Диссертация (1154347), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Это были пациенты, проходившие стационарноелечение в урологическом центре г. Душанбе Республики Таджикистан.13Представленные в работе современные лабораторные методы исследованиявыполнялисьнабазеклинико-биохимическойлабораторииклинико-диагностического отдела ФГБУ «Национальный медицинский исследовательскийцентр хирургии им. А.В. Вишневского» Минздрава России (директор — академикРАН, д.м.н., проф. Ревишвили А.Ш., руководитель клинико-диагностическойлаборатории — д.б.н. Демидова В.С.)Группе больных со сложными формами уролитиаза и осложненным течениемМКБ выполнялись современные рентгенурологические обследования и операциисовместно с сотрудниками кафедры эндоскопической урологии факультетаповышения квалификации медицинских работников МИ РУДН.Критерии включения в исследование: возраст больных от 15 до 80 лет,наличие информированного согласия на участие в исследовании.Критерии исключения из исследования: некомпенсированные тяжелыесоматические болезни, беременность, психические заболевания, отказ от участияили невыполнение рекомендаций.Всем пациентам было выполнено комплексное клиническое обследование,включавшее тщательный сбор анамнестических данных.
Изучали соматическийстатус и анамнез течения МКБ, учитывали возраст, конституциональные данные,наследственность (наличие МКБ у родственников), особенности режима питания,работы и отдыха.При анализе результатов предварительного обследования обращаливниманиенаклиническиепроявлениязаболевания,егодлительность,местоположение, размеры и количество конкрементов, их структуру, степеньактивности сопутствующего воспалительного процесса, а также состояниеуродинамики. Кроме того, обращали внимание на состояние контралатеральнойпочки, исключая наличие аномалий в сочетании с другими патологическимисостояниями организма. Наряду с этим проводили общеклинические исследования,включающие биохимический и общий анализы крови и мочи.
Определяемые в ходеобщеклинического исследования лабораторные параметры представлены вТаблице 1.14Таблица 1 — Определяемые в ходе исследования лабораторные параметрыПараметрАльбуминОбщий кальцийФосфорКреатининХлорНатрийКалийМагнийМочевая кислотаМочевинаПаратиреоидный гормонБиологическая средаКровьКровь, мочаКровьКровь, мочаКровьКровьКровьКровьКровьКровьКровьУсловные обозначенияAlCaРCreatClNaKMgUr acidUrПТГКлинико-лабораторные исследования сыворотки крови и мочи былипроведены на анализаторах фирмы Abbot (США) и Roche (ФРГ).
Суточнуюэкскрецию креатинина, мочевины и мочевой кислоты, а также анализ мочи поЗимницкому определяли по общепринятым методикам.Комплексное рентген-урологическое исследование, включающее обзорную иэкскреторную урографию, выполняли на аппарате фирмы Philips Medical Systems(ФРГ). При этом обращали внимание на размеры, конфигурацию, местоположениеконкремента,интенсивностьистепеньегоконтрастности.Поданнымэкскреторной урографии оценивали строение чашечно-лоханочного комплекса,состояние верхних мочевыводящих путей и степень их дилатации.Динамическую нефросцинтиграфию проводили на гамма-камере МБ-9100 пообычной методике с введением радиофармпрепарата (РФП)99м Tc-пентатекс.Мультиспиральнуюизображениякомпьютернуювыполнялинатомографиютомографефирмыс3D-реконструкцией«TOSHIBA»(Япония).Высокоинформативные методы лучевой диагностики применялись для уточнениядиагноза в рамках предоперационной подготовки в группах больных со сложнымиклиническими формами уролитиаза и осложненным течением МКБ, а также попоказаниям в послеоперационном периоде.Ультразвуковой скрининг проводили больным на аппаратах фирмы GeneralElectrics (США) и Aloka (Япония).
Оценивали состояние паренхимы почек, степень15дилатации чашечно-лоханочного комплекса, а также наличие камней. При этомполипозиционноеисследованиесводилокминимумувероятностьдиагностической ошибки. В ходе проведения метафилактических мероприятийдинамический ультразвуковой скрининг являлся обязательным при оценкеэффективности лечения.Индикация активаторов камнеобразования в моче проводилась методомхромато-масс-спектрометрического анализа литогенных веществ, позволяющегоидентифицировать следующие классы соединений: щавелевая, мочевая ифосфорная кислоты, а также летучие жирные кислоты (валериановая, капроновая,масляная, пропионовая), фенолы и крезолы.
Органические кислоты определяли пометодике Mitruka B.M. в модификации Шимкевича Л.Л. с экстракцией диэтиловымэфиром летучих компонентов и прямым вводом в испаритель газовогохроматографа [179]. Для исследований использована система Hewlett–Packard(Рисунок 1) с газовым хроматографом НР-6890 и масс-селективным детекторомMSD-5973 (Рисунок 2), позволяющая не только идентифицировать и определять вколичественном соотношении все компоненты сложных биологических матриц, ноиграфическиотображатьхроматограммыбольныхуролитиазом.Масс-селективный детектор обеспечивает в режиме полного сканирования классическиемасс-спектрыэлектронногоудараихимическойионизацииотдельныхселективных ионов.Рисунок 1 — Газовая хромато-масс-спектрометрическая система Hewlett–Packard16Рисунок 2 — Газовый хроматограф НР-6890 с масс-селективным детекторомMSD-5973Подготовка биологического материала проводилась методом твердофазнойэкстракции с использованием картриджей фирмы Agibut.Клинико-лабораторныйанализактивностипептидогидролаз(лейцинаминопептидазы цитозольной ЛАП-С и микросомальной ЛАП-М) былпроведен с применением индикаторных наборов фирмы Diasys (ФРГ).
