Диссертация (1173214), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Средний показатель составил 11,2. Диапазон значенийварировал от 9,39 до 14,5. Стандартное отклонение составило ±0,77.Средний показатель поляризации десквамированных эндотелиоцитов восновной группе составил 0,14. Максимальное значение 0,34, минимальное –0,06. Стандартное отклонение от среднего значения поляризации клеткисоставило ±0,053.Такимобразом,периферическойкровиприизучениипомимодесквамированныхклассическогоэндотелиоцитовтрадиционногопараметраколичества ДЭК мы получили цифровой портрет клетки, что послужило основой93для создания новой технологии исследования состояния эндотелия у человека.При цитологии десквамированных эндотелиоцитов периферической кровиполученырезультаты,отраженныетаблице14.Сравнениедвухгруппосуществлялось с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни.Таблица 14 – Параметры десквамированных эндотелиоцитовпериферической крови в исследуемых группах (N=180).ПоказательКоличество ДЭК, ×104кл/100 млСредний диаметр ДЭК,мкмСредний периметр ДЭК,мкмСредняя площадь ДЭК,мкм2Группаосновная (n=90)контрольная (n=90)Уровеньр12,6±5,895,5±2,12<0,000129,5±9,4043,9±3,99<0,000193,8±29,90139,6±14,10<0,0001842,0±484,441546,8±294,11<0,0001Фактор формы ДЭК11,2±0,7712,7±0,11<0,0001Поляризация ДЭК0,14±0,0530,08±0,021<0,0001При сравнении показателей среднего количества ДЭК в исследуемыхгруппах получено статистически достоверное повышение более чем в 2 раза вгруппе беременных с неразвивающейся беременностью: 12,6×104 кл/100мл восновной группе и 5,5×104 кл/100мл – в контрольной группе (p<0,0001).
Следуетотметить, что разброс значений по этой переменной также существенно выше восновной группе. Гистограмма распределения значений показателя «КоличествоДЭК» (рисунок 7) наглядно показывает различия между группами.Количество ДЭК, х10^4 кл/100 мл9435302520151050Основна яКонтрольнаяГруппаРисунок 7 – Графики распределения количества десквамированныхэндотелиоцитов периферической крови в исследуемых группах.При морфометрическом исследовании ДЭК периферической крови такжеполучены достоверные отличия в исследуемых группах.
Средний эквивалентныйдиаметр ДЭК у беременных в контрольной группе составил 43,9 мкм, что в 1,5раза выше данного показателя у женщин основной группы 29,5 мкм (p<0,0001), иразброс значений по этой переменной также существенно выше по сравнению сконтрольной группой, т.е. контрольная группа выглядит более однородной посреднему эквивалентному диаметру ДЭК.
Графики распределения значений95показателя «Средний эквивалентный диаметр ДЭК» (рисунок 8) нагляднодемонстрируют различия между группами.Средний диаметр ДЭК, мкм6050403020100Основна яКонтрольнаяГруппаРисунок 8 – Графики распределения среднего эквивалентного диаметрадесквамированных эндотелиоцитов в исследуемых группах.Средний периметр ДЭК у женщин контрольной группы составил 139,6 мкм,в основной группе этот показатель составил 93,8 мкм (p<0,0001), разбросзначений по этой переменной также существенно выше по сравнению сконтрольной группой, т.е. контрольная группа выглядит более однородной и посреднему периметру ДЭК.
Графики распределения значений показателя «Среднийпериметр ДЭК» демонстрируют различия между группами (рисунок 9).Средний периметр ДЭК, мкм96160130100704010Основна яКонтрольнаяГруппаРисунок 9 – Графики распределения среднего периметра десквамированныхэндотелиоцитов в исследуемых группах.Средняя площадь ДЭК у беременных контрольной группы составила 1546,8мкм² и 842,00 мкм² у женщин основной группы. Этот показатель также восновной группе намного ниже (p<0,0001), а разброс значений по этойпеременной существенно выше по сравнению с контрольной группой, т.е.контрольная группа выглядит более однородной и по средней площади ДЭК.Гистограмма распределения значений показателя «Средняя площадь ДЭК» такженаглядно показывает различия между группами (рисунок 10).97Средняя площадь ДЭК, мкм^225002000150010005000Основна яКонтрольнаяГруппаРисунок 10 – Графики распределения показателя средней площадидесквамированных эндотелиоцитов в исследуемых группах.Фактор формы ДЭК периферической крови составил 12,7 у женщинконтрольной группы и 11,2 у беременных основной группы (p<0,0001), а разбросзначений по этой переменной существенно выше по сравнению с контрольнойгруппой, т.е.
