Автореферат (1150041), страница 4
Текст из файла (страница 4)
В некоторых работах отмечается, что выявленныеизменения затрагивают только минорные ЖК, и не затрагивают основныекомпоненты жирнокислотного состава образцов. Однако концентрациимногих минорных ЖК являются важными диагностическими маркерами.В таблицах 6 и 7 приведены результаты оценки стабильностиэтерифицированных и свободных жирных кислот в плазме крови приразличных условиях хранения образцов.В результате проведения исследований, можно рекомендоватьследующие надлежащие условия хранения: температура -20 °С,14продолжительность не более двух недель и не более одного замораживанияобразцов.
При соблюдении этих условий в образце происходят минимальныеизменения. Единственным выявленным отклонением является изменениеконцентрации свободной докозагексаеновой кислоты на 19 %. Увеличениеколичества циклов з/р приводит к увеличению концентраций СЖК иуменьшению концентраций ЭЖК, причем третий цикл значительноусугубляет изменения.Таблица 6 – Результаты оценки стабильности этерифицированных жирныхкислот в плазме крови при различных условиях хранения образцов.Изменения определяемых концентраций ЭЖК в образце приведены в % отисходных значений.Хранение при-20 °С вХранение приХранение приОпределяемыетечение одной-70 °С в течение+4 °С безжирные кислоты вили двуходной или двухзамораживания,пулированномнедель, безнедель, безкол-во днейобразце плазмыповторногоповторногокровизамораживаниязамораживания12312314 д28 д14 д28 дДодекановая-21-* -38-53-76-30-62-64Миристиновая-21- -29-33-16Пальмитолеиновая-30 -26 -27-19-272038Пальмитиновая-28 -28 -32-2221Линолевая-31 -32 -2322565591Олеиновая-23 -22 -15343647Линоленовая-17 -37 -31-42-27312760Элаидиновая- -29 -25-1643Стеариновая-22 -26 -21-20-2620Арахидоновая-18 -16 -21-1816Эйкозапентаеновая2054Эйкозатриеновая-17 -1922Эйкозадиеновая-20-24-18-17-18Докозагексаеновая1827-46-68-32-66Примечание: * - Величина изменений не превышает методическую погрешность измерений (≤15%)Изменений не выявленоИзменений не выявленоХранение при-20 °С, сповторнымзамораживанием,кол-во цикловХранение образцов при 4 °С в течение двух дней не влияет наконцентрации СЖК, тем не менее ЭЖК нестабильны даже в течение 24часов при такой температуре.
Интересно отметить, что понижениетемпературы хранения до -70 °С значительным образом сказалось наконцентрациях определяемых соединений.Модельный эксперимент с использованием раствора альбумина свнесением пальмитиновой (20 мкг/мл) и олеиновой (20 мкг/мл) кислотпоказал, что альбумин не влияет на концентрацию пальмитиновой кислоты,концентрация же олеиновой кислоты при этом уменьшается (см. рис.
4).Разницей в связывании кислот с альбумином можно пренебречь, так какконстанты связывания олеиновой и пальмитиновой приблизительно равны.15Таблица 7 – Результаты оценки стабильности этерифицированных жирныхкислот в плазме крови при различных условиях хранения образцов.Изменения определяемых концентраций СЖК в образце приведены в % отисходных значений.Изменений не выявленоИзменений не выявленоХранение приХранение при-20 °С вХранение приХранение приОпределяемые-20 °С, стечение одной-70 °С в течение+4 °С безжирные кислоты вповторнымили двуходной или двухзамораживания,пулированномзамораживанием,недель, безнедель, безкол-во днейобразце плазмыкол-во цикловповторногоповторногокровизамораживаниязамораживания12312314 д28 д14 д28 дДодекановая-36Миристиновая-20-41Пальмитолеиновая185024Пальмитиновая161628Линолевая24761957Олеиновая234624Линоленовая22Элаидиновая1939271941Стеариновая17Арахидоновая2476-17-17-60Эйкозапентаеновая173176-18-34Эйкозатриеновая2254Эйкозадиеновая-163530Докозагексаеновая2652-19-42-17-37Примечание: * - Величина изменений не превышает методическую погрешность измерений (≤15%)Рисунок 4 – Влияние хранения на концентрации пальмитиновой и олеиновойкислот в растворе альбуминаВнесениеантиоксидантади-трет-бутилгидрокситолуолавконцентрации 100 мкг на образец плазмы крови перед хранением (см.экспериментальную часть) не позволило увеличить продолжительностьхранения или количество циклов з/р.16Рисунок 5 – График счетов главных компонент 1 и 2 построенный методомPLS-DA иллюстрирующий сравнение групп образцов "0 циклов", "1 цикл", "2цикла" и "3 цикла".
