Диссертация (1174188), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Так, выявленная более низкаяинтенсивность экспрессии рецептора CD11b на фагоцитах пуповинной кровинедоношенных новорожденных по сравнению с детьми, родившимися в срок,может отражаться на способности иммунных клеток мигрировать к местуинвазии патогенов и распознавать компоненты комплемента на поверхностимикроорганизмов. Полученные нами результаты согласуются с даннымилитературы: гестационный возраст ребенка оказывает существенное влияние наэкспрессию рецептора CR3 [87]. Патоген-распознающая способность клетокврожденного иммунитета во многом определяется интенсивностью экспрессиина них толл-подобных рецепторов и рецепторов к опсонинам.
Обращает на себявнимание, что содержание TLR2+ и TLR4+ нейтрофилов и моноцитов а такжеинтенсивность экспрессии данных патоген-распознающих рецепторов в кровиздоровых доношенных новорожденных и недоношенных детей без признаковинфекции значимо не различались, что подтверждает данные, полученныеранее [132].Инактивациячужеродныхмикроорганизмовнейтрофильнымигранулоцитами и моноцитами осуществляется после их поглощения какпосредствомвоздействияпротеолитическихферментов,такинеферментативным путем при окислении свободными радикалами кислорода.Оценка функциональной активности фагоцитов в данном исследованиивключала анализ их способности поглощать опсонизированные бактериальныеклетки и продуцировать кислородные радикалы в ответ на стимул.
Определеновыраженноеснижениепоглотительнойактивностинейтрофильныхгранулоцитов и моноцитов пуповинной крови недоношенных новорожденныхпо сравнению с доношенными. Установленное нами наличие прямой94корреляционнойзависимостимеждуинтенсивностьюфагоцитозаигестационным возрастом согласуется с данными литературы [64,142]. Согласнорезультатам Filias A., фагоциты пуповинной крови новорожденных обладаютменее выраженной поглотительной способностью по сравнению с клеткамипериферическойкровивзрослыхдоноров,однакоданныеразличиянивелируются к 3 суткам жизни [64].
Мы не исследовали фагоцитарнуюактивность нейтрофилов и моноцитов крови здоровых доношенных детей вдинамике, однако показали, что у недоношенных новорожденных содержаниефагоцитирующихнейтрофиловимоноцитов,атакжеинтенсивностьфлуоресценции поглощенных ими бактерий существенно выше на 3 суткижизни, чем при рождении.Исследование респираторного взрыва осуществлялось на образцахцельнойкрови,посколькунашейзадачейбылоизучениефункцийнейтрофильных гранулоцитов in vivo, и мы принимали во внимание, чтоизолирование клеток от микроокружения может существенно влиять на ихфункциональную активность. Нами определена более низкая интенсивностьпродукции кислородных радикалов клетками пуповинной крови недоношенныхдетей по сравнению с доношенными при активации форбол-12-миристат-13ацетатом и опсонизированным зимозаном.
Продукция активных формкислорода при активации зимозаном является рецептор-опосредованной:взаимодействуя с толл-подобными рецепторами и рецепторами к опсонинам,опсонизированный зимозан активирует процесс фагоцитоза и, как следствие,продукцию АФК. Использование форбол-12-миристат-13-ацетата позволяетактивировать продукцию АФК путем прямого воздействия на протеинкиназу С.Принимая во внимание отсутствие статистически значимых различий вэкспрессии патоген-распознающих рецепторов на фагоцитах в пуповиннойкрови детей различного гестационного возраста и более низкую активностьАФК-продуцирующих клеток крови при действии РМА, мы предположили, чтоу недоношенных детей ферментная система, ответственная за образованиекислородных радикалов фагоцитами, незрелая. Следует отметить наличие95прямой корреляционной зависимости между интенсивностью продукции АФКи гестационным возрастом, что согласуется с литературными данными [142].Обращает на себя внимание несоответствие наших результатов данным,полученным другими авторами [145].
