Диссертация (1150291), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Анализируемые образцыОбразцы мочи117 образцов мочи пациентов Лаборатории Мочекаменной Болезни, 19образцов здоровых доноров. Образцы проанализированы в биохимическойлаборатории ЦКП «Аналитическая спектрометрия» (Санкт-Петербург, Россия).Образцы чая «Принцесса Ява», китайский зеленый чай байховый с ароматом жасмина.ООО «Орими Трэйд», СПб «Tess LIME», чай зеленый байховый, ароматизированный. ООО «НЭП»,СПб«Greenfield» китайский зеленый чай, плантационный.
ООО «ОримиТрэйд», СПб«Ahmad», чай черный байховый листовой цейлонский Orange Pekoe.Изготовлен: Ahmad Tea, Шри-Ланка, под контролем: Ahmad Tea, Лондон(Великобритания). Импортер: ООО «СДС-ФУДС», Москва«Riston», чай черный байховый цейлонский крупнолистовой, стандартPekoe. Изготовлен: Шри-Ланка. Импортер: ООО «В. М. Н. БизнесСистемс», Москва «Моnarch», черный крупнолистовой чай 100% цейлонский стандарт ОПА,высший сорт.
Выращен и собран в Шри-Ланка. Упакован «Монарх Тинт»,СПб «Индийский, тот самый чай», черный байховый мелкий, сорт первый.Изготовитель не указан. Упакован: ООО «Московская чайная фабрика»,Москва68 «Принцесса Нури», цейлонский чай черный байховый крупнолистовой,сорт: БЕСТ.
Изготовитель не указан. Под контролем «Орими Трэйд», СПб «Лисма», чай цейлонский мелколистовой черный байховый, первый сорт.Изготовитель: ОАО Компания «Май», г. Фрязино Московская обл. «Greenfield» ГОЛДЕН ЦЕЙЛОН, цейлонский чай черный байховый. Сорт:БУКЕТ. Специально для Greenfield Tea, Лондон, под контролем ООО«Орими Трэйд», СПбОбразцы индийского черного чая разных сортов от производителя,зашифрованные под номерами: 6, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 20.
Образцыпроанализированы в лаборатории C-DAC (Калькутта, Индия).Образцы препаратов ТКМГидрохлорид берберина (Berberine Нydrochloride), хризантема китайская(Chinese Сhrysanthemum), корень солодки (Liquorice Root), ветки кассии (CassiaTwig), хвойник китайский (Chinese Ephedra), семена горького абрикоса (BitterApricot Seeds), реманния клейкая (Rehmanniae Adhesive), корень одуванчика(Dandelion Root), коптис китайский (Chinese Coptis).Образцы проанализированы в лаборатории биосенсоров ЧжэцзянскогоУниверситета (Ханчжоу, Китай).2.4.
Электрофоретическое определение ионов в мочеПриготовление рабочих буферов Раствор рабочего электролита для определения анионов содержал 5 мМхромата, 20 мМ ДЭА, 1,65 мМ ЦТАБ. Способ приготовления: 1 Мраствор диэтаноламин (965 мкл ДЭА растворяли в 9035 мклбидистиллированной воды); 0,1 М раствор хромат-иона (навеска 150,0 мграстворялась в 15 мл бидистиллированной воды); 0,1 М раствор ЦТАБ(навеску 546,7 мг растворяли в 15 мл бидистиллированной воды).Раствор рабочего электролита готовили ежедневно в микропробиркаходнократного применения.
В каждую - вносили 50 мкл хромата, 20 мкл ДЭА и69913,5мклбидистиллированнойводы.Пробиркиплотнозакрывали,перемешивали содержимое и добавляли 16,5 мкл ЦТАБ; приготовленныйраствор дегазировали центрифугированием в течение 10 мин. Рабочийэлектролит для определения катионов содержал 6мМбензимидазола (БИА) 30 мМ винной кислоты, 2 мМ 18-краун-6. Для егоприготовления необходимы: 0,03 М раствор БИА (навеску 106,3 мграстворяли в 30 мл бидистиллированной воды); 0,1 М раствор 18-краун-6,(навеску 396,48 мг растворяли в 15 мл бидистиллированной воды); 0,05 Мраствор винной кислоты (навеску 225,1 мг растворяли в 30 млбидистиллированной воды).Раствор рабочего электролита готовили непосредственно в микропробиркаходнократного применения каждый день.
