Автореферат (1151522), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Отделы головного мозга существенно различаются по максимальномуповышению активности металлозависимых протеиназ, на фоне введения изучаемыхфармацевтических препаратов, у крыс.3. Активность металлозависимых протеиназ при однократном и длительномрежимах введения имеет маркерные изменения динамики, характерные для применяемыхноотропных препаратов, реализующих свое действие как нейрометаболическиестимуляторы.4Степень достоверности результатов.
Достоверность полученных результатовподтверждается их воспроизводимостю в различных условиях, теория построена наизвестных, проверяемых данных, согласуется с опубликованными экспериментальнымиданными по теме диссертации, идея базируется на анализе практике и обобщениипередового опыта, использованы современные методики сбора и обработки исходнойинформации, представительные выборочные совокупности с обоснованием подбораобъектов наблюдения.Апробация диссертации. Основные положения диссертации обсуждены намеждународном конгрессе «Человек и лекарство» (г.
Москва), Всероссийской научнометодической конференции «Пути модернизации высшего образования: содержание,технологии, качество»; межкафедральных совещаниях, 2014-2016 г.г. (г. Тверь).Публикации результатов исследования.По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе на двухмеждународных научно-практических конференциях, 5 статей в российскихрецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации основныхнаучных результатов диссертаций на соискание ученых степеней.Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 122 страницахмашинописного текста, состоит из введения, 4 глав, обсуждения результатов, выводов,практических рекомендаций, заключения, списка литературы. Работа иллюстрирована 16таблицами, 21 рисунком. Список литературы включает 239 источников (81отечественных, 158 зарубежных).2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯЭксперимент выполнен на 144 самцах белых беспородных крыс возрастом 3 месяцаи массой 250-300 г. (рисунок 1, 2). Животные содержались в стандартных условияхвивария.
Для изучения однократного влияния ноотропных лекарственных средств наактивность КПЕ, ПДПА и ЛКП пирацетам вводили внутрибрюшинно в дозе 300 мг/кг,фенотропил в дозе 100 мг/кг, ноопепт в дозе 10 мг/кг. Контрольные животные получалиэквивалентный объем физраствора. Крыс выводили из эксперимента через 0,5, 4, 24 и 72часа после последней инъекции путем декапитации (16 исследуемых групп, в каждой изкоторых насчитывалось 6 животных). Для изучения длительного действия ноотропов,препараты вводили вышеописанным режимом каждые 24 часа в течение 14 суток.Животных декапитировали через 24 и 72 часа после последней инъекции (8 исследуемыхгрупп по 6 животных). После декапитации собирали кровь животных, извлекали гипофиз,четверохолмие, продолговатый мозг, гипоталамус, гиппокамп, амигдалу, стриатум инадпочечники. Все дальнейшие процедуры, если не оговорено иного, проводили притемпературе 30С.
Кровь подвергали центрифугированию (1000 g, 20 мин) и отбиралисыворотку. Прочие ткани погружали в физиологический раствор, охлажденный до 30С,после чего тщательно очищали их от оболочек и кровеносных сосудов. Для определенияактивности ферментов образцы тканей взвешивали, гомогенизировали в 10 мМ натрийацетатном буфере (pH 5,6), содержащем 50 мМ хлорида натрия в соотношении 1:100(вес/объем). В работе использованы ацетат натрия (“Merck”, Германия), трис-HCl(“Serva”, США), GEMSA (“Serva”, США), в качестве субстрата для определенияактивности КПЕ использовали и дансил-фен-лей-арг, для определения активности ПДПАиспользовали карбобензокси-гли-гли-арг, для определения активности ЛКП использовалиN-Гиппурил-L-аргинин (“Bachem AG”, Германия).
Использованы ноотропные препараты:пирацетам (ПАО «Фармстандарт»), фенотропил (ОАО «Валента Фарм»), ноопепт (ПАО«Фармстандарт»). Все остальные реактивы были отечественного производства сквалификацией «ХЧ» и «ОСЧ». Активность карбоксипептидазы Е определяли методомSupattapone S. et.al [228]. Активность КПЕ определяли как разность в накоплениипродукта реакции в пробах, не содержащих и содержащих GEMSA, и выражали в нмольобразовавшегося продукта реакции за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мгбелка.Активность ПДПА определяли как разность в накоплении продукта реакции впробах, не содержащих и содержащих каптоприл, и выражали в нмоль образовавшегосяпродукта реакции за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка.Статистическуюобработку результатов исследования осуществляли с помощью следующих пакетовпрограмм: Microsoft Office Exel 2010 (Microsoft, США), Statistica 6,0 (StatSoft, Inc., США)и BioStat 2009 Professional.
Достоверность различий между группами определяли сиспользованием параметрического t–критерия Стьюдента (при р≤0,05) для сравнениясредних независимых выборок, с учетом предварительной проверки выборок нанормальность распределения. Результаты представлены в виде M ± m, где M – среднее,5Интактные животныеN=96Введение ноопепта (10 мг/кг)Введение физраствора (контрольная группа)N=6N=6N=6Декапитациячерез 0,5 часапосле инъекцииN=6N=6N=6N=6N=6Декапитациячерез 4 часапосле инъекцииДекапитациячерез 24 часапосле инъекцииДекапитациячерез 72 часапосле инъекцииОпределение активности металлозависимых протеиназДекапитациячерез 0,5 часапосле инъекцииN=6N=6Декапитациячерез 4 часапосле инъекцииДекапитациячерез 24 часапосле инъекцииДекапитациячерез 72 часапосле инъекцииN=6N=6N=6N=6N=6N=6Введение пирацетама (300 мг/кг)Введение фенотропила (100 мг/кг)Интактные животныеРис.