Согласно результатам, представленным вобозначенной работе, интенсивность респираторного взрыва нейтрофильныхгранулоцитовноворожденныхразличногогестационноговозрастаприактивации РМА и E.coli не различалась. По-видимому, различия в результатахмогут быть связаны с применением разных методов измерения интенсивностипродукции АФК. Мы использовали хемилюминесцентный метод, позволяющийоценить как внутриклеточную, так и внеклеточную продукцию АФК.Поскольку в данном случае определяется активность всех клеток крови,существенное влияние на интенсивность хемилюминесценции оказываетколичество АФК-продуцирующих клеток, что подтверждается наличиемпрямойкорреляционнойзависимостимеждуинтенсивностьюхемилюминесценции и содержанием нейтрофильных гранулоцитов.
Напротив,в исследовании Stålhammar M. респираторный взрыв оценивался методомпроточной цитофлуориметрии. В данном случае принимается во вниманиелишь внутриклеточная продукция кислородных радикалов в популяциинейтрофильныхгранулоцитов,продукцияАФКдругимиклеткаминеучитывается.Ключевым процессом при кооперации врожденного и адаптивногоиммунитета является презентация антигена Т-клеткам. Полученные намиданные о более низкой экспрессии антиген-презентирующей молекулы MHC IIкласса (HLA-DR) на моноцитах пуповинной крови новорожденных посравнению с периферической кровью их матерей свидетельствуют о невысокомантиген-презентирующем потенциале неонатальных фагоцитов и согласуются срезультатами, полученными ранее [133]. Также как и в исследовании Prosser A.[122], мы не обнаружили корреляционной зависимости между поглотительнойактивностью моноцитов и интенсивностью экспрессии на них HLA-DR.96При изучении адаптивного звена иммунной системы новорожденныхразличного гестационного возраста, мы отметили, что содержание Т-клетокразличных субпопуляций в пуповинной крови здоровых доношенных инедоношенных детей значимо не различалось.
Однако обращает на себявнимание более высокая экспрессия CD4 на лимфоцитах недоношенныхноворожденных. Экспрессия γδTCR на CD3+ Т-клетках также была значимовыше у детей, родившихся преждевременно. По-видимому, это можнообъяснить тем, что формирование данного рецептора на лимфоцитах впроцессе их развития предшествует появлению αβTCR. Ранее было показано,что число γδТ-клеток в крови плода максимально во втором триместребеременности и значительно сокращается к доношенному сроку [61].Для профилактики респираторного дистресс-синдрома у новорожденногопри преждевременных родах проводится антенатальная кортикостероиднаятерапия на сроках 24-34 полные недели беременности.
По мнению рядаисследователей,кортикостероидныепрепаратыобладаютиммунорегулирующим действием [54]. В то же время, существуют данные оботсутствии влияния терапии кортикостероидами у беременных женщиннасодержание в пуповинной крови недоношенных новорожденных лимфоцитов,экспрессирующих CD4, CD8, CD25, CD62L, HLA-DR, а также на соотношениеTh1/Th2 лимфоцитов [131] и экспрессию TLRs на моноцитах [101].Известно, что в крови новорожденных детей содержание В-лимфоцитовзначимо выше, чем у взрослых.
Существуют данные о различиях всубпопуляционном составе В-клеток в крови в процессе взросления [110]. Вданном исследовании нами проанализировано содержание В-клеток различныхсубпопуляций в пуповинной крови новорожденных различного гестационноговозраста. Определено более высокое содержание незрелых В-лимфоцитов впуповинной крови недоношенных детей по сравнению с доношенными,установленоспособностьюпреобладаниесекретироватьпопуляцииВ1-клеток,иммуноглобулиныхарактеризующихсяклассаMнизкойспецифичности, над В2-лимфоцитами. Поскольку именно В2-лимфоциты97способны к переключению классов иммуноглобулинов и дифференцировке вдолгоживущие плазматические клетки и клетки памяти, полученные намиданные могут свидетельствовать о низкой эффективности гуморальнойиммунной защиты у недоношенных новорожденных.
