Диссертация (1145855), страница 20
Текст из файла (страница 20)
Результаты скрещиваний триплоидных гибридных самок сгенотипами RRL и LLR с особями P. ridibundus, а также ди- и триплоидными самцами.Головастики, полученные в результате скрещиваний, были представлены особямиP. ridibundus (RR) и P. esculentus (RL). Триплоидные гибридные самки с генотипом RRLпроизводили ооциты с 13 бивалентами, соответствующими хромосомам типа ламповыхщеток P. ridibundus (оранжевый). Триплоидные гибридные самки с генотипом LLRпроизводили ооциты с13 бивалентами, соответствующими хромосомам P.
lessonae (синий).Полученные результаты позволяют нам заключить, что триплоидные гибридные самки сгенотипом RRL производили гаметы с геномом P. ridibundus (R), триплоидные гибридныесамки с генотипом LLR производили гаметы с геномами P. ridibundus (R) и P. lessonae (L),диплоидные гибридные самцы производили гаплоидные сперматозоиды с геномамиP. ridibundus (R) и P.
lessonae (L) и один триплоидный гибридный самец с генотипом RRLпроизводил гаплоидные сперматозоиды с геномом P. ridibundus (R).íîìåð ñêðåùèâàíèå êîëè÷åñòâî ãåíîìíàÿ ïðåäïîëàãàåìûå êîëè÷åñòâîïðîàíàëèïðîàíàëè- êîìïîçèöèÿãàìåòûçèðîâàííûõçèðîâàííûõ îîöèòîâñàìöîâ ãîëîâàñòèêîâñàìîêîîöèòîâ3_2013RLÕRL 1526 áèâàëåíòîâRLRLêàðèîòèïãîëîâàñòèêîâ10RRLRLL1RLL15RRLRLL14RLL10RL9RR16RR8RL15RR1026 óíèâàëåíòîâ3_2014RL RLÕ1926 áèâàëåíòîâRLRR7L26 óíèâàëåíòîâ1813 áèâàëåíòîâ5_2013RL RRÕ25R26 áèâàëåíòîâLR626 óíèâàëåíòîâ4_2013RR RR 5ÕR13 áèâàëåíòîâR101Рисунок 12.
Результаты скрещиваний особей P. ridibundus, а также диплоидныхгибридных самок с самцами P. ridibundus и диплоидными самцами P. esculentus.Головастики, полученные в результате скрещиваний, представлены триплоиднымигибридами с генотипами RRL и LLR, особями P. ridibundus (RR) и P. esculentus (RL).Диплоидные гибридные самки формируют ооциты с 26 би- и унивалентами,соответствующими хромосомам типа ламповых щеток P. ridibundus (оранжевый) иP. lessonae (синий), 13 бивалентами, соответствующими хромосомам типа ламповых щетокP. ridibundus (оранжевый).
Полученные результаты позволяют нам заключить, чтодиплоидные гибридные самки производят диплоидные гаметы (RL) и гаметы с геномамиP. ridibundus (R) и P. lessonae (L). Диплоидные гибридные самцы предположительнопроизводят гаплоидные сперматозоиды с геномами P. ridibundus (R) и P. lessonae (L). Двеособи P. ridibundus производят гаплоидные гаметы с геномом P. ridibundus.102соматических клеток, генетическими факторами или анеуплоидией головастиков, которыемогли возникнуть в результате оплодотворения анеуплоидных гамет (Berger, 1971;Ogielska, 1994; Ogielska, Jurgowiak, 1994; Christiansen et al., 2005).3.4.1.
Результаты скрещиваний триплоидных гибридных самок с диплоиднымигибридными самцамиМы проанализировали 262 головастика, полученных от 8 скрещиваний триплоидныхгибридных самок с генотипом RRL и диплоидных гибридных самцов. Головастики во всехполученных кладках были диплоидными (Рисунок 11). В результате кариотипирования иFISH с зондом к теломерному повтору мы установили, что в 4 кладках всепроанализированные головастики были представлены особями P. ridibundus, одна кладкабыла представлена головастиками P. esculentus, а 3 кладки были представленыголовастиками P. ridibundus и P. esculentus (Рисунок 13 а, б; Рисунок 11). Мы такжепроанализировали 136 ооцитов, полученных от всех триплоидных гибридных самок сгенотипом RRL, участвовавших в скрещиваниях.