В каждую пробирку вносили 200 мклБИА, 50 мкл винной кислоты, 20 мкл водного раствора 18-краун-6 и 730 мклбидистиллированнойводы.Пробиркуплотнозакрывали,тщательноперемешивали и дегазировали центрифугированием в течение 10 мин. Раствор ведущего электролита для определения мочевой кислоты икреатинина содержал 50 мМ раствор дигидрофосфата натрия и 2,4 мМNaOH. Для его приготовления требовались растворы: 0,5 М раствордигидрофосфатанатрия(навеску390мграстворялив5млбидистиллированной воды); 1 М раствор гидроксида натрия (навескутвердого гидроксида натрия растворяли в бидистиллированной воде израсчета 2 г гидроксида на 50 мл воды).Раствор рабочего электролита готовили каждый день в пробирке на 10 мл.В пробирку вносили 1000 мкл дигидрофосфата натрия, 24 мкл 1 М раствораNaOH и 4488 мкл бидистиллированной воды, пробирку плотно закрывали ипомещали в ультразвуковую ванну на 5-10 мин.
Далее полученным раствором70заполняли 3 полипропиленовых виалы на 0,8 мл и центрифугируют в течение 10мин. Раствор рабочего электролита для определения оксалата и цитратасодержал 200 мМ раствор дигидрофосфата натрия и 8,75 мМ NaOH. Дляего приготовления требовались: 0,5 М раствор дигидрофосфата натрия(навеску 390 мг растворяли в 5 мл бидистиллированной воды); 1 Мраствор гидроксида натрия (навеску твердого гидроксида натриярастворяли в бидистиллированной воде из расчета 2 г гидроксида на 50 млводы).Раствор рабочего электролита готовили каждый день из расчета на 10 мл.Во флакон или пробирку вносили по 4000 мкл дигидрофосфата натрия, 86 мкл 1М раствора NaOH и 5914 мкл бидистиллированной воды. Пробирку плотнозакрывали, встряхивали и помещали в УЗ-ванну на 5-10 мин.
Затем заполнялиполученнымраствором3полипропиленовыхвиалына0,8млицентрифугировали в течение 10 мин.Условия электрофоретического анализаПеред проведением анализа кварцевый капилляр подготавливали к работе:промывали 1 М раствором HCl, дистиллированной водой, 1 М раствором NaOH,дистиллированной водой по 10 мин и рабочим буферным электролитом – 15мин. Между анализами капилляр промывали рабочим буферным электролитом втечение 5 мин.71 Для определения анионов использовали блок отрицательной полярности.Хлоридm AUПоглоще н653ФосфатСульфат4210123мин4Рис. 30.
Электрофореграмма модельной смеси анионов.Условия: Система капиллярного электрофореза «КАПЕЛЬ 105М»; кварцевый капиллярвнутр. диаметр 75 мкм, Lэфф=50 см, Lобщ=60 см.Буферный электролит: 5 мМ хромат-иона, 20 мМ ДЭА, 1,65 мМ ЦТАБ.Проба: смесь анионов: Cl- - 18 мг/л, SO42- - 12 мг/л, PO43- - 6 мг/л.Ввод пробы: 30 мбар, 10 с; -17 кВ. Детектирование: 254 нм. Для определения катионов использовали блок положительной полярности.mAUПогл още нНатрий1.4Аммоний1.00.8Магний0.60.4КальцийКалий1.20.20123минРис. 31. Электрофореграмма модельной смеси катионов.Условия: Система капиллярного электрофореза «КАПЕЛЬ 105М»; кварцевый капиллярвнутр. диаметр 75 мкм, Lэфф=50 см, Lобщ=60 см.Буферный электролит: 6 мМ БИА, 2,5 мМ винной кислоты, 2 мМ 18-краун-6.Проба: смесь катионов: NH4+ - 7 мг/л, K+ - 9 мг/л, Na+ - 5 мг/л, Mg2+ - 1 мг/л, Ca2+ - 1,4мг/л. Ввод пробы: 30 мбар, 5 с; +20 кВ.
Детектирование: 254 нм.72 Электрофоретическоеопределение мочевой кислоты и креатининапроводили при положительной полярности.17.515rea:- CreatinineA2.263rea:18.8142049.74134.161A - Uric acidDAD1 C, Sig=234,40 Ref =of f (MAY_20\MK_30_20.D)mAU12.5107.552.500.511.522.533.544.5minРис. 32. Электрофореграмма модельной смеси мочевой кислоты и креатинина.Условия: Система капиллярного электрофореза «Agilent 1100 CE»; кварцевый капиллярвнутр. диаметр 50 мкм, Lэфф=40 см, Lобщ=48 см.
