Автореферат (1141400), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Таким образом, разработанная методика позволяет получатьнадежные результаты анализа даже при изменении внешних условий работы.А.Методикаспектрофотометрическогоопределенияборхлоринавлипосомальной дисперсии4 мл липосомальной дисперсии борхлорина помещают в мерную колбувместимостью 25 мл и добавляют небольшое количество спирта 95%, перемешивают,доводят спиртом до метки и перемешивают (раствор А). 5 мл раствора А помещают вмерную колбу вместимостью 25 мл, доводят спиртом до метки и перемешивают(раствор Б). Измеряют величину оптической плотности раствора Б в кюветах столщиной оптического слоя 10 мм в максимуме поглощения (662±2) нм относительнораствора сравнения (спирт 95%).
Параллельно проводят измерение оптическойплотности раствора СО субстанции борхлорина относительно раствора сравнения.Концентрацию борхлорина в ЛЛФ (Х, мг/мл) рассчитывают по формуле:Х= А×а0/ А0×4,где: А и А0 – оптические плотности растворов образца ЛЛФ и СО борхлоринасоответственно; а0 – навеска СО борхлорина, в мг; 4 – 4 мл образца ЛЛФ борхлорина.Б. Методика спектрофотометрического определения борхлорина в лиофилизатеК содержимому флакона ЛЛФ-лио борхлорина добавляют 3,7 мл воды иперемешивают до получения однородной липосомальной дисперсии.
Полученнуюдисперсию количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводятспиртом 95% до метки и перемешивают (раствор А). 5 мл раствора А помещают в20мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят спиртом до метки и перемешивают(раствор Б). Измеряют величину оптической плотности раствора Б в кюветах столщиной оптического слоя 10 мм в максимуме поглощения (662±2) нм относительнораствора сравнения (спирт 95%). Параллельно проводят измерение оптическойплотности раствора СО субстанции борхлорина относительно раствора сравнения.Содержание борхлорина во флаконе (Х, мг) рассчитывают по формуле (разведенияобразца ЛЛФ-лио и СО борхлорина одинаковы):Х= А×а0/ А0,где: А и А0 – оптические плотности растворов образца ЛЛФ-лио и СО борхлоринасоответственно; а0 – навеска СО борхлорина, в мг.Относительная погрешность определения борхлорина в липосомальнойдисперсии и ЛЛФ-лио по данной методике не превышала 2%.3.
Стандартизация и мониторинг стабильности в процессе хранения ЛЛФ-лиоборхлоринаВ результате проведенных исследований разработан препарат «Борхлоринлипосомальный, лиофилизат для приготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг»,который имеет следующий состав на 1 флакон:БорхлоринФХ1,0 мг180,0 мгХолестеринПЭГ-ДГФАСахароза32,0 мг3,0 мг405,0 мг.Итого: 621,0 мгДля стандартизации ЛЛФ-лио борхлорина выбраны показатели, по которымследует контролировать качество препарата после получения и в процессе хранения.К данным показателям относятся: описание, регидратируемость, подлинность,количественное определение, однородность дозирования (содержание борхлорина вофлаконе), средняя масса содержимого флакона, размер везикул, рН, потеря в массепри высушивании.
На основании выбранных показателей был разработан проект НДна препарат «Борхлорин липосомальный, лиофилизат для приготовления дисперсиидля инъекций 1,0 мг».Для изучения стабильности и установления срока годности три серии ЛЛФ-лио(151012, 200313, 240413) борхлорина были заложены на хранение. Препарат хранилив морозильной камере при температуре -18ºС, поскольку такая температураустановлена для хранения липидов. Результаты оценки основных показателейкачества серий препарата представлены в табл.
9.21Из данных табл. 9 видно, что при анализе качества ЛЛФ-лио борхлорина впроцессе хранения не наблюдались значимые изменения в показателях качества,заложенных в проекте НД. Проведенные исследования позволили установить срокгодности для препарата «Борхлорин липосомальный, лиофилизат для приготовлениядисперсии для инъекций 1,0 мг» 2 года. Изучение стабильности и срока годностипрепарата продолжаются.Таблица 9Основные показатели качества ЛЛФ-лио борхлорина после получения и в процессе храненияПоказатель качестваПределы попроекту НДСодержаниеборхлорина вофлаконе, мг0,85-1,15Потеря в массе привысушивании, %Не более3,0Средний диаметрвезикул, нмНе более210рН5,8-7,2Срок хранения,мес.036912182430360369121824303603691218243036036912182430361510121,041,051,011,021,041,031,031,091,02Серия ЛЛФ-лио борхлорина2003132404131,021,041,021,071,021,051,001,021,001,061,001,061,041,041,001,02-Практическиотсутствует1871871681741741751761651707,16,46,66,76,76,56,76,86,4ПрактическиотсутствуетПрактическиотсутствует1721711771651701751591706,26,65,96,06,06,46,86,4-1711911711751761701711706,36,76,76,36,46,76,56,5-Общие выводы1.По результатам исследований предложен оптимальный состав стерическистабилизированной липосомальной лекарственной формы борхлорина длявнутривенноговведениясмолярными22соотношениямикомпонентовборхлорин/ФХ 1:200 и ФХ/Хол/ПЭГ-ДГФА 1:0,33:0,004 (борхлорин/ФХ/Хол/ПЭГДГФА=1,0:200,0:67,0:0,8).2.Разработанатехнологияполученияустойчивойлиофилизированной липосомальной лекарственной формыприхраненииборхлорина длявнутривенного введения.
