Диссертация (1154491)
Текст из файла
Федеральное государственное автономное образовательное учреждениевысшего образованияРОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВНа правах рукописиКиселева Юлия ЮрьевнаРОЛЬ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СПЕРМАТОЗОИДОВОТЦА В ПРОГРАММАХ ПРЕДИМПЛАНТАЦИОННОГОГЕНЕТИЧЕСКОГО СКРИНИНГА ЭМБРИОНОВ03.02.07 – генетикаДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степени кандидата биологических наукНаучный руководитель:Азова Мадина Мухамедовна – доктор биологических наук, доцентМосква2017ОГЛАВЛЕНИЕСтр.Введение…………………………………………………………………..3Глава 1.
Обзор литературы…………………………………………….101.1Функциональные показатели сперматозоидов. Причинымужского бесплодия……............................................................................101.2Фрагментация ДНК ядра сперматозоидов……………………231.3Предимплантационный генетический скрининг эмбрионов…30Глава 2. Материал и методы исследования………………………….382.1.Материал исследования ……………………………………………382.2.Методы исследования ………………………………………………39Глава 3. Результаты и обсуждение……………………………………...643.1.Концентрация сперматозоидов……………………………………..643.2.Подвижность сперматозоидов……………………………………...693.3.Морфология сперматозоидов ………………………………………723.4.Фрагментация ДНК ядра сперматозоидов ………………………..803.5.Распределение эмбрионов по полу в зависимости от параметровспермограммы……………………………………………………………….83Заключение…………………………………………………………………87Список сокращений……………………………………………………….89Список литературы……………………………………………………….902ВВЕДЕНИЕРабота выполнена на базе Федерального государственного бюджетногоучреждения «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имениакадемика В.И.
Кулакова» Министерства здравоохранения России и на кафедребиологиииобщейгосударственногогенетикиавтономногоМедицинскогоинститутаобразовательногоФедеральногоучреждениявысшегообразования «Российский университет дружбы народов».Актуальность проблемыВ течение многих лет бесплодие остается актуальной медико-социальнойпроблемой. Известно, что с ней в течение репродуктивного периода сталкиваютсяот 8% до 15% супружеских пар (ВОЗ, 2010), то есть в мире насчитывается более100 млн. супружеских пар, не способных к самостоятельному зачатию ребенка,причем более 40% из них не могут иметь детей по причине мужского бесплодия.Лишь у 70% мужчин удается установить причину бесплодия современнымиметодами диагностики, а остальные 30% случаев приходятся на так называемоеидиопатическое бесплодие [Krausz C., Forti G., 2012]. По данным Российскогоцентра акушерства, гинекологии и перинатологии более 4 млн. мужчин в РФстрадают бесплодием. Бесплодие в браке в других странах имеет сравнимыепоказатели [Сухих Г.
Т. и др., 2008]. Следует отметить, что только 34% населениянашей странызнаетосуществованиимужскогобесплодия,остальныеубеждены, что оно бывает только женским [Троицкой И.А. и др., 2001].Благодаря революционному развитию вспомогательных репродуктивныхтехнологий (ВРТ) программа экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) внастоящеевремяявляетсясамымэффективнымметодомлечениябесплодия. Вместе с тем согласно опубликованным в 2013 г. данным Российскойассоциации репродукции человека (РАРЧ), в 2011 году только 36,6% пациентокзабеременели после проведения процедуры ЭКО и 25,8% женщин, прошедшихпроцедуру ЭКО, родили ребенка [РАРЧ, 2011].3Стремительное развитие ВРТ дало возможность иметь детей при формахбесплодия, которые ранее считались абсолютно бесперспективными для лечения[Кулаков В.И., Леонов Б.В., 2005], что, прежде всего, обусловлено достижениямимолекулярной генетики и эмбриологии.
Распространяются в клиническойпрактике методики ИКСИ (от англ. ICSI — Intra Cytoplasmic Sperm Injection:введение сперматозоида всперматозоида),цитоплазму,криоконсервацияинтрацитоплазматическаяипредимплантационнаяинъекциягенетическаядиагностика эмбрионов, в частности, предимплантационный генетическийскрининг эмбрионов (ПГС) на наличие анеуплоидий или других мутаций еще допереноса эмбриона, т.е. до наступления беременности [Harper J.
C., SenGupta S.B., 2011].Важнейшей задачей программы ВРТ является рождение здорового ребенка.Однако большинство исследований свидетельствует о том, что частотахромосомных нарушений эмбрионов, полученных методом ВРТ, чрезвычайновысока. Многие ученые полагают, что именно наличие у эмбрионов хромосомныханомалий обусловливает низкую эффективность имплантации и частую потерюбеременности, наблюдаемые при реализации ВРТ. В этой связи необходимостьдиагностики возможных генетических нарушений сделала актуальным развитиемолекулярно-генетическихметодовпредимплантационногогенетическогоанализа эмбрионов [Екимова Е. В.