Буферный электролит: 50 мМ NaH 2PO4,2,4 мМ NaOH. Проба: смесь мочевой кислоты и креатинина – 20 мг/л и 30 мг/л. Ввод пробы:50 мбар, 20 с; +30 кВ. Детектирование: 234 нм. Электрофоретическое определение оксалат и цитрат-ионов проводили приотрицательной полярности12rea:135.3189.855- CitratArea:1439.7725.870A - OxalatDAD1 B, Sig=195,10 Ref =of f (MAY _13\OX_4-40.D)mAU1086420246810minРис. 33.
Электрофореграмма модельной смеси щавелевой и лимонной кислот.Условия: Система капиллярного электрофореза «Agilent 1100 CE»; кварцевый капилляр:внутр. диаметр 75 мкм, Lэфф=40 см, Lобщ=48 см. Буферный электролит: 200 мМ NaH 2PO4,8,75 мМ NaOH. Проба: смесь оксалата и цитрата – 5 мг/л и 30 мг/л.Ввод пробы: 50 мбар, 30 с;-12 кВ. Детектирование: 195 нм.73Пробоподготовкаобразцовмочизаключаласьвихразбавлениибидистиллированной водой согласно табл.
9.Таблица 9. Схема разбавления образцовОпределяемые аналитыРазбавление образцовкатионы/анионыв 200-800 размочевая кислота и креатининв 20-50 разоксалат и цитратв 5-10 раз2.5. Электрофоретическое определение компонентов чаяОптимальные условия электрофоретического детектирования полифенолови сама методика для чая была разработана в нашей лаборатории ранее [123].Перед проведением анализа в режиме капиллярного зонного электрофорезакапилляр подготавливался к работе следующим образом: промывался 0,5 МрастворомHСl,дистиллированнойводой,0,5МрастворомNaOH,дистиллированной водой по 10 мин и рабочим буферным электролитом – 15мин. Между анализами капилляр промывался рабочим буферным электролитомв течение 5 мин. Буферный электролит готовился на основе фосфатного буферас рН=7,0 с добавкой додецилсульфата натрия.Для приготовления 10 мл 0,1 М фосфатного буфера смешивали 3,05 мл 0,2М раствора Na2HPO4 и 1,95 мл 0,2 М раствора NaH2PO4 и доводили объем до 10мл дистиллированной водой.
Раствор додецилсульфата натрия (500 мМ)готовился растворением точной навески (1,142 г) в 10 мл дистиллированнойводы. 1 мл рабочего буферного электролита состоял из 25 мМ фосфатногобуфера (250 мкл 0,1 М), 25 мМ додецилсульфата натрия (50 мкл 500 мМ) и 700мкл дистиллированной воды.В качестве оптимального выбрано напряжение 25 кВ. Ввод пробыосуществлялся гидродинамически (30 мбар, 10 с).74ДляидентификациикомпонентовиспользованастандартнаясмесьЭКГГКГКофЭГКГЭК55 mA UГКЭГКполифенолов и кофеина (рис. 34):ЭОПCapel12345678910111213141516минРис.
34. Электрофореграмма модельной смеси полифенолов и кофеина.Условия: Система капиллярного электрофореза «КАПЕЛЬ 105»; капилляр: внутреннийдиаметр 75 мкм, Lэфф=60 см, Lобщ=50 см. Буферный электролит: 25 мМ фосфатный буферрН=7.0 с добавкой 25 мМ ДДСН. Проба: смесь стандартов: Коф, ЭГК, ЭГКГ, ГК, ГКГ, ЭКГ –по 25 мг/л, ЭК – 10 мг/л. Ввод пробы: 30 мбар, 10 с. Напряжение: 25 кВ. Детектирование: 200нм.Анализ образцов чая проводился следующим образом: 200 мг сухого чаязаваривались 20 мл только что вскипевшей дистиллированной воды в течение 5мин. Для подготовки анализируемой пробы проводилось ее разбавление водой вдва раза.Получены соответствующие характеристические профили и проведенаоценка содержания полифенолов во всех сортах чая методом мицеллярнойэлектрокинетической хроматографии (МЭКХ).752.6.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
