Автореферат (1150041), страница 5
Текст из файла (страница 5)
(см. рис. 8).Рисунок 8 – Изменение профилей СЖК после введения 2×0.4DL50 VR вкоординатах (индекс P/SF; суммарная концентрация СЖК). Пунктирнойлинией соединены точки соответствующие медианам групп.Сравнение изменений профилей СЖК при отравлении ФОВ споследующей антидотной терапией и без нее позволяет предположить, что кизменениям концентраций СЖК в первые часы и после первых сутокотравления VR приводят различные механизмы. Антидотная терапиякупирует отставленные последствия отравления, но не купирует токсическиеэффекты ФОВ в первые часы. Терапия отравлений VR препаратомКарбоксим позволяет нормализовать концентрации СЖК и ЭЖК в плазмекрови, однако такая антидотная терапия не оказывает влияния наповышенное содержание свободных полиненасыщенных ЖК, их уровеньостается выше контрольного в течение 7 днейРаздел 3.5.
посвящен оценке влияния сублетальных доз фторацетата(ФА) на метаболизм ЖК. Исследования жирно-кислотного состава плазмыкрови крыс после введения ФА показали, что через 3 часа после отравленияконцентрации ТГ и СЖК в плазме крови крыс изменились впротивоположных направлениях: уменьшение ТГ и увеличение СЖК, вплотьдо 75% от уровня в контрольной группе. Снижение уровня ТГ обусловленоусилением активности липопротеинлипазы эндотелия за счет инсулина,выброс которого может усиливаться в результате повышения уровня глюкозыв тканях и нарастающего доминирования парасимпатической регуляции приинтоксикации ФА.
В более поздние сроки достоверное снижение СЖКсвидетельствует об усиленном их использовании в качестве энергетическогосубстрата.На рисунке 9 приведена иллюстрация изменения индекса активностиферментов элонгазы и Δ5-десатуразы после введения крысам дозы,эквивалетной ½DL50 ФА. Активность ферментов характеризует процессыбиотрансформации ЖК в организме. Активность Δ5-десатуразы (D5D)количественно вычисляли как отношение концентраций арахидоновой и198,11,14-эйкозатриеновой кислот (20:4n-6 к 20:3n-6), активность элонгазыопределяли отношением концентраций стеариновой к пальмитиновой (18:0 к16:0).
В результате впервые выявлено снижение активностей этих двухферментов при воздействии ФА. Стоит отметить, что ФА входи в группу т.н.метаболических ядов, к которым относится значительная часть препаратов,используемых в качестве химиотерапии при онкологических заболеваниях.***Рисунок 9 – Индекс активности элонгазы (слева) и Δ5-десатуразы (справа)после введения ½DL50 ФА.В разделе 3.6. рассмотрено влияние препарата мельдония наметаболизм жирных кислот. Выявлено влияние мельдония на концентрацииСЖК после приема пищи, в частности, однократное употребление мельдонияспособно предотвратить повышение содержания СЖК после употребленияпищи до исходного уровня. Аналогичные эффекты наблюдали и для ЭЖК.Отношение концентраций ω-6 и ω-3 полиненасыщенных СЖК послеупотребления мельдония снижено на 22%.
Это отношение является одним измаркеров риска сердечно-сосудистых заболеваний, причем доля ω-3 должнабыть выше, следовательно, снижение индекса ω-6/ω-3 можетсвидетельствовать об уменьшении рисков.В разделе 3.7. показана возможность определения СЖК и ЭЖК в образцах органов и тканей без дополнительной модификации двухстадийнойметодики. Предложенная процедура совместного определения СЖК и ЭЖКв плазме крови была распространена на образцы гомогенатов. Для этого потребовалось ввести стадию разбавления пробы, поскольку концентрацииЭЖК в гомогенатах существенно выше, чем в крови. В остальном никакихвидоизменений методики не потребовалось.