1. - Схема эксперимента. Определение однократного влияния ноотропов на активность металлозависимых протеиназ6Интактные животныеN=48Введение ноопепта (10 мг/кг)Введение физраствора (контрольная группа)N=6N=6N=6N=6Декапитация через 24 часа послезаключительной инъекцииДекапитация через 72 часа послезаключительной инъекцииОпределение активности металлозависимых протеиназДекапитация через 72 часа послезаключительной инъекцииДекапитация через 24 часа послезаключительной инъекцииN=6N=6N=6N=6Введение пирацетама (300 мг/кг)Введение фенотропила (100 мг/кг)Интактные животныеРис. 2. - Схема эксперимента.
Определение длительного влияния ноотропов на активность металлозависимых протеиназ7m – стандартная ошибка среднего. Критический уровень значимости при проверкестатистических гипотез принимался равным р=0,05 (Р=95%).3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙВ настоящее время особую актуальность в медицине приобретает профилактика илечение расстройств когнитивной сферы. Это обстоятельство связано с ростом числанейродегенеративных и цереброваскулярных патологий населения развитых стран.Клиническая картина данных групп заболеваний включает в себя расстройства внимания,восприятия, памяти, обучения. Терапия подобных патологий включает в себя применениеширокой группы лекарственных средств, одной из которых являются ноотропы[С.С. Гамзин и др., 2015].Ноотропные лекарственные средства – большая группа препаратов, способныхоказывать стимулирующее действие на высшие интегративные функции мозга,обладающих нейропротекторным действием, низкой токсичностью, способных облегчатьпроцессы запоминания и обучения, переключение между разными видами деятельности,улучшают концентрацию внимания, анализ ситуации и принятия решений, усиливаютмотивацию [Т.А.
Воронина, 2000]. Следует отметить то обстоятельство, чтоокончательные механизмы реализации ноотропных эффектов к настоящему времени нераскрыты. Известно, что пептидергическая система вовлечена в реализацию механизмовинтеллектуальной деятельности. [С.В. Анчков, 1982; С.А. Коротков, 2003]. Исследованиеуровней биологически-активных пептидов в тканях не позволяет оценить динамическиепроцессы, происходящие в пептидергической системе при введении ноотропныхлекарственных средств. Поэтому изучение активности металлопротеиназ, входящих всистему обмена биологически-активных пептидов (КПЕ, ПДПА, ЛКП) при действииноотропных лекарственных средств позволит расширить представления о механизмахреализации биологических эффектов действия ноотропных препаратов [Т.А.
Воронина,2000].При однократном введении пирацетама наибольшая активность КПЕзарегистрирована в гипофизе, наименьшая – в надпочечниках (рисунок 3).В гипофизе по сравнению с контрольной группой активность КПЕ в период 0,5часов после одной инъекции пирацетама оказывается повышенной, в остальные периоды- сопоставимой или сниженной. При анализе активностей между опытной и контрольнойгруппами, в опытной наблюдалось повышенная активность КПЕ через 24 и 72 часа послепоследней инъекции пирацетама (рисунок 4).В четверохолмии активность КПЕ на фонеоднократного действия пирацетама в опытной группе животных по сравнению сконтрольной, оказывалась сниженной через 0,5, 24 и 72 часа после инъекции препарата.Длительное действие пирацетама вызывало изменения активности КПЕ, что и в случаегипофиза, с той лишь разницей, что опытная группа демонстрировала снижениеактивности КПЕ относительно контрольной через 72 часа после последней инъекциипирацетама.В продолговатом мозге однократное введение пирацетама вызываетдостоверно более низкие активности фермента в опытных группах в период до 24 часов.Лишь через 72 часа активность КПЕ в опытной группе становится несколько выше, чем вконтрольной.
Длительное введение пирацетама приводит к снижению активностифермента на обоих исследуемых интервалах времени.В случае гипоталамуса однократное действие пирацетама вызывает достоверноеснижение активности фермента лишь в периоде 0,5 и 24 часа после инъекции препарата вопытной группе по сравнению с контрольной. Длительное действие пирацетама приводитк снижению активности КПЕ в опытной группе через 24 часа и повышению через 72 часапосле последней инъекции.Активность КПЕ в гиппокампе в динамике времени после однократного введенияпирацетама продемонстрировала те же тенденции, что и в случае четверохолмия, с тойлишь разницей, что через 72 часа в гипоталамусе не обнаруживается достоверныхотличий между активностями КПЕ опытной и контрольной групп.8Гипофиз********0,80,60,40,20*******нКО2,521,510,50Четверохолмие0,5 ч4ч24 ч72 ч0,5 чПродолговатый мозг0,60,50,40,30,20,10***0,5 ч****4ч24 ч0,5 ч4ч*0,70,60,50,40,30,20,1072 ч*24 ч4ч***4ч24 ч72 ч*10,80,60,40,2072 ч********0,5 ч4ч24 ч72 чНадпочечники*****0,5 ч***0,5 чСтриатум0,50,40,30,20,1072 чАмигдала******24 чГипоталамусГиппокамп0,60,50,40,30,20,104ч24 ч***72 ч0,120,10,080,060,040,020*********0,5 ч4ч24 ч72 чРис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