Степеньактивности исследуемых энзимов способствует лизису белковых компонентовмочи, ингибирующих литогенез, тем самым содействуя появлению конкрементов[66, 130].Лейцинаминопептидаза — альфа-аминоацил-пептидгидролаза — оптимумактивности: рН 8,2 в присутствии Мg++; рН 9,1 в присутствии Мn++.Ингибиторы глицерол и n-бутанол — растворимые агенты, Сd++, Нg++,Cu++, Рb++, ЕДТА, алкоголь, Р-хлоромеркурибензоат.Активаторы – Мg++, Mn++.Молекулярная масса = 300,000 (255,000±5,000).Норма в сыворотке крови – 4,232±0,454 ед/лЛАП-М (шифр ЕС 3.4.11.2, hydrolyze 1.0 mml of L-leucine-p-nitroamid to Lleucine and P-nitroanilin per min at pH 7,2 at 37 ºC) — фермент, обнаруженный вмикросомах клеток почечных канальцев.
Лабораторным путем доказана егоспецифичность к почечной ткани, что позволяет связать уровень его активности состепенью поражения паренхимы [47]. Согласно результатам, полученным17экспериментально Досчановым Э., активность фермента у пациентов с почечнойнедостаточностью в шесть раз превышала значения, полученные для доноров, исоставила 14,3±1,2 ед/л [47].ЛАП-С (шифр ЕС 3.4.11.1, hydrolyze 1.0 mml of L-leucinamid to L-leucine andNH3 per min at pH 8,5 at 25 ºC) относится к энзимам, катализирующим гидролизпептидов с отщеплением свободной L-аминогруппы. Выработка ферментапроисходитвгепатоцитахицитозолеклетокпочечныхканальцев.Экспериментально подтвержденное участие фермента в процессах протеолиза всыворотке крови и биосинтезе белка дало возможность соотнести степеньактивности ЛАП-С в моче пациентов уролитиазом с образованием органическойматрицы камня [70, 130].
Диапазон колебаний активности фермента в моче вполной мере отражает динамику процесса камнеобразования.Экспериментальноемоделированиеагрегациикристалловпроводилиспектрофотометрическим методом на серии агрегометров: KZM-1M (ФРГ)(Рисунок 3), оптическом приборе Chronolog (США) и лазерном агрегометре Биола(Россия)(Рисунок4).Агрегатометрияпозволилапровестиполностьюнастраиваемые исследования агрегации кристаллов. Использование химическичистых солей фосфорной, щавелевой и мочевой кислот позволило индуцироватьспонтанное агрегатообразование по методике Born на аппарате Sigma-Aldrich(Швейцария).Рисунок 3 — Процесс агрегатометрии на агрегометре КZM-1M18Рисунок 4 — Лазерный агрегометр LA 230 фирмы БиолаАгрегатометрия — современный диагностический метод, прогнозирующийвозможность патологического образования агрегатов кристаллов в моче,пересыщенной литогенными веществами.Основными принципами использования метода агрегатометрии являютсяопределение:1.
спонтанной агрегации на фоне перенасыщения мочи литогеннымивеществами;2. экспериментально индуцированной агрегации (процесс камнеобразованияin vitro);3. параметров агрегации (скорость и время агрегации, размеры агрегатов);4. фазности агрегатограмм.Агрегаты могут служить основой будущих микролитов, размеры которых дляформирования камня должны превышать критический — 300 ангстрем [121].Ниже приведены основные параметры агрегации.Amax- максимальная агрегация (%):A max =h100 %H,где H – максимально возможная агрегация (мм), h – максимальная агрегация дляданного образца (мм)Tmax — скорость максимальной агрегации, с19T max =гдев,— скорость движения самописца, 5 мм/с, α — угол наклона кривойагрегации, характеризующий скорость процесса агрегации, β — угол спада кривойдезагрегации, характеризующий распад образовавшихся агрегатов.Размеры кристаллов и их агрегатов определялись по размерам амплитудыколебаний кривой агрегатограммы.
Агрегатограмма мочи здорового человекапредставлена на Рисунке 5.Рисунок 5 — Агрегатограмма мочи здорового человека(схема)Оценку агрегатограмм проводили в сравнении с агрегатограммой мочиздорового человека, при которой параметры агрегации имели следующиепоказатели (М±m): время максимальной агрегации 0,65±0,07 с; скорость агрегации3,56±0,31 с; размер агрегатов менее 1,0 мкм.
[121]. Аномальная агрегация в две иболее фазы была зафиксирована на фоне высоких концентраций в моче литогенныхвеществ у пациентов со «смешанным» типом камнеобразования, причем в первойфазе был отмечен большой разброс по величине агрегатов на фоне нестойкойагрегации. Последующие фазы характеризовались образованием агрегатовмаксимального размера (от 12 до 16 мкм) на фоне стабильной агрегации.Элементный состав биожидкостей с определением содержания в них20металлов (Na, K, Ca, Mg, Fe, Cu, Co, Zn, Mn), а также структурный анализ мочевыхкамней выполняли на спектрофотометре фирмы Pai-Unicom (Великобритания)методом атомно-абсорбционной пламенной спектрофотометрии (Рисунок 6).Идентификацию фосфора проводили с помощью хроматографической системы«Aletech» методом ионной хроматографии с использованием анионообменнойсмолы «lugak SK».Рисунок 6 — СпектрофотометрПоложения, выносимые на защиту:1.Мочекаменная болезнь занимает одно из ведущих мест как в структуреурологических заболеваний, так и по частоте обращения за медицинской помощью.Среди пациентов превалируют лица трудоспособного возраста (64,2%) с впервыевозникшим приступом почечной колики (50,5%), сложными формами уролитиаза(32,0%) и осложненным течением заболевания (17,5%).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