На рисунке 10 представленымасс-хроматограммы реконструированные по характеристичным ионам приэкстракции ЭЖК из образцов гомогенатов печени и головного мозга. Можнозаметить, что никаких принципиальных отличий от результатов подготовкиобразцов плазмы крови не наблюдается.При апробации разработанной методики было впервые описанохроническое ингаляционное воздействие низких доз алифатическихуглеводородов на профили СЖК и ЭЖК головного мозга и печени крыс. Сцелью оценки опасности смеси предельных углеводородов проведеноисследование изменения профилей жирных кислот тканей печени иголовного мозга крыс при хроническом ингаляционном воздействии в20течение 90 суток углеводородами С6-С10, а именно гексаном, гептаном,октаном, нонаном и деканом.
У крыс были отобраны образцы головногомозга и печени, которые были незамедлительно заморожены в жидком азоте(-196 °С) и гомогенизированы.В мозге крыс экспонированных смесью углеводородов в концентрации160 мг/м3 обнаружено снижение суммарного содержания ЭЖК в среднем в 2раза. При этом выявлено увеличение концентраций длинноцепочечных СЖК,и снижение концентраций свободных ПНЖК.В печени обнаружено увеличение индекса вязкости клеточных мембран(отношение насыщенных ЖК к ненасыщенным). Такое увеличение можетбыть вызвано процессами перекисного окисления липидов и может вноситьвклад в потерю целостности мембран клеток печени.
Наряду с этим в печенитакже выявлено снижение индекса Δ5, значительно (p < 0.01) повышеноотношение насыщенных ЖК к ПНЖК. Суммарное содержание СЖК впечени при этом дозозависимо уменьшается. Возможно, этот эффект можнообъяснить следствием снижения синтетической функции печени подвоздействием токсичных соединений.Abunda160000015000001400000130000012000001100000100000090000080000070000060000050000040000030000020000010000nce20.
0216. 01796. 9. 6424E t _ 5 . D3 . 6 8 42 5\6. 0018. 032 354. 124. 32. 0020. 0022. 0d. 9a0t a. ms280. 32404. 9 7 2302 31 . 1 0 291 891 267 6.. 90 932. 4151e2. 1. 67821im1:01T4T I C5 3024976. 8187 22 66 . .35 41 992 9 . 9 7 43 32 2. 5. 97 27 02 5.66623 4 . 30 5 6780629999. .593112.8022 2. 42. 70 09 4 222..3. 0026. 0028. 0030. 0032. 0034.
0170- - >A bundanc e1800000T IC : E t_ 3 6 _ M .D \ d a ta .m s2 0 .0 2 72 3 .6 4 6160000014000002 5 .8 2 8120000010000008000006000004000002 1 .6 3 52000001 6 .0 9 61 7 .9 4 12 6 .8 1 12 6 .0 2 22 5 . 1 25 63 . 5 1 92 9 .9 7 83 2 .9 2 33 1 .4 7 51 6 .0 0 1 8 .0 0 2 0 .0 0 2 2 .0 0 2 4 .0 0 2 6 .0 0 2 8 .0 0 3 0 .0 0 3 2 .0 0 3 4 .0 0T im e - - >Рисунок 10 - Масс-хроматограммы экстрактов реконструированные по характеристичным ионам из образца печени (внизу) и головного мозга (вверху)21Простота метода и отсутствие стадии выделения липидных фракцийпозволяют проводить профилирование состава СЖК и ЭЖК в образцахвнутренних органов и тканей, вычислять количественные индексы ипараметры (Δ5, ω-6/ω-3 и пр.), и таким образом, выявлять токсическоедействие химических соединений на органы лабораторных животных.Использование разработанного метода определения жирнокислотногосостава органов и тканей лабораторных животных позволит внестисущественный вклад в практику регламентирования вредных химическихсоединений.ЗАКЛЮЧЕНИЕ1.
Двухстадийная хроматомасс-спектрометрическая методика совместногоколичественного определения свободных и этерифицированных ЖК в плазмекрови людей и лабораторных животных на принципах экстрактивногоалкилирования позволяет проводить определение 32 ЖК, включаяполиненасыщенные, и обеспечивает пределы обнаружения не менее 0.02мкг/мл, относительную ошибку определения не выше 15 %, при этом мягкиеусловия подготовки проб исключают побочные реакции переэтерификации,окисления и гидролиза аналитов.2. Установлено, что условия хранения образцов плазмы крови влияют насодержание в ней СЖК и ЭЖК.