контрольная группа выглядит более однородной и по факторуформы ДЭК.98Поляризация десквамированных эндотелиоцитов: 0,08 в контрольнойгруппе, 0,14 в основной группе (p<0,0001), разброс значений по этой переменнойтакже существенно выше по сравнению с контрольной группой*.Таким образом, получены референтные значения морфометрическихпоказателей циркулирующих ДЭК у женщин в I триместре беременности, а такжеопределены колебания значений этих показателей при нарушении гестации.Средний показатель количества ДЭК в группе здоровых беременных в Iтриместре составил 5,5±2,12×104 клеток/100мл, в группе с неразвивающейсябеременностью этот показатель был значительно выше и составил 12,6±5,89×104клеток/100мл (р<0,0001).
Показатель количества ДЭК, полученной по методикепредложенной J.Hladovec с соавт. в 1978 г. является классическим маркеромэндотелиальнойдисфункции,иполученныеданныедостоверноподтверждают верность выборки пациентов в исследуемых группах.Примененные нами морфометрические показатели среднего эквивалентногодиаметра ДЭК, среднего диаметра ДЭК, средней площади ДЭК, а также фактораформы и поляризации ДЭК в основной группе показали результат намного ниже,а разброс значений по этим переменным существенно выше по сравнению сконтрольной группой. Средний диаметр ДЭК в группе здоровых беременныхсоставил 43,9±3,99 мкм, в группе с неразвивающейся беременностью 29,5±9,40мкм (р<0,0001).
Средний периметр ДЭК у беременных контрольной группысоставил 139,6±14,10 мкм, в основной группе 93,8±29,90 (р<0,0001). Средняяплощадь ДЭК у здоровых беременных 1546,8±294,11 мкм2, в группе снесостоявшимся выкидышем 842,0±484,44 мкм2 (р<0,0001). Фактор формы ДЭКв контрольной группе показал результат 12,73 ± 0,11 и 11,27 ± 0,77, поляризацияДЭК: 0,08±0,02 в группе здоровых беременных и 0,14±0,053 в группе снесостоявшимся выкидышем.* Данные опубликованы в статье – Роль эндотелиопатии в патогенезе неразвивающейсябеременности/А.В.Миронов, А.М.Торчинов, О.В.Галачиевпрактический журнал.
– 2016. – Т. 14, №3. – С. 53-57.идр.//Патогенез.Научно-99Статистическая достоверность изменений морфометрических показателейдесквамированныхэндотелиоцитовпринарушениигестациипозволяетрассматривать их как информативные маркеры сосудистых нарушений. Следуетподчеркнуть, что в работе впервые использованы геометрические параметры ДЭКпериферической крови в качестве диагностического критерия пораженияэндотелиальной системы у человека.3.3. Морфоцитометрия сосудов ворсинчатого хориона плодаИсследуемый материал, полученный при инструментальном удаленииплодного яйца при артифициальном аборте, представляет собой разрозненныефрагменты ткани ворсинчатого хориона и эндометрия различной окраски оттемно-красного до серого цвета губчатой или эластической консистенции.
С 6-ойнедели в первичных ворсинах появляются мезенхимальные клетки, которыеформируют вторичные ворсины хориона. В течение недели в мезенхимальныхворсинах появляются зачатки сосудов. Происходит формирование третичныхворсин. С 7 до 10 недель стенка фетального капилляра представленаформирующими её эндотелиальными клетками. На срезе стенка сосуда содержитот 1 до 10 эндотелиальных клеток.
При морфометрии толщина стеки капиллярафактически определяется толщиной эндотелиальной клетки. С 10 недели толщинастенки фетального сосуда увеличивается: в структуре стенки появляютсяперициты – отросчатые клетки соединительной ткани, осуществляющие питаниеэндотелиоцита, регуляцию его пролиферативной активности и формирующиебазальную мембрану капилляра. Таким образом, микросокпическое исследованиестенки капилляра хориона в на гестационном сроке до 10 недель позволяетнаиболее достоверно оценить состояние фетальных эндотелиоцитов и определитьих морфометрические параметры.Всего исследовано 180 гистологических препаратов ворсинчатого хориона.У каждой пациентки проводилась компьютерная морфометрия 10 сосудовтретичных ворсин хориона плода (рисунок 11).
