Диссертация (1174192), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Адресные наноконтейнеры интернализуются существенно быстрее, и интенсивность внутриклеточной флюоресценции в этом случае возрастает более, чем в 2 раза (а в случае с анти-KDR – почтив 3) по сравнению с невекторными липосомами. Показано, что векторные липосомы интернализуются в клетки глиомы С6 путем клатрин-зависимого эндоцитозав отличие от наногелей, коньюгированных с моноклональными антителами противVEGF, KDR.
Кавеолин-опосредованный механизм эндоцитоза, наоборот, не влияетна степень интернализации липосом. Липосомы с неспецифическим вектором и невекторные липосомы, по-видимому, способны проникать в клетки С6 как путемклатрин-зависимого эндоцитоза, так и с помощью других неспецифических механизмов. Также была установлена способность наногелей, конъюгированных с моноклональными антителами против VEGF, KDR и Avastin, использовать различныетипы эндоцитоза.
Результаты, полученные в данном исследовании, могут быть использованы для создания новых, более совершенных средств внутриклеточной доставки противоопухолевых препаратов и генетического материала.89ВЫВОДЫ1.Ковалентная конъюгация тиолированных моноклональных анти-VEGF иVEGFR2 антител с 10% катионизированными липосомами позволяет получатьвекторизованные наноконтейнерные системы, способные селективно связываться с клетками глиомы С6.2.Ковалентная конъюгация тиолированных моноклональных анти-VEGF иVEGFR2 антител с наногелями (блок-иономерный комплекс, сшитых цепейполиэтиленгликоль-б-полиметакриловой кислоты) через малеимидный линкер позволяет получать векторизованные наногелевые контейнерные системы,способные селективно связываться с клетками глиомы С6.3.Сравнительная конфокальная микроскопия с колокализационным анализомфлюоресцентных сигналов от иммунолипосомальных контейнерных систем,меченных DIL и векторных наногелей, меченных DID позволила продемонстрировать, что векторизованные наноконтейнеры интернализуются в клеткимишени достоверно быстрее (в среднем в 2 раза) и эффективнее, чем невекторные.4.Анализ механизмов интернализации наноконтейнерных систем с помощьюспецифических ингибиторов эндоцитоза показал, что векторизованные (антиVEGF и VEGFR2 антителами) липосомальные наноконтейнеры диаметром150 – 180 нм интернализуются клеткой-мишенью с помощью клатрин-зависимого механизма, в то время как невекторные наноконтейнеры транслоцируются посредством клатрин-независимого неспецифического механизма.5.Интернализация векторных наногелей, модифицированных моноклональными антителами к VEGF и VEGFR2, в отличии от аналогичных иммунолипосом, осуществляется не только с помощью клатрин-зависимого механизма,доля которого в интернализации данного вида контейнеров составляет 70%,но и посредством других механизмов, независимых от ингибиторов клатрина,кавеолина-1 и макроэндоцитоза.906.Продемонстрирована способность векторизованных анти-VEGF и VEGFR2антителами наноконтейнерных иммунолипосомальных систем эффективнодоставлять плазмидную ДНК pCop-Green-N в ядро клеток низкодифференцированной глиомы линии С6 и детектировать продукт ее экспрессии.91СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.
Estanqueiro M. Nanotechnological carriers for cancer chemotherapy: The state of theart / M. Estanqueiro, M.H. Amaral, J. Conceicao, J.M. Sousa Lobo // Colloids Surf BBiointerfaces. - 2015. - Vol. 126C. - P. 631-648. Правильный вид2. Zhang J. Non-viral nanocarriers for siRNA delivery in breast cancer / J. Zhang, X. Li,L. Huang // J Control Release. - 2014. - Vol. 190. - P. 440-450.3. Minko T. New generation of liposomal drugs for cancer / T. Minko, R.I. Pakunlu, Y.Wang, J.J. Khandare, M. Saad // Anticancer Agents Med Chem. - 2006. - Vol. 6. - № 6.- P.
