Автореферат (1141400), страница 2
Текст из файла (страница 2)
на межлабораторнойнаучной конференции НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» МинздраваРоссии.Личный вклад автора6Автор принимал непосредственное участие в постановке целей и задачнастоящего исследования, их экспериментальной реализации, анализе и обобщенииданных, изложении полученных результатов в виде научных публикаций. В работах,выполненных в соавторстве, автором проведена аналитическая и статистическаяобработка, научное обоснование и обобщение полученных результатов.
Авторомлично проанализирована научная литература по данной теме, выбран состав иразработана технология получения ЛФ борхлорина, предложены методикикачественного и количественного анализа разработанного препарата, а такжесоставлен проект НД на препарат «Борхлорин липосомальный, лиофилизат дляприготовления дисперсии для инъекций 1,0 мг».Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической наукиДиссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательскихработ НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.
Блохина» Минздрава России по темам«Наноструктурированные лекарственные формы гидрофобных субстанций» (20092013 гг.) и «Инъекционные лекарственные формы гидрофобных субстанций» (20132017 гг.), а также в рамках Федеральной целевой программы «Развитиефармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации напериод до 2020 года и дальнейшую перспективу» по теме «Доклиническиеисследования мембраноактивного фотосенсибилизатора на основе борированногохлорина е6 для терапии опухолей».Основные положения, выносимые на защиту:1.Состав ЛЛФ борхлорина.2.Технология получения ЛЛФ-лио борхлорина.3.Методики химико-фармацевтического анализа ЛЛФ и ЛЛФ-лиоборхлорина: качественный хроматографический анализ компонентов ЛФ иколичественное спектрофотометрическое определение борхлорина в ЛФ.4.Результаты контроля качества экспериментальныхборхлорина и изучения их стабильности в процессе хранения.серийЛЛФ-лиоСоответствие диссертации паспорту научной специальностиНаучные положения диссертации соответствуют формуле специальности14.04.01 – технология получения лекарств.
Результаты проведенного исследованиясоответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 1, 3 и 4паспорта специальности технология получения лекарств.ПубликацииПо материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, из которых 4являются статьями в журналах, включенных в перечень ведущих периодическихизданий ВАК РФ.7Структура и объем диссертацииСтруктура диссертационной работы включает введение, обзор литературы,описание материалов и методов исследований, три главы собственных исследований,общее заключение, общие выводы, список литературы и приложения.
Объем работысоставляет 193 листа машинописного текста и содержит 50 рисунков, 29 таблиц.Список литературы состоит из 180 источников, в том числе 54 – на иностранномязыке.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованийВ исследованиях использовалась субстанция борхлорина, структурная формулакоторого отражена на рис. 1, синтезированная в Институте элементоорганическихсоединений им. А.Н.
Несмеянова РАН (г. Москва).Рисунок 1. Структурная формула борхлоринаПри проведении технологических и химико-фармацевтических исследованийЛЛФ и ЛЛФ-лио борхлорина использовали химические субстанции и реактивы,которые соответствовали требованиям нормативной документации (ГОСТов, ТУ,фармакопейных статей ГФ XIII, Ph Eur 7.0, USP30-NF25).1. Получение многослойных липосом (МСЛ) борхлоринаЛипосомы борхлорина получали методом гидратации липидной пленки вмодификации для гидрофобных субстанций. Ингредиенты липосомального бислоя –яичный фосфатидилхолин (ФХ, Е РС S Lipoid, Германия), холестерин (Хол, AvantiPolarLipids,Inc.,США)иполиэтиленгликоль-2000дистеароилфосфатидилэтаноламин (ПЭГ-ДГФА, Lipoid, Германия) растворяли вхлороформе.
К субстанции борхлорина прибавляли хлороформ и помещали в УЗванну «Transsonic 310» на 5-10 мин для ускорения процесса растворения. Полученные8хлороформные растворы смешивали, фильтровали через нейлоновый мембранныйфильтр «Pall» с размером пор 0,22 мкм и переносили в круглодонную колбувместимостью 2 л. Органический растворитель отгоняли на роторном испарителе«BÜCHI Rotavapor R-200» при температуре 37±1°С под вакуумом (-0,8 бар) сполучением полупрозрачной липидной пленки, которую досушивали под вакуумом(-0,9 бар) в течение 50 мин.
Пленку гидратировали водой для инъекций собразованием дисперсии МСЛ борхлорина.2. Получение однослойных липосом (ОСЛ) борхлоринаДисперсию МСЛ борхлорина фильтровали через нейлоновые мембранныефильтры «Pall» N66 с диаметром пор 1,2 и 0,45 мкм на экструдере LipexTM. Дляполучения ОСЛ борхлорина использованы следующие методы:1) Экструзия. Профильтрованную дисперсию МСЛ борхлорина пропускали черезполикарбонатные мембранные фильтры «Nuclepore» с размером пор 0,2 мкм инейлоновые мембранные фильтры «Pall» с размером пор 0,22 мкм с использованиемэкструдера LipexTM под давлением 0,9-1,0 МПа.2) УЗ-обработка.
