Диссертация (1154491), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Проведенныйнами анализ частоты трисомий и моносомий по аутосомам не выявилстатистически значимых различий между подгруппами с нормальным иповышенным уровнем фрагментации ДНК, несмотря на тенденцию к ихувеличению.80Таблица 9. Частота аномалий числа и структуры хромосом в подгруппах снормальным и высоким уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов (общаягруппа исследуемых пар)УровеньфрагментацииДНКсперматозоидовМенееБолеер15%15%МУУ-(n=112)(n=58)тестНормальный66.1747.960.0275Трисомии по аутосомам18.9529.110.2736Моносомии по аутосомам16.7229.510.113Трисомии по половым хромосомам4.68.540.3134(45, Х0)1.224.950,0313Делеции и дупликации5.3935.890.0116Кариотип эмбрионаМоносомии по половым хромосомам81Таблица 10.
Частота аномалий числа и структуры хромосом в подгруппах снормальным и высоким уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов (группарепродуктивного возраста)УровеньфрагментацииДНКсперматозоидовМенееБолеер15%15%МУУ-(n=71)(n=22)тестНормальный58.3945.020.0896Трисомии по аутосомам23.7730.840.2407Моносомии по аутосомам24.6330.340.5328Трисомии по половым хромосомам5.699.260.4623(45, Х0)0.933.50,0261Делеции и дупликаций5.0338.660,0412Кариотип эмбрионаМоносомии по половым хромосомамВместе с тем в рамках данной работы было обнаружено существенноеувеличение частоты делеций и дупликаций у эмбрионов в парах с повышеннымуровнем фрагментации ДНК сперматозоидов, что, как упоминалось ранее,позволяет предполагать возможность передачи нарушений в структуре ДНКсперматозоидов в генетический материал эмбриона.
Также важно отметить, что82согласнорядуисследований,повреждениесеменнойДНКоказываетотрицательное влияние на оплодотворение и частоту имплантации эмбрионов ииграет сопричастную роль в наступлении спонтанных абортов в ситуацияхестественного наступления беременности [Ferraretti A.P. et al., 2004; Kahraman S.et al., 2004; Kahraman S. et al., 2006; Rubio C. et al., 2007; Sills E.
S. et al., 2014,Sakkas D. et al., 2010]. Более того, вероятность неблагоприятного исходазначительно возрастает в тех случаях, когда эмбрионы трансплантируются безПГС [Chow J.F et al., 2014].Такимобразом,повышенныйуровеньфрагментацииДНКядрасперматозоидов является существенным признаком, при наличии которогоследует прописывать пациентам ПГС в ходе осуществления цикла ВРТ.Действительно, многие авторы предлагают введение анализа на целостностьсеменной ДНК в клиническую практику при работе с бесплодными парами, всовокупности с предваряющими обследованиями. Особенно это исследованиеактуально для мужчин, чьи показатели спермограммы близки к норме, аномалиикариотипа не обнаруживаются, как и другие явные причины бесплодия, в случаяхнеудачных попыток ЭКО, ИКСИ или привычного невынашивания.
ИсследованиефрагментацииДНКсперматозоидоввтакомслучаеможетоказатьсяэффективным диагностическим методом, выявляющим нарушения фертильностиу мужчин [Руднева С.А. и соавт., 2014; Gianaroli L. et al., 2005].3.5.Распределение эмбрионов по полу в зависимости от параметровспермограммыВ рамках настоящей работы также было проанализировано распределениепо полу эмбрионов с нормальным набором хромосом (табл.
11).83Таблица 11. Встречаемость эмбрионов мужского и женского пола взависимости от различных параметров спермограммыПараметрКонцентрацияПоказатель≥ 15 млн/млсперматозоидов≥ 32%Доля< 4%сперматозоидовМУУ-тест0.7873125113119130.70850.71841181071211370.78810.093466751581630.74491481210.7904≥ 4%морфологиейФрагментация≥ 15%ДНК ядра< 15%сперматозоидовМужского пола Женского пола< 32%подвижныхс нормальнойP<15 млн/млсперматозоидовДоля активно-Эмбрионы0.0808104136Обнаружено снижение встречаемости мужских эмбрионов в парах с низкойдолей морфологически нормальных сперматозоидов, хотя отличия не достиглистатистической значимости (p=0.09).