С другой стороны,особенностью В1-клеток является их способность распознавать повторяющиесяантигенные фрагменты на поверхности патогена без участия Тh-клеток, чтоделает возможным развитие Т-независимого иммунного ответа [156]. Крометого, в настоящее время имеются данные о способности В1 клеток подавлятьвоспалительныйиммунныйответзасчетсинтезаисекрециипротивовоспалительных цитокинов, что, с одной стороны, предотвращаетразвитие патологических воспалительных реакций у детей, с другой – снижаетих устойчивость к возбудителям инфекционных заболеваний [158].Характерная черта адаптивного иммунитета, отличающая его отврожденного,–способностьформироватьиммунологическуюпамять.Известно, что у новорожденных детей существенно снижено содержание Тклеток памяти, что может являться причиной неэффективного клеточногоиммунного ответа при реинфицировании новорожденного ребенка [38,118].
Мыопределили, что содержание В-лимфоцитов памяти в пуповинной кровипреждевременно рожившихся детей также значимо ниже, чем у здоровыхдоношенных. Таким образом, можно предположить, что эффективностьгуморального иммунного ответа при повторном попадании патогена такжебудет невысока. Следует отметить, что среди В-лимфоцитов памяти унедоношенныхдетейпреобладаликлетки,вкоторыхнепроизошлопереключения классов синтезируемых иммуноглобулинов. Вероятно, этосвязано с тем, что у новорожденных отсутствует второй сигнал при кооперацииВ-клеток с Тh-лимфоцитами за счет низкой экспрессии костимуляторныхмолекул, что, в свою очередь, снижает способность В-лимфоцитов кизотипическому переключению классов иммуноглобулинов [83].
Преобладаниенезрелых и В1 лимфоцитов, низкое содержание В-клеток памяти в кровинедоношенных новорожденных во многом обусловливает неэффективность98гуморального звена их иммунной системы. Недостаточная секреторнаяактивность неонатальных плазматических клеток обусловливает меньшеесодержание IgG в пуповинной крови новорожденных по сравнению спериферической кровью взрослых доноров. В то же время, в третьем триместребеременности материнские иммуноглобулины класса G активно проникаютчерез плаценту.
Однако у недоношенных детей, в связи с преждевременнымрождением, уровень IgG в пуповинной крови ниже, чем у доношенных.Связь между иммунной, нервной, эндокринной, кроветворной системамина уровне организма осуществляют цитокины – группа регуляторных пептидов,для которых характерны плейотропизм и взаимозаменяемость биологическогодействия,индуцибельныйспецифичности,Гиперпродукцияхарактерсаморегуляцияцитокиновсинтеза,отсутствиепродукции,можетприводитьантигеннойформированиекразвитиюсети.системнойвоспалительной реакции.
По мнению Бородина Е.А. [4], повышениесекреторной активности иммунных клеток плода может быть связано сострессовой реакцией на процесс родов, при этом, результаты проведенногоисследования свидетельствуют об отсутствии влияния способа родоразрешенияна содержание цитокинов в периферической крови новорожденных [150]. Намине выявлено статистически значимых различий в содержании хемокинов (IL-8,IP-10, MCP-1, MIP-1a, MIP-1b, Eotaxin, RANTES), провоспалительных (IL-1b,IL-2, IL-6, IL-9, IL-12, IL-15, IL-17, IFNγ, TNFα) и противовоспалительных (IL4, IL-5, IL-10, IL-13, IL-1Ra) цитокинов в плазме пуповинной кровинедоношенных детей без признаков инфекции по сравнению с детьми,родившимися в срок.
Ранее было показано, что при отсутствии активационногостимула внутриклеточное содержание IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFNγ вмоноцитах, лимфоцитах и естественных киллерных клетках соизмеримо уноворожденных детей различного гестационного возраста [118,140]. Дляоценкиуровняцитокиновавторыиспользовалиметодпроточнойцитофлуориметрии, который, в отличие от мультиплексного анализа, позволяет99оценивать содержание искомых молекул в заданной популяции клеток домомента их секреции во внеклеточную среду.В процессе нормального эмбриогенеза существенное значение имеютростовые факторы, в том числе вазоэндотелиальный фактор роста (VEGF) иосновной фактор роста фибробластов (bFGF, или FGF-b). VEGF обладаетмощным ангиогенным действием, увеличивает проницаемость сосудов,принимает участие в неоангиогенезе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