Для достижения максимальной стабилизации липосом сборхлорином в процессе лиофилизации подобран эффективный криопротектор –сахароза, вводимая в липосомальную дисперсию в молярном соотношенииФХ/сахароза 1:5.3.Разработана методика качественного ТСХ-анализа компонентов лекарственнойформы борхлорина c использованием хроматографических пластинок «Sorbfil».
Дляидентификации борхлорина и Хол предложена система бутанол/ледяная уксуснаякислота/вода (6:3:2), ФХ – система хлороформ/этанол/ледяная уксуснаякислота/ацетон/вода (6:2:2:1:1), сахарозы – система ацетон/ледяная уксуснаякислота/вода (15:3:2).4.Разработанаивалидированаметодикаколичественногоспектрофотометрического анализа борхлорина в составе лекарственной формы придлине волны (662±2) нм с использованием стандартного образца.5.Выбраны показатели качества для стандартизации препарата «Борхлоринлипосомальный, лиофилизат для приготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг». Порезультатам изучения стабильности ЛЛФ-лио борхлорина определен срок храненияпрепарата – 2 года.6.Составлен проект НД на препарат «Борхлорин липосомальный, лиофилизат дляприготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг».СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ1.
Дмитриева, М.В. Наноструктурированные системы доставки противоопухолевыхпрепаратов (обзор литературы) / М.В. Дмитриева, Н.А. Оборотова, Е.В. Санарова,Н.Д. Бунятян // Российский биотерапевтический журнал. – 2012. – Т.11, №4. –С. 21-27.2. Дмитриева, М.В. Анализ липосомальной лекарственной формы новогофотосенсибилизатора хлоринового ряда / М.В. Дмитриева, Е.В. Санарова,А.П. Полозкова, О.Л. Орлова, Н.А. Оборотова // Материалы Белорусско-Российскойнаучно-практической конференции с международным участием «Отечественныепротивоопухолевые препараты».
– Минск, 2013. – С.28.3. Дмитриева, М.В. Липосомальная лекарственная форма борхлорина /М.В. Дмитриева, Н.А. Оборотова, О.Л. Орлова, А.П. Полозкова, И.И. Агапов,23М.П. Кирпичников // Российский биотерапевтический журнал. – 2014. – Т.13, №1.– С. 31-36.4. Дмитриева, М.В. Качественный анализ липосомальной лекарственной формыборхлорина / М.В. Дмитриева, А.П. Полозкова, Н.А. Оборотова // МатериалыВсероссийской научно-практической конференции с международным участием«Противоопухолевая терапия: от эксперимента к клинике».
– Москва, 2014. – С. 81.5. Кульбачевская, Н.Ю. Изучение «острой» токсичности липосомальнойлекарственной формы борхлорина / Н.Ю. Кульбачевская, О.И. Коняева,М.В. Дмитриева, Н.А. Оборотова // Российский биотерапевтический журнал. –2014. – Т.13, №3. – С. 51-56.6. Санарова Е.В. Фотодинамическая терапия – способ повышения селективности иэффективности лечения опухолей (обзор литературы) / Е.В. Санарова, А.В. Ланцова,М.В.Дмитриева,З.С.Смирнова,Н.А.Оборотова//Российскийбиотерапевтический журнал.
– 2014. – Т.13, №3. – С. 109-118.7. Дмитриева М.В. Сравнение способов получения липосом с борхлорином /М.В. Дмитриева, Н.А. Оборотова, Ю.В. Родионова // Материалы XII Всероссийскойнаучно-практической конференции с международным участием «Отечественныепротивоопухолевые препараты». – Москва, 2015. – С.
78.СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙЛЛФ – липосомальная лекарственная формаЛЛФ-лио – лиофилизированная липосомальная лекарственная формаЛФ – лекарственная формаМСЛ – многослойные липосомыОСЛ – однослойные липосомыПЭГ-ДГФА – полиэтиленгликоль-2000-дистеароилфосфатидилэтаноламинСО – стандартный образецТСХ – тонкослойная хроматографияФДТ – фотодинамическая терапияФС – фотосенсибилизаторФХ – фосфатидилхолинХол – холестеринЭВ – эффективность включения24.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
