Диссертация (1150291), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Разбавление в 2 раза. Ввод пробы: 30 мбар, 10 с. Напряжение: 25 кВ.Детектирование: 200 нм.97Проведена количественная оценка содержания полифенолов и кофеина в исследуемых образцах (табл. 15).Таблица 15. Результаты количественного анализа различных сортов чая, % масс. (Р=0.95, n=3)ФормулаНазваниеаналитаOH3CO«Ристон»NКофеин2,092,06CH3(Коф)±0,11Эпигаллокатехин«Принцесса«Гринфилд»«Ахмад»1,601,591,792,772,23±0,09±0,07±0,09±0,10±0,13±0,110,030,180,070,090,070,080,06(ЭГК)±0,01±0,01±0,01±0,01±0,01±0,01±0,01Эпигаллокатехин0,101,640,280,490,240,310,22галлат (ЭГКГ)±0,01±0,09±0,03±0,04±0,02±0,02±0,020,030,140,140,080,060,060,05±0,01±0,01±0,01±0,01±0,01±0,01±0,01Галловая кислота0,180,450,210,270,340,310,21(ГК)±0,02±0,04±0,02±0,03±0,02±0,02±0,01NN«Индийский«Монарх»(принятое сокр.)CH3N«Лисма»со слоном»Нури»OHOHOHOOHOHOHOHOHOHOOHOOOHOHHOOHOHOHOHOOHЭпикатехин (ЭК)OHOHHOOHCOOH983.2.
Получение хроматографических профилей препаратов традиционнойкитайской медицины (ТКМ)Хроматографические профили растительных препаратов ТКМ получают сцелью контроля качества, а также для идентификации групп соединений,ответственных за те или иные свойства препаратов. Метод ВЭЖХ‒УФ былиспользован для получения хроматографических профилей препаратов ТКМ.Для извлечения компонентов из сухого материала ТКМ выявленывозможности трех вариантов жидкостно-жидкостной экстракции: использованиеорганических экстрагентов, водно-органических и водных.Органическаяэкстракциязаключаласьвэкстракциикомпонентовацетонитрилом: 100 мг измельченного препарата и 1 мл ацетонитрила тщательноперемешивали в вортексе в течение 15 мин. Затем пробы центрифугировали втечение 10 мин, отбирают 500 мкл верхнего слоя в виалу для автосамплера идобавляли 500 мкл воды. Полученные образцы подвергали хроматографическомуанализу.Водно-органическая экстракция основана на экстракции компонентов в 80%й водный раствор метанола: 100 мг измельченного препарата и 2,5 мл 80%-гометанола помещали в УЗВ при нагревании в течение 30 мин.
Затем тщательноперемешивали в вортексе в течение 10 мин. Пробы центрифугировали в течение10 мин, отбирали 2 мл верхнего слоя в виалу и выпаривали досуха в токе азота.Сухой остаток растворяли в 500 мкл 60% ацетонитрила и подвергалихроматографическому анализу.Водная экстракция заключалась в экстракции компонентов в 0,2%-й растворуксусной кислоты: 100 мг измельченного препарата и 1,5 мл 0,2%-го растворауксусной кислоты помещают в УЗВ при нагревании в течение 30 мин. Затемтщательно перемешивали в вортексе в течение 10 мин. Пробы центрифугировалив течение 10 мин, отбирали 1 мл верхнего слоя, к которому добавляли 2 млэтилацетата. Затем тщательно перемешивали в вортексе в течение 10 мин,99отбирают 1,6 мл верхнего слоя в виалу и выпаривали досуха в токе азота.
Сухойостаток растворяли в 500 мкл 60% ацетонитрила и подвергали анализу.Существуют сведения [166], что препараты ТКМ могут содержатьантрахиноны. Чтобы проверить этот факт, все образцы были проанализированы вусловиях определения антрахинонов, предложенных в [166]. Однако, искомыеаналиты в образцах обнаружены не были ни при одном из способовпробоподготовки.Для получения хроматографических профилей без идентификации пиков, алишь в форме «отпечаток образца» было решено использовать экстракцию вацетонитрил, поскольку в этом случае профиль большинства образцовмаксимально «насыщен» пиками (рис.
