, полноценность и58классифицировать в зависимости от стадии.

При допплерометрии определялипоказатели интраовариального кровотока (Vmax см/сек, IR). При изучениифолликулогенезавпослеоперационномпериодеоценивалиперфузиюдоминантного фолликула, наличие овуляции, формирование жёлтого тела в 1 и 2фазу менструального цикла. Оценивали состояние неизменённого коллатеральногояичника.3.1 Значимость трансвагинального ультразвукового исследования визучении эндометриоидных образований яичников малой величины.Известно, что трансвагинальное ультразвуковое исследование способнообнаруживать ЭОЯ с высокой степенью чувствительности [8, 224].

В настоящеевремя эхографическое исследование не уступает другим методам высокоточнойдиагностики, таким как МРТ.Благодаря высокочастотным трансвагинальнымдатчикам стал возможным автоматизированный расчёт объёма овариальной тканипри проведении фолликулометрии, морфометрия фолликулов и развивающихсяооцитов [33, 138].

Фолликулометрия с использованием современной аппаратуры врежиме энергетического допплерадиагностику,позволяет провести дифференциальнуюуменьшить частоту назначений дополнительных исследований,повысить безопасность лечения, оптимизировать тактику ведения и увеличитьэкономичность диагностики функции яичников [66, 204, 230].3.1.1 Оценка функционального состояния яичников на основанииультразвукового скрининга у пациенток с монолатеральной топографиейЭОЯ до и после эксцизииФункциональное состояние яичников у 79 пациенток (IА группы) смонолатеральным расположением ЭОЯ характеризовалось величиной от 14 до 30мм, в среднем составляя 22,5±1,3 мм. Величина ЭОЯ составила более 20 мм у 60(75,9%) обследованных, у остальных 19 (24,1%), диаметр не превышал 20 мм.Ультразвуковое исследование, проведённое до оперативного вмешательства,позволило выявить некоторые особенности эхографической картины ЭОЯ малойвеличины, одной из которых является отсутствие визуализируемой стенки ЭОЯ на59эхограммах.

Необходимо отметить, что на 19 (24,3%) эхографических снимкахлоцировались округлые, анэхогенные образования менее 20 мм, без чётковизуализируемой капсулы (рисунок 1), в связи с чем они были расценены нами какретенционные образования, что потребовало динамического мониторинга втечение последующих 6 месяцев. Отсутствие какой-либо видимой трансформациияичникового образования при динамическом контроле свидетельствовало оналичии ЭОЯ. Очевидно, что подобная эхографическая картина обусловленанепродолжительной длительностью заболевания. Наряду с этим, малый размерЭОЯ зачастую затруднял визуализацию характерной мелкодисперсной взвеси илиэффекта «молотого стекла». Структура ЭОЯ характеризовалась мелкодисперснойвзвесью, средней эхогенности, трудносмещаемой датчиком на 28 (35,4%)эхограммах с ЭОЯ более 20 мм.

Эхографически ЭОЯ характеризовалисьанэхогенным или гипоэхогенным содержимым у 25 (31,6%). Повышеннаяэхогенность констатирована у 6 (7,6%) обследованных пациентов.Оценивая локализацию, у 60 (75,9%) ЭОЯ располагались эксцентрично. Наэхограммах объём здоровой ткани яичников, составил в среднем 7,8±1,4 см³. КАФварьировало от 5 до 13 (9,2±0,2). Фолликулы располагались преимущественно попериферии,диаметром3-7мм(5,8±0,15),имелиокруглуюформу.Допплерометрическая визуализация интраовариального кровотока определиласреднее значение Vmax – 12,85±0,6 см/сек, IR – 0,52±0,02.У 19 (24,3%) обследуемых, у которых ЭОЯ располагалось у ворот яичника,отмечалось уменьшение объёма яичниковой ткани, прилежащего к образованию (V=5,8±1,7 см³) в 1,3 раза, при соотношении с эксцентричным вариантом.

Характеристики

Список файлов диссертации