537-552.4. Korchagina A.A. Generation of recombinant extracellular fragment of vascularendothelial growth factor receptor 2 and specific monoclonal antibodies to this receptor /A.A. Korchagina, S.A. Shein, A.V. Leopol'd, N.E. Volgina, O.I. Gurina, I.P. Lazarenko,O.M. Antonova, V.P. Baklaushev, V.P. Chekhonin // Bull Exp Biol Med. - 2014. - Vol.156. - № 3.
- P. 357-362.5. Yameen B. Farokhzad Insight into nanoparticle cellular uptake and intracellulartargeting / B. Yameen, W.I. Choi, C. Vilos, A. Swami, J. Shi, O.C. Farokhzad // J ControlRelease. - 2014. - Vol. 190. - P. 485-499.6. Gratton S.E. The effect of particle design on cellular internalization pathways / S.E.Gratton, P.A. Ropp, P.D. Pohlhaus, J.C.
Luft, V.J. Madden, M.E. Napier, J.M. DeSimone// Proc Natl Acad Sci U S A. - 2008. - Vol. 105. - № 33. - P. 11613-11618.7. Kibria G. The effect of liposomal size on the targeted delivery of doxorubicin toIntegrin alphavbeta3-expressing tumor endothelial cells / G. Kibria, H. Hatakeyama, N.Ohga, K. Hida, H.
Harashima // Biomaterials. - 2013. - Vol. 34. - № 22. - P. 5617-5627.8. Bannunah A.M. Mechanisms of nanoparticle internalization and transport across anintestinal epithelial cell model: effect of size and surface charge / A.M. Bannunah, D.Vllasaliu, J. Lord, S. Stolnik // Mol Pharm. - 2014. - Vol. 11. - № 12. - P. 4363-4373.9. Reardon D.A. Vredenburgh Glioblastoma multiforme: an emerging paradigm of antiVEGF therapy / D.A.
Reardon, P.Y. Wen, A. Desjardins, T.T. Batchelor, J.J.Vredenburgh // Expert Opin Biol Ther. - 2008. - Vol. 8. - № 4. - P. 541-553.9210. Maeda H. Tumor vascular permeability and the EPR effect in macromoleculartherapeutics: a review / H. Maeda, J. Wu, T. Sawa, Y. Matsumura, K. Hori // J ControlRelease. - 2000. - Vol. 65. - № 1-2. - P. 271-284.11.
Shein S.A. Site-directed delivery of VEGF-targeted liposomes into intracranial C6glioma / Shein SA, Korchagina AA, Abakumova TO, Kiuznetsov II, Abakumov MA,Baklaushev VP, Gurina OI, Chekhonin VP // Bull Exp Biol Med. - 2015. - Vol. 158. - №3. - P. 371-376.12. Baklaushev V.P. Treatment of glioma by cisplatin-loaded nanogels conjugated withmonoclonal antibodies against Cx43 and BSAT1 / V.P. Baklaushev, N.N.
Nukolova, A.S.Khalansky, O.I. Gurina, G.M. Yusubalieva, N.P. Grinenko, I.L. Gubskiy, P.A. Melnikov,K.S. Kardashova, A.V. Kabanov, V.P. Chekhonin // Drug Deliv. - 2014.13. Ostrom Q.T. CBTRUS statistical report: primary brain and central nervous systemtumors diagnosed in the United States in 2007-2011 / Q.T. Ostrom, H.
Gittleman, P. Liao,C. Rouse, Y. Chen, J. Dowling, Y. Wolinsky, C. Kruchko, J. Barnholtz-Sloan // NeuroOncol. - 2014. - Vol. 16 Suppl 4. - P. iv1-63.14. Schittenhelm J. Recent advances in subtyping tumors of the central nervous systemusing molecular data / J. Schittenhelm // Expert Rev Mol Diagn. - 2017. - Vol. 17. - № 1.- P. 83-94.15. Roos A. Molecular and Microenvironmental Determinants of Glioma Stem-Like CellSurvival and Invasion / A.