44).а)VWD1 A, Wavelength=440 nm (RHEIN\RHE00147.D)mAU0.40.30.20.1001234567456789minб)VWD1 A, Wavelength=440 nm (RHEIN\RHE00092.D)mAU0.150.1250.10.0750.050.0250-0.025012389min100в)VWD1 A, Wavelength=440 nm (RHEIN\RHE00129.D)mAU5432100123456789minРис. 44. Хроматограммы образца Реманния клейкая (Rehmanniae Adhesive) сразличными видами экстракции: а) – водная, б) – водно-органическая, в) –органическая.Условия: хроматограф «Agilent-1200», колонка (250×4.6 мм) YMC-Triart C18 (5 мкм);подвижная фаза ‒ 60 об.% ацетонитрила, 0,05 М муравьиной кислоты в воде, расход 200мкл/мин, объем пробы 40 мкл, длина волны 440 нм.Для получения еще более насыщенных пиками профилей выбрана длинаволны 254 нм, поскольку многие органические соединения поглощают именно наней.Полученыхроматографическиепрофилидлявсехисследуемыхлекарственных препаратов ТКМ (Приложение 3).На рис.
45 в качестве примера приведен профиль образца Коптис китайский(Chinese Coptis).101VWD1 A, Wavelength=254 nm (RHEIN\RHE00066.D)mAU54321002.557.51012.51517.52022.5minРис. 45. Хроматограмма образца растительного препарата Коптис китайский(Chinese Coptis).Условия: хроматограф «Agilent-1200», колонка (250×4.6 мм) YMC-Triart C18 (5 мкм);подвижная фаза ‒ 60 об.% ацетонитрила, 0,05 М муравьиной кислоты в воде, расход 200мкл/мин, объем пробы 40 мкл, длина волны 254 нм.3.3.
Получение электрофоретических профилей препаратов традиционнойкитайской медициныЭлектрофоретические профили растительных препаратов ТКМ гораздореже используются, чем хроматографические. Однако и в них может быть скрытаполезная информация.В процессе пробоподготовки пробы тщательно фильтровались, поскольку вотваре могли находиться достаточно крупные частицы образца, способныезасорить кварцевый капилляр. Все образцы готовились к анализу по следующейсхеме:500мгизмельченногопрепаратаи10млсвежевскипяченнойдистиллированной воды помещали в УЗВ с нагреванием в течение 30 мин. Затемпробы центрифугировали в течение 5 мин, отбирали 5 мл верхнего слоя впробирку, вновь центрифугировали в течение 5 мин, отбирали 2 мл верхнего слояв медицинский шприц. Затем пропускали раствор через фильтр Chromafil AO45/3.
Полученную пробу разбавляли водой в 2 раза и подвергали анализу.102Полученыэлектрофоретическиепрофилидлявсехисследуемыхлекарственных препаратов ТКМ (Приложение 4). На рис. 46 в качестве примераприведен профиль образца Коптис китайский (Chinese Coptis).52.4 mauch1123456789минРис. 46. Электрофореграмма образца растительного препарата Коптискитайский (Chinese Coptis).Условия: КАПЕЛЬ 105; капилляр: внутренний диаметр 50 мкм, Lэфф=60 см, Lобщ=50 см.Буферный электролит: 25 мМ фосфатный буфер рН=7.0 с добавкой 25 мМ ДДСН. Ввод пробы:30 мбар, 20 с.
Напряжение: 25 кВ. Детектирование: 200 нм.3.4. Оценка содержания компонентов в растительных препаратахтрадиционной китайской медицины методом капиллярного электрофорезаНа основании полученных электрофореграмм для всех образцов проведенаколичественная оценка содержания полифенолов и кофеина (табл.13).Для этой цели построены калибровочные зависимости по стандартнымвеществам – кофеин, эпигаллокатехин, эпигаллокатехин галлат, эпикатехин,галловая кислота. На рис.
47 приведена градуировочная зависимость дляэпикатехина.103400y = 3,8278xR² = 0,9967S, отн. ед.3002001000020406080100С, мг/лРис. 47. Зависимость площади пика эпикатехина от его концентрации ванализируемой пробе.Затем площади пиков в электрофореграммах образцов соотносились скалибровочными зависимостями и, согласно уравнениям, вычислены содержаниякомпонентов (табл.