В результате анализа мы обнаружилихромосомныенаборы,представленные13бивалентамихромосомтипаЛЩ,соответствующими геному P. ridibundus (Рисунок 11). Мы можем заключить, чтотриплоидные самки с генотипом RRL производят ооциты с 13 бивалентами, которые ведутк появлению диплоидных животных, посредством формирования гаплоидных гамет сгеномом P.
ridibundus (Рисунок 11).В результате скрещивания самки с генотипом LLR и триплоидного самца сгенотипом RRL мы получили 34 головастиков (Рисунок 11). После кариотипирования иFISH c зондом к теломерному повтору мы установили, что 33 головастика являютсяособями P. ridibundus, в то время как 1 головастик является особью P. esculentus (Рисунок11; 13 в, г). Анализ 6 ооцитов этой самки показал наличие 13 бивалентов, которыесоответствуют хромосомам типа ламповых щеток P. lessonae. Мы можем заключить, чтоэта триплоидная самка с генотипом LLR производила гаметы с геномом P.
ridibundus и сгеномом P. lessonae (Рисунок 11). Различие результатов, полученных после идентификациикариотипов головастиков и анализа хромосомных наборов ооцитов, могут быть следствиемнеравного вклада гамет с геномами P. ridibundus и P. lessonae в выживаемостьголовастиков. На основании результатов идентификации кариотипов головастиков,полученных в ходе этого скрещивания, мы также можем заключить, что триплоидныйгибридный самец с генотипом RRL производил гаплоидные гаметы с геномом P. ridibundus(Рисунок 11).104Рисунок 13. Картирование с помощью флуоресцентной in situ гибридизацииинтерстициальныхсайтовповтора(TTAGGG)n наметафазныххромосомахголовастиков, полученных в результате скрещиваний.Кариотипы головастиков, полученных в результате скрещивания триплоиднойгибридной самки с генотипом RRL и диплоидного гибридного самца, представленыхромосомами P.
ridibundus (б) и хромосомами диплоидной P. esculentus (а). Кариотипыголовастиков, полученных в результате скрещивания триплоидной гибридной самки сгенотипом LLR и триплоидного гибридного самца с генотипом RRL, представленыхромосомами P. ridibundus (в) и хромосомами диплоидных гибридов P. esculentus (г).Кариотипы головастиков, полученных в результате скрещивания двух диплоидныхгибридных лягушек, представлены хромосомами P. ridibundus (ж), хромосомамидиплоидных гибридов P. esculentus (з) и хромосомами триплоидных гибридов с генотипамиRRL (д) и LLR (е).
Стрелки указывают на интерстициальные сайты повтора (TTAGGG)n наядрышкообразующейхромосоме,Масштабный отрезок = 10 мкм.которыеразличаютсяуродительскихвидов.1053.4.2. Результаты скрещиваний диплоидных гибридов друг с другом и особямиродительского видаВ результате FISH с зондом к теломерному повтору, мы смогли идентифицироватькариотипы 83 головастиков, полученных от скрещивания 3 диплоидных гибридных самокс двумя диплоидными гибридными самцами и одним самцом P. ridibundus (Рисунок 12).
