Диссертация (1145849), страница 12
Текст из файла (страница 12)
В экспериментах использовали МСК 3-4 пассажей из костного мозга (2культуры), жировой ткани (2 культуры) и пупочного канатика (3 культуры),находившиеся в фазе логарифмического роста (30-60% конфлуентности) или встационарной фазе (100% конфлуентности).МСКкостногомозганеоказываливлияниянасодержаниевнутриклеточного IgM в клетках линии Namalva. Уровень IgM при этомсоответствовал контрольным значениям вне зависимости от состоянияконфлюентности монослоя МСК (Рис. 3.24.)Рисунок 3.24. Уровень внутриклеточного IgM в клетках линии Namalvaпри сокультивировании с МСК в экспоненциальной или стационарной фазахроста.
Группы столбиков: 1 – МСК, полученные из костного мозга, 2 – МСК изжировой ткани, 3 – МСК из пупочного канатика. Белые столбики – контроль.Серые столбики – культуры МСК в стационарной фазе роста (100%), черныестолбики – культуры МСК в логарифмической фазе роста (30–60%). Нагистограммах указано стандартное отклонение. * – значения, достоверноотличные от контроля (р<0,05).73ДостоверноеувеличениесодержанияIgMнаблюдалиприсокультивировании клеток Namalva с МСК жировой ткани. МСК из пупочногоканатика также вызывали увеличение уровня IgM. Культуры МСК пупочногоканатика и жировой ткани, находящиеся в логарифмической или встационарной фазах роста, стимулировали синтез IgM одинаково эффективно.Действие МСК, пролиферирующих или покоящихся, было одинаковым. Такимобразом, МСК из разных источников при контактном сокультивировании склетками Namalva, либо не влияли на содержание цитоплазматического IgM,либо вызывали его увеличение (Айзенштадт и др., 2014).МСК костного мозга, также не оказывали влияния на уровень продукцииIgE клетками линии U266.
МСК из жировой ткани и пупочного канатикаусиливали продукцию IgE, если находились в фазе логарифмического роста.Культуры МСК, прекратившие пролиферацию вследствие достижения 100%ного монослоя, оказывали слабое подавляющее действие на накопление IgE.Таким образом, при сокультивировании с миеломными клетками U266,пролиферирующие МСК могут оказывать стимулирующее действие нанакоплениеIgE,тогдакакМСКвстационарнойфазепроявляютингибирующий эффект (рис.
3.26.).Рисунок 3.25. Уровень внутриклеточного IgE в клетках линии U266присокультивировании с МСК в экспоненциальной или стационарной фазах роста.Обозначения те же, что и на Рис.3.25.74Таким образом, МСК могут по-разному влиять на продукцию Igлимфобластоидными и миеломными клетками в зависимости от источникаполучения и фазы роста культуры МСК. МСК из костного мозга здоровыхдоноров, вне зависимости от фазы роста культур, не влияли на синтез IgM иIgE. МСК жировой ткани и пупочного канатика на лимфобластоидные клеткиоказывали стимулирующее действие. В тоже время при сокультивированииМСКсмиеломнымиклеткаминаблюдаликакподавление,такистимулирование продукции IgE. Стимулирование накопления IgE миеломнымиклетками происходило при сокультивировании с МСК жировой ткани ипупочного канатика в логарифмической фазе роста, а МСК пупочного канатикав стационарной фазе роста наоборот подавляли продукцию IgE (Айзенштадт идр., 2014).3.5.3. Влияние МСК на аллерген-специфические реакции лейкоцитов приатопической гиперчувствительности.Функциональную активность МСК изучали в экспериментах, в которыхмоделировали одно из звеньев эффекторной фазы аллергических реакций, аименно изменение состояния культивируемых клеток сенсибилизированногоорганизма при повторном контакте с аллергеном.
Клетки мононуклеарнойфракции были получены из образцов периферической крови 16 доноров спроявлениями гиперчувствительности в анамнезе. Клетки мононуклеарныхфракций после выделения на градиенте фиколла содержали наряду слимфоцитами моноциты и гранулоциты, т.е. все клеточные типы, которыеответственны за появление изменений, наблюдаемых при культивировании вприсутствии аллергенов (Табл. 3.5.). Увеличение выборки было обусловленогетерогенностьюгруппыобследованныхдоноровпотипусенсибилизирующего аллергена, формам и тяжести клинических проявленийатопической гиперчувствительности.75Таблица 3.5. Клеточный состав лейкоцитарных фракций, выделенных изкрови доноров, сенсибилизированых в отношении специфических аллергеновНомердонора12345678910111213141516Лимфоциты,%69,8±275±471,4 ± 179 ±485,7 ±587,2±885,6 ± 478±4,577,9±375,8±773±280±469,5±581±0,777,2±167,3±6Аллергенпыльца березышерсть и эпителий кошкирыбакреветкирыбакреветкиамброзия полыннолистнаяшерсть кошкицитрусовыепенициллинлидокаинпыльца березыперхоть кошкитопольгорчицапенициллинМоноциты,%4 ±28,9 ±29 ± 0,510 ±36 ± 0,55,7 ±28,1 ± 59 ±29,6 ±29,3 ±48 ±28,9 ±27,7 ±110 ±0,56,8 ±211,7 ±2Гранулоциты,%25,7±216 ±319,6 ±111 ±38,3 ±47,1 ±5,56,3 ±113 ±312,5 ±314,9 ±319 ±311 ±323 ±69 ±0,516 ±321 ±3Воздействие аллергенов на клетки мононуклеарной фракции не вызывалодостоверно значимого изменения доли CD69+ Т-лимфоцитов.