В исследование включались100сосуды, в которых отсутствовали перициты, что определяло унификацию методаисследования.Рисунок 11 – Сосуд ворсинчатого хориона (10 недель). Окраскагематоксилин-эозин. Увеличение 600×.В ходе работы определялись следующие морфометрические параметры(рисунок 12):1. Средняя толщина стенки сосуда (СТст).2. Средний диаметр просвета сосуда (СДс).3. Средняя площадь просвета сосуда (СПс).4. Индекс Керногана – отношение толщины стенки сосуда к диаметрупросвета сосуда (СТст/СДс)5. Индексапоптозаэндотелиоцитов(ИАЭ)–отношениеколичестваэндотелиоцитов с морфологическими признаками апоптоза к общемуколичеству исследуемых клеток. Апоптоз в эндотелиоцитах определялсяпутем сегментации при морфоденситометрии: фиксация порогового уровнясигнала в зоне плотности ядерного материала позволяла выделять участкикомпактизации, маргинации и фрагментации хроматина с формированиемхроматомеров – денситометрический признак апоптоза клетки.После подготовки препаратов с помощью указанных выше методикпроведена микроскопия ворсинчатого хориона в контрольной группе.
Приописательной микроскопии полученных гистологических препаратов полученыследующие результаты (таблица 15).101Рисунок 12 – Сосуд ворсинчатого хориона (8 недель). Мофоцитометрия впрограмме Leika Application Suite LAZ EZ Version 2.1.0. (2012). Окраскагематоксилин-эозин. Увеличение 600×.Частота некрозов ткани хориона в препаратах контрольной группысоставила 6,7% (6 чел.). Кровоизлияния в строму третичных ворсин выявлены у25 человек (27,8%).
Лейкоцитарная инфильтрация хориона обнаружена у 4пациентоквконтрольнойгруппе(4,4%).Дистрофияворсинхорионадиагностирована у 7 человек (7,8%). Отек стромы хориона зафиксирован у 12беременных контрольной группы (13,3%).Таблица 15 – Микросокпическое описание гистологических препаратовхориона в контрольной группе (n=90).АбсолютноеПараметрзначениеЧастота, %Некротические изменения66,7Кровоизлияния2527,8Лейкоцитарная инфильтрация44,4Дистрофия ворсин77,8Отек стромы ворсин1213,3Согласнодизайнуисследованиябылапроведенакомпьютернаяморфоцитометрия сосудов хориона (таблица 16).
Средняя толщина стенки сосудав контрольной группе составила 0,9 мкм. Максимальное значение данного102параметра составило 1,25 мкм, минимальное значение 0,67 мкм. Стандартноеотклонение параметра средней толщины стенки сосуда составило ±0,12 мкм.Таблица 16 – Морфометрия сосудов ворсинчатого хориона у беременных0,671,250,129006,94,538,920,9390039,816,5963,8410,96Индекс Керногана9000,060,0440,1170,017Индекс апоптоза, %9003,925,71,49сосуда, мкмСредний диаметрпросвета сосуда, мкмСредняя площадьпросвета сосуда, мкм²±mMaxСт. отклонение,Мin0,9Ср. толщина стенкиизмерений900ПараметрСреднее, МКоличествоконтрольной группы (n=90).Средний диаметр просвета фетального капилляра в контрольной группесоставил 6,9 мкм. Диапазон колебания данного параметра определен от 4,53 мкмдо 8,92 мкм. Стандартное отклонение параметра ±0,93 мкм.Средняя площадь просвета сосуда ворсинчатого хориона в этой группесоставила 39,8 мкм2. Данный параметр варьировал от 16,59 мкм2 до 63,84 мкм2.Стандартное отклонение данного показателя составило ±10,96 мкм2.Индекс Керногана составил в контрольной группе 0,06.
Диапазон колебанияиндекса Керногана в контрольной группе составил от 0,044 до 0,117. Стандартноеотклонение данного параметра составило ±0,017.103Индекс апоптоза эндотелиоцитов составил в контрольной группе 3,9%.Диапазон колебания данного параметра составил от 2 до 5,7%, стандартноеотклонение индекса апоптоза составило ±1,49%.Структура хориона при несостоявшемся выкидыше имеет свои характерныеособенности. Макросокпически материал представляет массы эластической илигубчатой структуры темно-красного или серого цвета.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
