Диссертация (1151316), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Животные содержалась в условиях, с применениемстандартной для грызунов диеты и контролируемой длины светового дня(12/12 – день/темное время суток). У всех животных был свободный доступ кпище и воде. Животные экспериментальных групп на протяжение 2 недель80ежедневно помещали на 60 мин в стеклянную камеру, воздух которойсодержал 3000 рМ испарений наиболее распространенного промышленногорастворителя, состоящего из толуена (66%), ацетона (20%), изобутилацетата(10%), бутилгликоля (3%), изобутанола (1%).
На 28, 42, 56 и 70 суткипостнатального развития крыс экспериментальных и контрольных группдекапитировали под слабым наркозом (изофуран).Исследование состояния солнечного окуня (Lepomis gibbosus) икарася (Carasius) в модельных условиях загрязнения полициклическимиароматическими гидрокарбонамиВ условиях загрязнения водной среды нефтепродуктами количествополициклических ароматических гидрокарбонов на несколько порядковвыше всех остальных органических ксенобиотиков [87, 92]. Исследованиявлияния полициклических ароматических гидрокарбонов в различные фазыпостнатального развития животных проводились с использованием вкачестве тест-объектов взрослых половозрелых особей 2 видов (солнечныйокунь,карась),атакженеполовозрелых(6-7месяцев),молодыхполовозрелых (2-3 года) и взрослых (старше 5 лет) особей карася.Контрольные и экспериментальные группы рыб на протяжение 28 сутокнаходились в среде обитания, содержащей равные концентрации фенантренаи антрацена, наиболее типичные для прибрежных вод при разливе нефти инефтепродуктов.
Концентрация поллютантов поддерживалась на уровне0,2 мг/л (0,1+0,1 мг/л). Экспериментальные и контрольные группы особейсолнечного окуня и карася, по 10 экземпляров каждая, содержали ваквариумах объемом 180 литров. Замену воды проводили 2 раза в неделю.Контрольные группы рыб содержалась в подготовленной водопроводнойводе.81Исследование состояния солнечного окуня (Lepomis gibbosus) икарася(Carasius)вмодельныхусловияхзагрязнениясредыхлорбензоломХлорбензолспособный–вызыватьраспространенныйнарушениепромышленныйклеточногодыхания,растворитель,окислительно-восстановительного баланса, индуцировать в организме окислительныйстресс [76]. В эксперименте использовали взрослых половозрелых особейрыб 2 видов – солнечного окуня и карася. Экспериментальные группы рыб(n=10) содержали в аквариумах объемом 180 литров, в которые хлорбензолвносиливсоставемицеллхлоробензол-диметилсульфоксид-полиэтиленгликоль из расчета 0,1 мг хлорбензола на 1 литр.
Постояннуюконцентрацию хлорбензола в аквариуме поддерживали в течение 28 суток.Подмену воды проводили 2 раза в неделю. Контрольные группы (n=10)содержали в водной среде, в которой хлорбензол отсутствовал.Исследование состояния солнечного окуня (Lepomis gibbosus) ибычка-песочника (Neogobius fluviatilis) речной дрейссены (Dreyssenapolymorpha) в модельных условиях загрязнения среды мазутомПри изучении состояния рыб в условиях загрязнения среды обитаниямазутом использовали группы взрослых особей солнечного окуня и бычкапесочника (n=10) возрастом от 3 до 4 лет.
Экспериментальные группы рыбсодержали в аквариуме объемом 180 литров. Присутствие мазута в средеобитания поддерживали на уровне 50 мг/л в течение 28 дней. Подмену водыпроводили 2 раза в неделю. Контрольные группы рыб (n=10) содержалась вспециально подготовленной водной среде, в которой мазут отсутствовал.При изучении токсических эффектов у моллюсков, обитающих вусловиях моделирования хронического загрязнения мазутом, использовалиособей речной дрейссены (Dreyssena polymorpha) возрастом 4 года,обитающихввоссозданныхводоемах,искусственнозагрязненныхксенобиотиками. Экспериментальная и контрольная группы моллюсков82включали по 30 экземпляров Dreyssena polymorpha.
Группы двустворчатыхмоллюсков содержали в аквариумах объемом 180 литров. Контрольнаягруппа моллюсков обитала в аквариуме с доочищенной речной водой (р.Днепр). В среде обитания экспериментальной группы двустворчатыхмоллюсков постоянную концентрацию мазута поддерживали на уровне 50мг/л в течение 28 суток. Замену ¼ части воды в аквариуме проводили 2 раза внеделю.Исследования влияния препарата «Иммунолак» на гематологическиепоказателиииммунологическуюрезистентностьпродуктивныхживотныхИсследования проводились с использованием свиноматок помеси породкрупной белой и ландрас и полученных от них поросят породы 1/2 пьетрен,1/4 большая белая и 1/4 ландрас, принадлежащих частному акционерномуобществуобласти.«Агро-Союз»СинельниковскогорайонаДнепропетровскойПо принципу пар аналогов были сформированы контрольная иэкспериментальная группы свиноматок, по 10 голов в каждой.