и др., 2012].Технология сравнительной геномной гибридизации (СГГ) в последние годыстала активно применяться в медицине. За рубежом этот метод широкораспространился в рутинной практике лабораторий ВРТ и получил название CGH(comparative genome hybridization). Ряд исследований показал, что эффективностьвыявленияанеуплоидийспомощьюметодасравнительнойгеномнойгибридизации по сравнению с методом FISH (флуоресцентная гибридизация insitu) выше на 20-25%. Более того, кроме численных аномалий с помощью СГГвыявляются и другие хромосомные нарушения, не обнаруживаемые прииспользовании FISH, такие как многие делеции и амплификации участков4хромосом.
Показано, что применение данного метода повышает результативностьпрограммы ВРТ [Traversa M.V.et al., 2011].Существуют многочисленные исследования, посвященные сравнениюгенетических характеристик и морфологии эмбрионов, в которых авторы статейнезависимо друг от друга приходят к выводу, что значительные хромосомныенарушения в геноме эмбриона зачастую не отражаются на морфологии эмбрионовстоль ранних стадий развития, так как большинство генов, содержащихся ваномальных хромосомах, еще не проявили себя в доимплантационных эмбрионах[Chow J.F. et al., 2014].Также много исследований посвящено схемам гормональной стимуляции уженщин, участвующих в цикле ВРТ с ПГС. Их результаты показываютсущественное влияние состояния ооцитов на результаты ПГС полученныхэмбрионов.
Важнейшими факторами являются возраст женщины, вступившей впрограмму ВРТ, ее гинекологический и соматический анамнез [Zech N.H.etal., 2015]. Принимая во внимание существенный вклад материнского генома вгенетические характеристики будущего эмбриона, исследователи предлагаютперед проведением оплодотворения методом ИКСИ анализировать полярныетельца яйцеклеток и выбирать только яйцеклетки, несущие «правильный» наборхромосом [Scriven P.N.
et al., 2012]. Вместе с тем большое количество данных поотцу не учитывается, хотя нельзя забывать, что генетический материалполученного эмбриона в равной степени состоит из генов отца и матери, и успехвынашивания и рождения здорового ребенка зависит от функционирования обоихгеномов. Имеются данные о влиянии той или иной патологии сперматозоидов наэффективность зачатия и последующее вынашивание плода [Jungwirth A. et al.,2012]. Обращают на себя внимание работы, свидетельствующие о наличиигенетической основы различных патологических состояний сперматозоидов, вчастности, таких как азооспермия и олигоастенотератоспермия (изменениеконцентрации, подвижности и морфологии сперматозоидов) [Брагина, Е.Е. исоавт., 2015; Damyanova V. et al., 2012].5В мировой практике приобретает популярность и все чаще используется вдиагностике мужского бесплодия анализ фрагментации ДНК ядра сперматозоида.Ряд исследователей придерживается мнения о значимой роли фрагментации ДНКядра в ранней потере беременности как при естественном зачатии, так и послеЭКО [Robinson L.
et al., 2012]. Есть данные о замедлении темпов развития раннихэмбрионов у пар с такой патологией [Wdowiak A. et al., 2015]. Также известно обувеличении числа хромосомных аномалий в сперматозоидах пациентов сповышенным уровнем фрагментации ядра [Enciso M. et al., 2013].Совсем недавно начали появляться первые публикации о влиянии геномныхнарушений в сперме на генетический метериал 3-дневных эмбрионов [Kaarouch I.et al., 2015].Таким образом, исследования, посвященные изучению и сравнительномуанализу функциональных показателей отцовских сперматозоидов и результатовпредимплантационного генетического скрининга эмбрионов, актуальны ипредставляют значительный научный и практический интерес.Цель работыИсследовать влияние функциональных показателей сперматозоидов отца нарезультатыпредимплантационногогенетическогоскринингаэмбрионов,выполненного методом сравнительной геномной гибридизации на чипах.Задачи исследования1.Оценить концентрацию, подвижность и морфологию сперматозоидовотца в парах, прошедших программу ИКСИ с ПГС эмбрионов.2.Оценить уровень фрагментации ДНК ядра сперматозоидов методомTUNEL.3.Проанализировать результаты полногеномного скрининга эмбрионовметодом СГГ на чипах.4.Исследовать возможность наличия ассоциации нарушений кариотипаэмбрионов с функциональными показателями сперматозоидов отца.6База проведения научного исследованияФедеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центракушерства, гинекологии и перинатологии имени В.И.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