Профильтрованную дисперсию МСЛ борхлорина в объеме 30 млизмельчали на УЗ-ванне «Transsonic 310» с частотой 20 кГц в течение 15-60 мин.3) Гомогенизация. Профильтрованную дисперсию МСЛ борхлорина в объеме 60 млизмельчали на гомогенизаторе Microfluidizer M-110S под давлением 40 psig (280 кПа)в течение 1-5 мин.3. Стерилизующая фильтрация и лиофилизация ЛЛФ борхлоринаВ дисперсию ОСЛ борхлорина вводили необходимый объем стерильногораствора криопротектора определенной концентрации, перемешивали и проводилифильтрацию через нейлоновый мембранный фильтр «Pall» с размером пор 0,22 мкм.Полученную стерильную липосомальную дисперсию борхлорина разливали вофлаконы по 4 мл и лиофилизировали в камере сублимационной сушки «EdwardsMinifast DO.2».4. Методы анализа ЛЛФ и ЛЛФ-лио борхлорина4.1.
Качественный анализ компонентов ЛЛФ и ЛЛФ-лио борхлоринаДля установления подлинности компонентов разработанной ЛФ борхлоринаприменяли метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) с использованием пластинок«Sorbfil» размером 150×100 мм.4.2. Количественное определение борхлоринаКоличественноесодержаниеборхлоринаопределялиметодомспектрофотометрии с использованием стандартного образца (СО) при длине волны(662±2) нм на спектрофотометре Cary 100. Оптическую плотность спиртовыхрастворов липосомального борхлорина и СО измеряли относительно спирта 95%.94.3.
Определение эффективности включения (ЭВ) борхлорина в липосомыБорхлорин является гидрофобным веществом и включается непосредственно влипидный бислой. Отделение не включенного в липосомы вещества проводили путемфильтрации через нейлоновый мембранный фильтр «Pall» с диаметром пор 0,22 мкм.ЭВ определяли как отношение концентрации борхлорина в липосомальной дисперсиипосле фильтрации к концентрации борхлорина в липосомальной дисперсии послеполучения, выраженное в процентах.4.4. Определение размера липосом борхлоринаНа всех стадиях получения липосом борхлорина анализ среднего диаметравезикулпроводилиметодомдинамическогосветорассеяниясприменениемфотонного корреляционного анализатора Submicron Particle Sizer NICOMP 380. Дляэтого автоматической пипеткой отмеривали 100 мкл исследуемого образцасвежеприготовленных липосом или ЛЛФ-лио борхлорина после регидратации водой(спустя 10 мин после регидратации), помещали в мерную колбу вместимостью 100 мли доводили водой до метки.
Разведенный образец переносили в стеклянную кювету,которую помещали в ячейку анализатора и проводили измерение.4.5. Определение рН липосомальной дисперсии борхлоринаОпределение рН осуществляли методом потенциометрии с использованием рНметра HANNA рН 211. В липосомальной дисперсии значение рН измеряли, неразбавляя. Для определения значения рН лиофилизата к нему добавляли 10 мл воды,встряхивали до получения однородной липосомальной дисперсии и измерялизначение.Результаты собственных исследований1. Разработка состава и технологии получения ЛЛФ-лио борхлорина1.1.
Разработка состава ЛЛФ борхлоринаВыбор компонентов для получения стерически стабилизированной ЛЛФборхлорина основан на их функциональности. В качестве основного компонента,формирующего липосомальную мембрану, применяли натуральный фосфолипид –яичный ФХ, в связи с его биосовместимостью и приемлемыми физико-химическимисвойствами.
Для придания бислою необходимого уровня жесткости и механическойустойчивости в состав ЛФ вводили Хол. Для стерической стабилизации липосом сборхлорином добавляли фосфатидилэтаноламин, конъюгированный с гидрофильнымполимером – ПЭГ. В ходе исследования получали и исследовали экспериментальныемодели ЛЛФ борхлорина с различными молярными соотношениями компонентовпрописи. Каждый модельный состав оценивали по показателям: уровень включенияборхлорина в липосомы, средний размер везикул и их устойчивость при хранении,значение рН и внешний вид липосомальной дисперсии, а также технологическим10параметрам – продолжительность гидратации липидной пленки и экструзиидисперсии. Определяющими критериями при выборе состава являлись данные по ЭВи размеру везикул после экструзии.В результате анализа полученных данных (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
