Автореферат (1141400), страница 3
Текст из файла (страница 3)
2) установлено, что наиболееоптимальным по указанным выше параметрам является состав с молярнымисоотношениями борхлорин/ФХ 1:200 и ФХ/Хол/ПЭГ-ДГФА 1:0,33:0,004, которыйобеспечивает максимальный уровень включения борхлорина – 99% и размер липосомпосле экструзии – 185±8 нм.Таблица 2Модели составов ЛЛФ борхлорина№Молярные соотношенияборхлорин/ФХФХ/Хол/ПЭГ-ДГФА1:0:0,0031:0,1:0,0031:1001:0,25:0,0031:0,33:0,0031:0,50:0,0031:0,33:0,0031:140123456781:1701:0,33:0,00491:180101:0,25:0,004111:0,33:0,002121:1851:0,33:0,004131:0,33:0,005141:0,33:0,006151:190161:195171:2001:0,33:0,004181:205191:210Примечание: * одна фракция (100%)ЭВ, %88,0±1,090,0±1,089,0±0,892,0±0,691,0±0,893,0±1,093,0±1,096,0±0,597,0±0,696,0±1,098,0±0,898,0±0,597,0±1,196,0±1,093,0±1,091,0±1,499,0±0,599,0±1,099,0±0,5Размер липосом борхлорина, нм(распределение по фракциям, %)186±8 (97%)/51±7 (3%)190±10 (98%)/47±5 (2%)205±6*208±8*235 (97%)±12/18±6 (3%)206±6 (99%)/15±3 (1%)196±8*211±8*198±9 (99%)/23±4 (1%)190±8*203±10 (98%)/28±3 (2%)196±8 (99%)/11±3 (1%)195±8*184±8*207±10*196±11*185±8*194±10*205±8*1.2.
Разработка технологии получения ЛЛФ-лио борхлорина1.2.1. Выбор дисперсионной среды для гидратации липидной пленкиПри выборе гидратирующей жидкости для получения липосомальнойдисперсии сравнивали следующие растворители: воду для инъекций, 5% растворглюкозы и изотонический раствор натрия хлорида (табл. 3).Таблица 3Выбор растворителя для гидратации липидной пленкиРастворительВода для инъекций5% раствор глюкозыИзотонический раствор натрияхлоридаПримечание: * одна фракция (100%)Размер липосом борхлорина, нм(распределение по фракциям, %)после полученияпосле экструзии266±16 (99%)/11±6 (1%)185±8*259±15 (98%)/29±10 (2%)195±7*99,0±0,595,0±0,8404±23 (99%)/11±8 (1%)93,0±0,711206±8*ЭВ, %Из табл.
3 видно, что вода для инъекций в качестве растворителя обеспечивалаполучение дисперсии с оптимальными параметрами качества: ЭВ борхлоринадостигала уровня 99% и средний размер везикул после экструзии составил 185 нм.1.2.2. Получение ОСЛ борхлоринаНа этапе гидратации тонкой липидной пленки образуются неоднородныевезикулы со средним диаметром преобладающей фракции около 270 нм. Однакооптимальный размер носителей, обеспечивающих пассивный транспорт ЛВ вопухоль, находится в интервале 100-200 нм. Поэтому целью данного исследованияявлялся выбор способаполучения ОСЛ борхлорина приемлемого размера,обеспечивающего сохранение высокого уровня включения ФС в везикулы.
В ходеработы сравнивали показатели качества дисперсий, полученных после экструзии,обработки УЗ и гомогенизации МСЛ борхлорина.При выборе оптимального режима экструзии липосом борхлорина оценивалиэффективность двух типов фильтрующих мембран – поликарбонатных с диаметромпор 0,2 мкм и нейлоновых с диаметром пор 0,22 мкм.Согласно результатам, представленным на рис. 2А, наиболее эффективнойоказалась экструзия с использованием поликарбонатных фильтров, посколькупозволила получить везикулы диаметром около 140 нм, в то время как минимальноезначение диаметра липосом при экструзии с нейлоновыми фильтрами составило 180нм.