16).Таблица 16. Результаты количественного анализа образцов растительныхпрепаратов традиционной китайской медицины, % масс. (Р=0.95, n=3)ОбразцыХризантема китайская(Chinese Сhrysanthemum)Корень солодки(Liquorice Root)Ветки кассии(Cassia Twig)Хвойник китайский(Chinese Ephedra)Семена горького абрикоса(Bitter Apricot Seeds)Реманния клейкая(Rehmanniae Adhesive)Корень одуванчика(Dandelion Root)Коптис китайский(Chinese Coptis)кофеинэпигаллокатехинэпигаллокатехингаллатэпикатехингалловаякислота0,0000,327±0,0140,526±0,0090,156±0,0090,0000,073±0,0040,0000,098±0,0030,257±0,0080,0000,0000,046±0,0050,0000,045±0,0020,300±0,0050,199±0,0090,0000,0000,0000,0000,108±0,0080,334±0,0090,0000,0000,0000,044±0,0040,016±0,0020,034±0,0010,0000,0000,022±0,0010,0000,058±0,0020,0000,221±0,0070,0000,466±0,0110,0000,019±0,0010,0001043.5.
Получение референтных данных для образцов мочиВсе образцы мочи были проанализированы методом капиллярногоэлектрофореза, согласно п. 2. 4. Для каждого пациента составлен протокол срезультатами биохимического анализа мочи (рис. 48).Рис. 48. Пример протокола с результатами анализа мочи.Для каждого образца проведена оценка 14 параметров: содержание ионоваммония, калия, натрия, кальция, магния, оксалата, цитрата, урата, хлорида,сульфата, фосфата. Кроме того, оценивались плотность мочи и значение рН.105ГЛАВА 4. АНАЛИЗ СЛОЖНЫХ ОБЪЕКТОВ ПРИРОДНОГОПРОИСХОЖДЕНИЯ С ПОМОЩЬЮ МУЛЬТИСЕНСОРНЫХ СИСТЕМ4.1. Стратегия выбора сенсоров в состав мультисенсорной системыМультисенсорнаясистемапредставляетсобойнабор(массив)электрохимических, потенциометрических в данной работе, сенсоров.
Каждыйсенсор дает отклик на содержание сразу нескольких компонентов в исследуемомрастворе, то есть обладает перекрестной чувствительностью. Для успешногофункционирования такие сенсоры должны обладать высокой стабильностью ивоспроизводимостью в реальных сложных многокомпонентных средах.Минимальное количество сенсоров – 2, максимальное число сенсоровограничено лишь числом каналов многоканального вольтметра (32 в данномисследовании).Ключевым элементом сенсора является чувствительная мембрана. Онасостоитизполимернойматрицы(чащевсегополивинилхлоридной),пластификатора, например, орто-нитрофенилоктилового эфира и небольшогопроцента (2-7%) различных добавок. Именно составом мембран (рис.
49) всесенсоры отличаются друг от друга, проявляя перекрестную чувствительность, т. е.отклик ко многим компонентам анализируемой среды сразу.Рис. 49. Состав чувствительных мембран.106При выборе сенсоров в состав системы руководствуются литературнымиданными либо предыдущим опытом. Так, при подборе сенсоров в состав системы,спомощьюкоторойтребовалосьопределятьполифенолывчае,руководствовались данными о наборе сенсоров, который применялся ранее прианализе полифенолов в вине [19].После проведения потенциометрических измерений и обработки полученныхданных выявлялись те сенсоры, которые практически не изменяли своихпотенциалов. Такие сенсоры удаляли из массива, оптимизируя тем самым егосостав.Сама методика проведения измерений мультисенсорной системой достаточнопроста.
Она включает выявление необходимости в разбавлении образца, выборвремени измерения и процедуры отмывки сенсоров при переходе к анализуочередного образца.4.2. Разработка методик проведения анализа биологических сред с помощьюмультисенсорной системыДля получения воспроизводимых значений сигналов сенсоров необходимобыло установить оптимальное соотношение между разбавлением образца ипроцедурой отмывки сенсоров. Обычно более концентрированный образец даетболее воспроизводимые отклики, но при этом возникает проблема «памяти».Была доказана необходимость кондиционирования сенсоров в образце передсерией анализов. Для этого мультисенсорная система выдерживалась в 10%-номрастворе образца в течение 30 мин, при этом каждые 10 мин снимались показаниясенсоров.На рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