Охарактеризованы оптимальные условияхранения биологических образцов перед анализом, не влияющие наисходный состав ЖК, а именно: не более 14 дней в замороженном виде притемпературе -20 °С без повторного замораживания.3. Показано, что гомогенаты органов и тканей можно использовать вкачестве образцов для определения СЖК и ЭЖК без введениядополнительных стадий разделения и очистки в предложеннуюдвухстадийную методику.4.
Внедрение разработанной методики в лабораторно-клиническуюдиагностику при гигиеническом регламентировании вредных химическихвеществ позволило установить ранее неизвестные аспекты токсическогодействия фосфорорганических соединений, алифатических углеводородов ифторацетата на организм животных.Основные материалы диссертации опубликованы в следующих работах:Статьи, опубликованные в журналах, рекомендованных ВАК:1.Уколов А.И., Орлова Т.И., Савельева Е.И., Радилов А.С. Хроматомассспектрометрическое определение свободных жирных кислот в плазме кровии моче с использованием экстрактивного алкилирования // Журналаналитической химии, 2015, Т.
70, № 9, С. 968-975.2.Орлова Т.И., Уколов А.И., Савельева Е.И., Радилов А.С. Определениесвободных и этерифицированных жирных кислот в плазме крови методомгазовой хроматоматографии с масс-селективным детектированием //Аналитика и контроль, 2015, Т. 19, № 2, С. 183-188.223.Уколов А.И., Орлова Т.И., Гончаров Н.В., Войтенко Н.Г. Исследованиеэнергетического метаболизма крыс при действии фторацетата // Вестникуральской медицинской академической науки, 2014, Т. 3, № 49, С. 64-66.4.Уколов А.И., Орлова Т.И., Мигаловская Е.Д., Войтенко Н.Г., ГончаровН.В.
Метаболомика: на пути интеграции биохимии, аналитической химии,информатики // Успехи современной биологии, 2015, Т. 135, № 1, С. 3-17.5.Уколов А.И., Орлова Т.И., Савельева Е.И., Радилов А.С., Гончаров Н.В.Изменения профилей жирных кислот плазмы крови крыс при введениисублетальных количеств фосфорорганических отравляющих веществ //Токсикологический вестник, 2015, Т. 132, № 3, С.
2-11.6.Уколов А.И., Орлова Т.И., Радилов А.С. Влияние биологическойматрицы и условий хранения на определение жирных кислот плазмы кровиметодом ГХ-МС // Вестн. Санкт-Петерб. гос. ун-та. 2015. Сер. 4. Вып. 4. С.83-91.Монографии:7.Goncharov N., Savelieva E., Zinchenko V., Kuznetsov S., Mindukshev I.,Vinokurov M., Avdonin P., Voitenko N., Ukolov A., Orlova T., Jenkins R.,Kuznetsov A. Chapter 8. Fluoroacetate. Handbook of toxicology of chemicalwarfare agents. Ed.: Ramesh C. Gupta. Academic Press. London. 2015. ISBN:978800159.Другие публикации по теме диссертационного исследования:8.Орлова Т.И., Уколов А.И. Экстрактивное алкилирование свободныхжирных кислот плазмы крови и мочи для определения методом газовойхроматографии с масс-селективным детектированием “VIII Всероссийскаяконференция с международным участием молодых ученых по химии“Менделеев 2014” (Санкт-Петербург, 1-4 апреля 2014 г.).
Тезисы доклада.9.Орлова Т.И. Экстрактивное алкилирование свободных жирных кислотплазмы крови для определения методом газовой хроматографии с массселективным детектированием “LXXV Ежегодная итоговая научнопрактическая конференция “Актуальные вопросы экспериментальной иклинической медицины – 2014” (Санкт-Петербург, 21-24 апреля, 2014 г.).Тезисы доклада.10. Орлова Т.И., Уколов А.И. Изменения профилей жирных кислот плазмыкрови крыс при воздействии фосфорорганических отравляющих веществ IIВсероссийская научная конференция молодых ученых «Медикобиологические аспекты химической безопасности» 1-2 октября 2015 года, г.Санкт-Петербург.23.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