Однако полученные при экструзии с поликарбонатными фильтрами везикулыимели склонность к слиянию и в процессе хранения укрупнялись почти в 2 раза.Нейлоновый фильтр 0,22 мкмПоликарбонатный фильтр 0,2 мкмНейлоновый фильтр 0,22 мкм2501002009815096ЭВ, %Размер везикул, наПоликарбонатный фильтр 0,2 мкм100509492908800123456789100123456Число цикловЧисло цикловАБРисунок 2. Средний размер липосом (А) и ЭВ (среднее значение) (Б) при экструзии сиспользованием поликарбонатного и нейлонового фильтровКроме того, установлено, что при использовании поликарбонатных фильтров суменьшением диаметра липосом наблюдается значительное снижение включенияборхлорина (рис. 2Б).
В отличие от поликарбонатных фильтров использованиенейлоновых фильтров при экструзии МСЛ борхлорина обеспечивает получениеустойчивых везикул с сохранением высокого уровня включения ФС.121002509820096ЭВ, %Размер везикул, нм30015010094929050880015202530450601530Время, мин4560Время, минАБРисунок 3. Средний размер липосом (А) и ЭВ (среднее значение) (Б) при воздействии УЗРезультаты, представленные на рис. 3А, показывают, что с увеличениемвремени воздействия УЗ на МСЛ борхлорина наблюдалось постепенное уменьшениедиаметра везикул.
Спустя 30 мин диспергирования образовывались липосомыразмером 190-195 нм, и при дальнейшей обработке УЗ диаметр везикул практическине изменялся, что свидетельствует о низкой эффективности данного метода. Крометого, в процессе УЗ-обработки наблюдали постепенное нагревание дисперсии – за 60мин диспергирования температура дисперсии увеличилась практически в 2 раза отначального значения. При этом отмечали значительные изменения показателя рН(увеличение от 6,1±0,1 до 6,8±0,1), а ЭВ снизилась до 94% после 30 мин УЗобработки и до 92% после 60 мин (рис. 3Б).Гомогенизация липосомальной дисперсии борхлорина позволяет быстрееполучить ОСЛ приемлемого размера, чем при экструзии.
Для формированиястабильных во времени везикул со средним диаметром 175 нм и высоким уровнемвключения борхлорина (97±1%) наиболее оптимальной является гомогенизациядисперсии объемом 60 мл в течение 1 мин (рис. 4). Однако следует отметить, что приобработке малых объемов дисперсии (60 мл) значительная часть теряется в основныхузлах прибора: потери составляют порядка 15-20%.250200ЭВ, %Размер везикул, нм30015010050000123Время, мин451009896949290888684820123Время, мин45АБРисунок 4. Влияние гомогенизации на качество ЛЛФ борхлорина:А – средний размер липосом, Б – ЭВ (среднее значение)Таким образом, в результате сравнения методов изготовления ОСЛ борхлоринаоптимальные показатели качества получены при экструзии с нейлоновымифильтрами.
Гомогенизация также позволяет получить качественную ЛЛФ борхлоринаи может быть рекомендована для крупномасштабного производства препарата.131.2.3. Выбор криопротектора для лиофилизации ЛЛФ борхлоринаВ ходе исследования установлено, что ЛЛФ борхлорина стабильнанепродолжительный период времени – в течение 5-6 суток. При более длительномхранении наблюдается постепенное укрупнение везикул и снижение значения рНдисперсии.
Поэтому для повышения устойчивости липосом борхлорина в процессехранения и продления срока годности предложена стабилизация ЛФ посредствомсублимационной сушки.Основной задачей этапа разработки технологии лиофилизации ЛЛФборхлорина являлся выбор типа криопротектора и его количества, обеспечивающегополучение лиофилизата надлежащего качества. В качестве криопротекторовисследовались глюкоза, лактоза, сахароза, трегалоза и маннит.