Roos, Z. Ding, J.C. Loftus, N.L. Tran // Front Oncol. - 2017.- Vol. 7. - P. 120.16. Palmerston L. Dendrimers as Nanocarriers for Nucleic Acid and Drug Delivery inCancer Therapy / L. Palmerston Mendes, J. Pan, V.P. Torchilin // Molecules. - 2017. Vol. 22. - № 9.17. Abakumov M.A. VEGF-targeted magnetic nanoparticles for MRI visualization ofbrain tumor / M.A. Abakumov, N.V. Nukolova, M. Sokolsky-Papkov, S.A.
Shein, T.O.Sandalova, H.M. Vishwasrao, N.F. Grinenko, I.L. Gubsky, A.M. Abakumov, A.V.Kabanov, V.P. Chekhonin // Nanomedicine. - 2015. - Vol. 11. - № 4. - P. 825-833.18. Chekhonin V.P. Pirogov Targeted delivery of liposomal nanocontainers to theperitumoral zone of glioma by means of monoclonal antibodies against GFAP and the93extracellular loop of Cx43 / V.P.
Chekhonin, V.P. Baklaushev, G.M. Yusubalieva, A.E.Belorusova, M.V. Gulyaev, E.B. Tsitrin, N.F. Grinenko, O.I. Gurina, Y.A. Pirogov //Nanomedicine. - 2012. - Vol. 8. - № 1. - P. 63-70.19. Harris N.M. Nano-particle delivery of brain derived neurotrophic factor after focalcerebral ischemia reduces tissue injury and enhances behavioral recovery / N.M. Harris,R. Ritzel, N.S.
Mancini, Y. Jiang, X. Yi, D.S. Manickam, W.A. Banks, A.V. Kabanov,L.D. McCullough, R. Verma // Pharmacol Biochem Behav. - 2016. - Vol. 150-151. - P.48-56.20. Shein S.A. VEGF- and VEGFR2-Targeted Liposomes for Cisplatin Delivery toGlioma Cells / S.A. Shein, Kuznetsov, II, T.O. Abakumova, P.S. Chelushkin, P.A.Melnikov, A.A. Korchagina, D.A. Bychkov, I.F.
Seregina, M.A. Bolshov, A.V. Kabanov,V.P. Chekhonin, N.V. Nukolova // Mol Pharm. - 2016. - Vol. 13. - № 11. - P. 3712-3723.21. Matsumoto J. The transport mechanism of extracellular vesicles at the blood-brainbarrier / J. Matsumoto, T. Stewart, W.A. Banks, J. Zhang // Curr Pharm Des. - 2017.22. Eslaminejad T. Glioblastoma Targeted Gene Therapy Based on pEGFP/p53-LoadedSuperparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles / T. Eslaminejad, S.N. NematollahiMahani, M. Ansari // Curr Gene Ther. - 2017.
- Vol. 17. - № 1. - P. 59-69.23. Morris V.B. Arginine-rich polyplexes for gene delivery to neuronal cells / V.B.Morris, V. Labhasetwar // Biomaterials. - 2015. - Vol. 60. - P. 151-160.24. Jafari M. Nonviral approach for targeted nucleic acid delivery / M. Jafari, M. Soltani,S. Naahidi, D.N. Karunaratne, P. Chen // Curr Med Chem. - 2012. - Vol. 19. - № 2. - P.197-208.25. Klingmuller W. [Bacterial resistance factors as vectors for gene manipulation andgene therapy (author's transl)] / W.
Klingmuller // MMW Munch Med Wochenschr. 1975. - Vol. 117. - № 24. - P. 1051-1060.26. Ramamoorth M. Non viral vectors in gene therapy- an overview / M. Ramamoorth,A. Narvekar // J Clin Diagn Res. - 2015. - Vol. 9. - № 1. - P. GE01-06.27. Loh X.J. Deen Utilising inorganic nanocarriers for gene delivery / X.J. Loh, T.C. Lee,Q. Dou, G.R. Deen // Biomater Sci. - 2016. - Vol. 4. - № 1. - P. 70-86.9428.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