Исходя из представленных результатов,другие параметры спермы не влияют на это соотношение. Для отслеживанияподобных корреляций необходимы выборки значительно большей численности,но уже на имеющемся материале можно наблюдать определенную тенденцию. Влитературе имеются данные о том, что возраст матери влияет на соотношение пополу среди рожденных детей, и с его увеличением наблюдается тенденция кснижению частоты рождения мальчиков [Rueness J. et al., 2012]. Интересно, чтоавторы из Китая в большом ретроспективном исследовании, включавшем более84120000 детей, обнаружили, что применение метода ИКСИ и перенос эмбрионовна стадии бластоцисты (морфологическая селекция) приводит к снижениючастоты рождения мальчиков [Bu Z.
et al., 2014]. В связи с тем, что данныетехнологии применялись и в нашей работе, о том,является ли морфологиясперматозоидов определяющим критерием распределения эмбрионов по полу,можно будет судить лишь после дополнительных исследований.****Таким образом, полученные в рамках представленного исследования данныесвидетельствуют о том, что отклонения в функциональных параметрахсперматозоидов ассоциированы с изменениями числа и структуры хромосомэмбрионов.
Наши результаты соответствуют данным, полученным SanchezCastro et al. (2009), согласно которым, в парах с бесплодными мужчинаминаблюдалось повышенное количество получаемых анеуплоидных эмбрионов.Несмотря на то, что потенциально сперма низкого качества (по результатамспермограммы и уровню фрагментации ДНК) должна вносить отрицательныйвкладвклиническиеисходыВРТ,исследований,непосредственнодемонстрирующих влияние параметров сперматозоидов отца на кариотипэмбрионов, недостаточно, и настоящая работа способствует расширениюимеющихся представлений по данному вопросу.Вместе с тем нужно понимать, что невозможно установить зависимостьхромосомных аномалий эмбрионов исключительно от мужского факторабесплодия, так как эмбрионы принадлежат определенной паре, и имеетсязначимый вклад генетического материала матери.
Часто фактор бесплодияявляется сочетанным или идиопатическим.Полученные нами данные позволяют полагать, что отбор эмбрионовпосредствомпредимплантационногогенетическогоскринингазначительноуменьшает вероятность неблагоприятного исхода цикла ВРТ для пар, в которых умужчины диагностирована патология сперматозоидов. Это особенно значимо вслучаях множественных неудачных попыток вспомогательных репродуктивных85технологий, либо когда речь идет о пациентах - мужчинах позднегорепродуктивного возраста, так как у последних наблюдается значительнобольшее, в сравнении с нормой, количество нарушений в генетическом материалесперматозоидов.86ЗАКЛЮЧЕНИЕРезультаты проведенного исследования позволяют подвести следующиеитоги:1. Характеристики сперматозоидов отца оказывают значимое влияние нарезультаты предимплантационного генетического скрининга эмбрионов,полученных методом ИКСИ.2. При концентрации сперматозоидов ниже нормы ВОЗ, составляющей 15млн/мл, наблюдается статистически значимое повышение частотыэмбрионов с кариотипом 45, X0.3.
Снижение содержания морфологически нормальных сперматозоидов вэякуляте(менее4%)сопровождаетсядостовернымувеличениемвстречаемости в кариотипе эмбрионов численных аномалий аутосом,делеций и дупликаций, а также повышением риска рождения ребенка ссиндромом Клайнфельтера.4.