Глюкозу, сахарозу,трегалозу или маннит вводили в липосомальную дисперсию перед лиофилизацией ввиде концентрированного раствора в молярных соотношениях ФХ/криопротектор 1:5и 1:10. Поскольку лактоза в отличие от вышеупомянутых веществ имеет болеенизкую растворимость в воде (16 г/100 мл при 20°С) ее непосредственно растворяли влипосомальной дисперсии в соотношениях ФХ/криопротектор 1:5 и 1:7,5.Из результатов данного исследования, представленных в табл. 4, следует, чтопо таким показателям качества лиофилизата как размер везикул после лиофилизации,ЭВ и регидратируемость оптимальным криопротектором для получения ЛЛФ-лиоборхлорина является сахароза, вводимая в липосомальную дисперсию в молярномсоотношении ФХ/сахароза 1:5.Таблица 4Выбор криопротектора для лиофилизации ЛЛФ борхлоринаКриопротекторГлюкозаЛактозаСахарозаТрегалозаМаннитМолярноесоотношениеФХ/криопротектор1:51:101:51:7,51:51:101:51:101:51:10Размер липосом борхлорина, нм(распределение по фракциям, %)допосле лиофилизациилиофилизации174±10*242±18 (98%)/22±11 (2%)170±8*169±7*183±5*204±12 (88%)/77±8 (12%)175±8*151±7*, осадок167±7*158±10*168±8*189±14 (96%)/51±6 (4%)175±6*166±9 (60%)/44±5 (40%)180±8*165±7 (83%)/40±3 (17%)167±6*707±30 (93%)/73±5 (7%)159±10*263±10 (98%)/27±5 (2%)ЭВ, %99,0±0,595,0±0,999,0±0,496,0±0,897,0±1,092,0±1,097,0±1,092,0±0,899,0±0,597,0±0,6Примечание: * одна фракция (100%)1.2.4.
Выбор режима лиофилизации ЛЛФ борхлоринаВыбор оптимального режима сублимационной сушки ЛЛФ борхлоринапроводили на основании сравнительного анализа двух способов лиофилизации – с«медленным» (1) и «быстрым» замораживанием (2) (рис. 5).14Рисунок 5. График сублимационной сушки ЛЛФ борхлорина: 1. режим лиофилизации с«медленным» замораживанием, 2.
режим лиофилизации с «быстрым» замораживаниемКаждый предложенный режим лиофилизации оценивали по следующимпоказателям качества лиофилизата: внешний вид, регидратируемость, размер везикулпосле лиофилизации и ЭВ борхлорина (табл. 5).Таблица 5Сравнение лиофилизатов, полученных при различных режимах сублимационной сушкиРежимлиофилизацииВнешний видлиофилизатас «медленным»замораживаниемс «быстрым»замораживаниемСухая пористаямасса зеленогоцветаРегидратируемость,+/-Размер везикул, нмдопослелиофилизациилиофилизацииЭВ, %+180±8170±797,0±1,0+178±10172±897,0±1,0В ходе анализа полученных данных установлено, что способ замораживания невлияет на показатели качества конечного продукта и оба режима позволяют получитьравноценные образцы ЛЛФ-лио борхлорина.На основании вышеизложенного сделан вывод о возможности использованиядля получения ЛЛФ-лио борхлорина как режима лиофилизации с «медленным»замораживанием, так и режима с «быстрой» стадией замораживания.
Но посколькурежим 2 требует меньших затрат времени и соответственно электрической энергии,именно данный режим предложен для получения ЛФ борхлорина.2. Разработка методик контроля качества ЛЛФ и ЛЛФ-лио борхлорина2.1. Разработка методики ТСХ для качественного анализа ЛЛФ и ЛЛФ-лиоборхлорина2.1.1. Разработка методики ТСХ-анализа борхлорина и липидных компонентов1) Методика.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