Результаты получены при определении СЖКРисунок 6 – График счетов главных компонент 1 и 2 построенный методомPLS-DA иллюстрирующий сравнение групп образцов "0 дней", "2 недели" и"4 недели". Результаты получены при определении СЖКСтабильность ЖК в плазме крови при хранении было необходимооценить методами факторного анализа. Такая необходимость обусловленатем, что факторный анализ является основным методом исследования данныхв метаболомных исследованиях, а, следовательно, возникающие в результатехранения отклонения в исходном составе ЖК могут привести к ложнымвыводам.Рассмотрим четыре группы образцов (контроль, "0 циклов", "1 цикл", "2цикла" и "3 цикла") (см. рис.
5 и 6). PLS-DA анализ полученного массиваданных позволяет заключить, что первые два цикла з/р значимо неотличаются от исходного образца.Рисунок 7 – График счетов главных компонент 1 и 2 построенный методомPLS-DA иллюстрирующий сравнение групп образцов "0 циклов", "1 цикл", "2цикла" и "3 цикла". Результаты получены при определении ЭЖК17Значимость полученных результатов оценивали с помощью т.н.перестановочного теста, реализованного в ПО Multibase 2015 (50перестановок).
Основным влиянием на профиль СЖК обладают насыщенныеЖК с низкой концентрацией: миристиновая, додекановая, бегеновая иарахидиновая. Различия между исходным образцом и образцом,хранившимся 2 недели при -20 °С, значительно меньше, чем между исходными образцом, хранившимся 4 недели при -20 °С (рис. 6). На рисунке 7представлена аналогичная иллюстрация влияния циклов з/р на профилиЭЖК. Установлено, что уже второй цикл з/р образцов вносит достоверныеразличия в состав ЭЖК. В таблице 5 суммированы основные результаты,полученные в настоящей работе.Факт, не получивший объяснения, заключается в том, что понижениетемпературы хранения образцов до -70 °С оказывает негативное влияние навариацию концентраций СЖК и ЭЖК в образцах плазмы крови.
Такконцентрации СЖК изменяются в диапазоне от -17 до +19 %, а ЭЖК от-62 до +27 %.В результате предложены рекомендации по надлежащему хранениюобразцов плазмы крови. Образцы сохраняют пригодность для анализа втечение одного цикла замораживания/размораживания и до 14 дней храненияпри -20 °С. Показано, что СЖК проявляют большую стабильность, так ихопределение возможно и после двух циклов замораживания/размораживания,даже после хранения образцов при +4 °С в течение двух дней.
Показано, чтоиспользование добавок антиоксиданта в плазму крови перед хранением непозволяет увеличить продолжительность хранения или количество цикловзамораживания/размораживания. Понижение температуры образцов до -70 °Снеобъяснимым образом изменяет состав СЖК и ЭЖК, а результаты ихопределения становятся недостоверными.Раздел 3.4. посвящен оценке влияния сублетальных доз ФОВ – зарина,зомана и VR на метаболизм ЖК. Впервые описано воздействие ФОВ напрофиль СЖК плазмы крови крыс после острой интоксикации.
Показано, чтовлияние VR на профиль ЖК отличается от влияния зарина и зомана вэквитоксичных дозах: выявлены признаки гиперлипидемии, а именноувеличение числа этерифицированных (на 30%) и свободных форм ЖК (на81%) в плазме крови через неделю после отравления. Сделанопредположение о том, что возникновение хронической профессиональнойпатологии у лиц, работавших на предприятиях по производству илиуничтожению химического оружия, связано именно с нарушениямилипидного обмена, характерными для VR.Помимо общего изменения концентраций СЖК, измерение профилейпозволяет характеризовать качественное изменение липидного состава крови:при отравлении зоманом и зарином доля свободных нечётных ЖК возрастает,наряду с этим возрастает доля полиненасыщенных ЖК (индекс P/SF на рис.8). Стоит отметить, что суммарное количество полиненасыщенных ЖК(ПНЖК) падает согласно общему изменению СЖК, однако доля их18возрастает.
То есть в первую очередь происходит утилизация насыщенныхчётных СЖК. Данная зависимость сохраняется и при введении карбоксима всмеси с атропином. При отравлении VR происходит обогащение фракцииСЖК плазмы крови ПНЖК, через 7 дней индекс P/SF выше на 37% отконтрольной группы, а уровень СЖК выше на 80%.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