Значимоговлиянияподвижностипредимплантационногосперматозоидовгенетическогоскрининганарезультатыэмбрионовнеобнаружено, что можно объяснить техникой оплодотворения методомИКСИ,прикоторойвыборсперматозоидаспомощьюмикроманипулятора нивелирует влияние ослабленной подвижностисперматозоидов.5. У отцов с уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов, превышающим15%, достоверно увеличена частота эмбрионов с делециями идупликациями в хромосомах, а также с кариотипом 45, Х0, чтосвидетельствует о возрастании риска рождения ребенка с синдромомШерешевского-Тернера у мужчин с повышенным уровнем фрагментацииДНК ядра сперматозоидов.87Практические рекомендации1. Для более точного прогнозирования исхода программы ВРТ необходимоуделять большее внимание диагностике патологии сперматозоидов.2.
Рекомендуется введение определения уровня фрагментации ДНК впереченьобязательныханализов,предшествующихвступлениюбесплодной пары в программу ВРТ.3. Если у мужчины выявляются отклонения в функциональных показателяхсперматозоидов,целесообразновыполнятьпредимплантационныйгенетический скрининг для снижения риска рождения ребенка ссиндромамиКлайнфельтера,Шершевского-Тернераидругимизаболеваниями, обусловленными изменением числа и структуры хромосом.Это также позволит снизить риск невынашивания беременности исамопроизвольного абортирования плода, связанных с наличием аномалийв кариотипе эмбриона.88СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ1.
CGH - comparative genome hybridization, сравнительная геномнаягибридизация2. ET - embryo transfer, перенос эмбриона в полость матки3. FISH - метод флуоресцентной гибридизации in situ4. MESA- микрохирургическая аспирация спермы придатка яичка5. PESA - подкожная аспирация спермы придатка яичка6. TESA - аспирация тканей яичек7. ВРТ - вспомогательные репродуктивные технологии8.
ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения9. ИКСИ - от англ. ICSI — Intra Cytoplasmic Sperm Injection,введение сперматозоида в цитоплазму, интрацитоплазматическая инъекциясперматозоида.10.ИМСИ - интраплазматическая инъекция морфологически отобранногосперматозоида11.ЛГ - лютеинизирующий гормон12. ПГД - предимплантационная генетическая диагностика эмбрионов13.ПГС - предимплантационный генетический скрининг эмбрионов14.РКИ - рандомизированные контролируемые исследования15.СГГ - сравнительная геномная гибридизация16.ТВП - трансвагинальная пункция яичников17.ФСГ - фолликулостимулирующий гормон18.ХГЧ - хорионический гонадотропин человека19.ЭКО - экстракорпоральное оплодотворение89СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.Алоян К.
А., Матвеев А. В., Морев В. В., Корнеев И. А. Физиологическиемеханизмы обеспечения подвижности сперматозоидов // Урологическиеведомости. –2013. –№4. –С.14-19.2.Баранов В.С. Цитогенетика эмбрионального развития человека // СПб.:Изд-во Н-Л. –2007. 640 с.3.Баранов В. С., Кузнецова Т. В. Цитогенетика эмбрионального развитиячеловека: научно-практические аспекты // СПб.: Научная литература –2007. –С. 252-310.4.Брагина Е.Е., Сорокина Т.М., Арифулин Е.А., Курило Л.Ф. Генетическиобусловленные формы патозооспермии.
Обзор литературы и результатыисследований // Андрология и генитальная хирургия. –2015. –№3.– С. 2939.5.Быков В.Л. Сперматогенез у мужчин в конце XX века (обзор литературы)// Проблемы репродукции.–2000.–№ 1. –С. 6-13.6.Воробьева О.А., Воскресенская А.В., Одинцов А.А., Филатов М.В.Мужское бесплодие и нарушение структурной организации хроматинасперматозоидов // Проблемы репродукции. –2005. –Т.6. –С. 56–62.7.Габараева В.В., Калугина А.С. Возможности использования селективногопереноса одного эмбриона в программах донорства ооцитов // Ж.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