Водном скрещивании двух диплоидных гибридов мы обнаружили 10 триплоидных гибридовс генотипом RRL и одного триплоидного головастика с генотипом LLR (Рисунок 12).Анализ хромосом типа ламповых щеток показал, что 15 ооцитов этой самки содержали 26бивалентов, 10 ооцитов содержали 26 унивалентов, среди которых 13 би- или унивалентовсоответствуют хромосомам P. ridibundus, а 13 би- или унивалентов соответствуютхромосомам P. lessonae (Рисунок 12). От скрещивания другой гибридной самки сдиплоидным гибридным самцом мы получили 48 головастиков, среди которых билыобнаружены не только триплоидные головастики с генотипами RRL (15 особей) и LLR (14особей), но также диплоидные P.
esculentus (10 особей) и особи P. ridibundus (9 особей)(Рисунок 12; 13 д-з). В результате анализа хромосом типа ламповых щеток мы обнаружили18 ооцитов с 13 бивалентами, соответствующими геному P. ridibundus, а также 19 ооцитовс 26 бивалентами и 7 ооцитов с 26 унивалентами, среди которых 13 би- или унивалентовсоответствуют хромосомам P.
ridibundus, а 13 би- или унивалентов соответствуютхромосомам P. lessonae (Рисунок 12). Таким образом, ооциты с 26 бивалентами могутпройти мейоз и сформировать диплоидные гаметы с геномами обоих родительских видов,которые после оплодотворения приведут к возникновению триплоидных гибридныхголовастиков (Рисунок 12).После скрещивания одной диплоидной гибридной самки с самцом P. ridibundus мыполучили головастиков P. ridibundus и P. esculentus (Рисунок 12). Однако анализ хромосомтипа ламповых щеток показал, что ооциты этой исключительной самки содержат 26бивалентов, среди которых 13 би- или унивалентов соответствуют хромосомамP. ridibundus, а 13 би- или унивалентов соответствуют хромосомам P.
lessonae (Рисунок 12).Ооциты с 26 бивалентами должны привести к возникновению триплоидных головастиков,что не соответствует результатам скрещиваний. Так как анализ хромосом типа ламповыхщеток проводился после экспериментов по скрещиванию, исследованные ооцитынапрямую не участвовали в формировании анализированных головастиков. Однакоисследование оогенеза амфибий, проведенное Огельской с соавторами, показало, что запасооцитов закладывается на ранних стадиях развития головастика и не пополняется напротяжении жизни особи (Ogielska, Kotusz, 2004; Ogielska et al., 2013).107Рисунок 14. Обнаружение микроядер в гонадах гибридных головастиков.Оптические срезы гонад, диссектированных из диплоидных (д, ж, з) и триплоидных(в, г, е, и, к) головастиков P. esculentus, а также из головастиков P.
ridibundus (a, б).Недифференцированные гонады (стадия 3 в соответствии с Ogielska, Kotusz 2004) изголовастиков P. ridibundus, находящихся на стадии развития 28-29 по Госнеру (Gosner,1960) (a). Гонады во время стадии высокой митотической активности (стадия 4 всоответствии с Ogielska, Kotusz, 2004) из головастиков P. ridibundus, находящихся на стадииразвития 32-33 по Госнеру (Gosner, 1960) (б). Масштабный отрезок = 50 мкм.Стрелки указывают на микроядра (ядроподобные тельца в соответствии с Ogielska, 1994),которые многочисленны в цитоплазме зародышевых клеток гонад у диплоидных (д, ж, з) итриплоидных (в, г, е, и, к) головастиков, находящихся на стадиях развития 30-33 по Госнеру(Gosner, 1960). Микроядра различаются по размерам и плотности хроматина (в, г, д, е, ж).Стадия анафазы митоза (з, и, к). Головки стрелок указывают на хромосомы.
Не былообнаружено отстающих хромосом (в, з, и, к). Масштабный отрезок для в = 50 мкм;масштабный отрезок для г = 25 мкм; масштабный отрезок для д-к = 10 мкм.108Эта исключительная самка представляет либо необычный тип оогенеза, либо сильныймозаицизм зародышевых клеток.Исходя из анализа кариотипов головастиков, полученных в результате скрещиваний,мы также можем оценить вклад самцов P. esculentus в возникновение гибридных животныхи особей родительских видов в изучаемых популяционных системах R-E типа.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