УвеличениесодержанияактивированныхТ-лимфоцитоввприсутствииаллергенапроисходило только в смешанной культуре клеток мононуклеарной фракции сМСК (Рис.3.26.) (Айзенштадт и др., 2015).МНКкостный мозгжировая тканьпупочный канатикCD69+ Т-лимфоциты, %25*20***15**1050без стимулаРисунокотносительно3.26.СодержаниеобщегоаллергенТ-лимфоцитов,количестваэкспрессирующихТ-лимфоцитов.УказаноCD69,стандартноеотклонение. Обозначения те же, что и на Рис. 3.19.76Рост содержания Т-лимфоцитов, несущих поздний маркер активации(HLA-DR+), в ответ на воздействие аллергена наблюдали в 13 образцахмононуклеарной из 16. Через 72 часа культивирования мононуклеарнойфракции с аллергеном количество HLA-DR+ Т-лимфоцитов возрастало в 1,5-3раза.
В смешанной культуре с МСК усиления экспрессии HLA-DR непроисходило. В тех образцах, где инкубация с аллергеном не вызвалаизменения содержания активированных Т-лимфоцитов (Образцы № 6, 7 и 10),присутствие МСК также не оказывало влияния на данный показатель (Рис.3.27.).*Рисунок3.27.Содержаниеактивированных(CD3+HLA-DR+)Т-лимфоцитов после культивирования клеток мононуклеарных фракций вростовой среде (контроль), или в среде с аллергенами (аллерген), или присокультивировании с МСК из различных источников в присутствииаллергенов. * - данные, достоверно отличные от контроля (Р<0,05).Таким образом, аллогенные МСК вне зависимости от присутствия аллергенавызывают повышение доли Т-лимфоцитов экспрессирующих CD69+ клеток.ОднакоМСКотносительногопредотвращаютсодержания,вызванноеHLA-DR+аллергеномТ-лимфоцитов.увеличениеВлияниеМСК,полученных из разных источников, было сходным (Айзенштадт и др., 2015).Сокультивирование клеток мононуклеарных фракций с МСК из разныхисточников приводило к росту относительного содержания регуляторных Тлимфоцитов с фенотипом CD4+CD25+CD127low, в то время как само77присутствие аллергена в среде клеток мононуклеарной фракции влияния на ихчисленность не оказывало.
При сокультивировании с МСК пупочного канатикадоля регуляторных Т-лимфоцитов увеличивалось в среднем на 34 % (мин – 13%, макс – 59 %). В опытах с МСК из костного мозга прирост этого показателясоставлял 31 % (мин – 13 %, макс – 53 %), а при использовании МСК жировойткани – 30 % (мин – 14 %, макс – 48 %) (Рис.3.28.) (Айзенштадт и др., 2015).***Рис.3.28. Содержание регуляторных Т-лимфоцитов (CD4+CD25+CD127low)среди клеток мононуклеарных фракций после их культивирования в ростовойсреде(контроль), иливсреде саллергенами(аллерген), илиприсокультивировании с МСК из различных источников в присутствииаллергенов.
По оси ординат – относительное содержание Т-регуляторныхклеток. * - данные, достоверно отличные от контроля (Р<0,05).При этом МСК не оказывали влияния на соотношение основных популяцийлимфоцитов: Т- и В-лимфоцитов, естественных киллеров.
Соотношение ТхелперовиТ-цитотоксическихклетоктакженеменялосьприсокультивировании с МСК, вне зависимости от источника их получения.Формирование популяции регуляторных Т-лимфоцитов в присутствииМСК сопровождалось повышением концентрации IL-10 в культуральной средесмешанных культур. При сокультивировании клеток мононуклеарной фракциис МСК пупочного канатика концентрация IL-10 возрастала практически в трираза (на 190%) по сравнению с контролем, а МСК костного мозга или жировойткани - на 40% и 75%, соответственно (Рис.3.29).78Концентрация IL-10, пг/мл45*4035*30*2520151050костныймозгконтрольжироваятканьРис.
3.29. Изменение содержанияпупочныйканатикIL-10 в культуральной средепупочныйприканатиксокультивировании клеток мононуклеарной фракции с МСК костного мозга,жировой ткани и пупочного канатика в присутствии аллергена. Контроль –интактные лимфоциты. Указано стандартное отклонение.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