Животнымэкспериментальнойгруппына60,75и90суткисупоросностивнутримышечно вводили ферментативный гидролизат клеточной стенкиLactobacillus Delbrueckii (препарат «Иммунолак», разработанный в научноисследовательском центре биобезопасности и экологического контроляресурсов АПК, Днепропетровск) в дозе 50 мкг действующего вещества на 1кгмассыживотного.Свиноматкамконтрольнойгруппыинъекциипрепаратом «Иммунолак», заменяли на инъекции 0,9% раствором NaCl.Молозиво для исследований отбирали за час до опороса и после опороса – на3, 6, 12, 18, 24 и 36 час лактации.
Кровь для исследования у родившихся отэтих свиноматок поросят (n=120) отбирали до, и через 4 часа после, сосаниямолозива, а также на 7, 14 и 23 сутки жизни.Схема проведения исследований представлена на рис. 2.483головной мозг, печеньМолозиво, кровьСодержаниеТБК-активныхпродуктовАктивность СОДАктивностькаталазыСодержаниецитоскелетногоГФКБКомплексисследуемыхпоказателейСодержание отдельныхфракцийиммуноглобулинов вмолозивеБактерициднаяактивность молозиваАктивность лизоцима всыворотке кровиКоличествогранулоцитовСодержаниецитоплазматического протеинаS100βКоличествогранулоцитовИммуногистохимическаяоценка тканейСуммарное количествомоноцитов илимфоцитовголовной мозгКровьЛейкоцитарнаяформулагепатопанкреас,жабрыФагоцитарнаяактивность лейкоцитовАктивностьглутатион-S-трансферазыАктивностьглутатион-редуктазыАктивность каталазыАктивность СОДСодержаниеТБК-активных продуктовСодержаниецитоскелетного ГФКБСодержаниецитоплазматическопротеина S100βСодержаниеТБК-активных продуктовФагоцитарное числоИндекс завершенностифагоцитозаБактерициднаяактивность сывороткикровиАктивность лизоцима всыворотке кровиРис 2.4 Схема проведения исследований2.2.1.2Методыполученияфракций,выявленияиидентификации нейроспецифических белковПосле декапитации головной мозг животных гомогенизировали нахолоду (при температуре 40С) в стеклянном гомогенизаторе с тефлоновымпоршнем в 10-ти кратном объеме 50 мМ трис-буфера (рН 7,8), содержащем 2мМ этилендиаминтетроацетата (ЭДТА) натрия, 1 мМ 2-меркаптоэтанола, 0,1мМ фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ) и 5 мМ соевого ингибиторатрипсина – буфер I.84Гомогенат центрифугировали при 60000 g в течение 50 мин.
Послецентрифугированияизнадосадочнойжидкостиотбиралифракциюводорастворимых белков мозга – супернатант I (C1). Для экстракциицитоскелетных белков к полученному осадку (О1) добавляли 4-х кратныйобъем трис-буфера, который дополнительно содержал 4М мочевину – буферII. После центрифугирования в течение 60 мин.
при 60000 g отбиралифракцию водонерастворимых филаментных белков – супернатант II (C2).Схема получения фракций, содержащих белки промежуточных филаментовголовного мозга, приведена на рис. 2.5.ткань мозга + буфер I (1:10)центрифугирование, 60000 g, 50 мин.С1О1 + буфер II (1:4)центрифугирование, 60000 g, 60 мин.С2О2Рис. 2.5 Схема получения белковых фракций головного мозга животныхС1 – фракция растворимых белков; С2 – филаментная фракция белков; О1 – осадок послепервого центрифугирования; P2 – осадок после второго центрифугирования.Схемаполученияфракциимембранныхбелков,отличаетсяотприведенной тем, что буфер II вместо 4 М мочевины содержал 2%тритон Х-100, который необходим для эффективной экстракции мембранныхбелков.Методы определения общего содержания белкаПрименениеколориметрическихметодовдляопределенияколичественного содержания белка в биологических пробах обусловлено ихточностью и простотой исполнения.
Ошибки в результатах могут возникатьвследствие того, что опытный белок значительно отличается по своей85природе от стандартного белка, в качестве которого чаще всего используетсябычий сывороточный альбумин (БСА). Кроме того, образцы белковыхфракций гомогената различных отделов мозга содержат вещества, которыемогут влиять на интенсивность окраски (мочевина и меркаптоэтанол) [495].Именно поэтому контрольные пробы готовились на буферных системах,которые использовались для получения белковых фракций мозга.Содержание общего белка в каждой пробе определяли двумя методами(методом Лоури и методом Брэдфорд).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
