Автореферат (1141394), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Н.Н. Блохина»Минздрава России внедрены проект НД на «ЛХС-1208, лиофилизат дляприготовления раствора для инъекций 9 мг» и лабораторный регламент напроизводство готовой ЛФ.СоответствиедиссертациипаспортунаучнойспециальностиНаучныеположения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.01 –6технологияполучениялекарств.Результатыпроведенногоисследованиясоответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 1, 3 и 4паспорта специальности технология получения лекарств.Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки.Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работНИИ ЭДиТО ФГБУ «НМИЦ онкологии им.
Н.Н. Блохина» Минздрава России потеме«Разработкалекарственныхформпротивоопухолевыхпрепаратовсорганизацией лабораторного производства» (2014–2018 гг.) Гос. рег. 012013713444,шифр 245, (B/C, I/II, 1), а также в рамках Государственного контракта№13411.1008799.13.20от24.06.13г.«Доклиническиеисследованияинновационного лекарственного средства на основе производного индолокарбазоладля лечения онкологических заболеваний».Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 136 страницахмашинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описанияматериалов и методов исследований, трех глав собственных исследований, общегозаключения,общихвыводов,спискалитературыиприложений.Библиографический указатель содержит 132 наименования (из них 47 – наиностранном языке).
Приведено 18 рисунков, 24 таблицы.Публикации. Основное содержание, результаты работы и выводы отражены в 17научных публикациях, из них - 8 в журналах, рекомендованных ВАК РФ и 1 патентна изобретение РФ.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованийОбъектыисследования:производногоВисследованияхиндолокарбазолаЛХС-1208использовалась–субстанция6-амино-12-(1-α-L-арабинопиранозил)индоло[2,3a]-пирроло[3,4с]карбазол-5,7-дион (рис. 1), которыйне растворим в воде, мало растворим в спирте 95% и ацетоне,растворим вдиметилсульфоксиде (ДМСО) и диметилформамиде (ДМФА).При проведении технологических и химико-фармацевтических исследованийИЛФ-лио ЛХС-1208 использовали химические субстанции и реактивы, которыесоответствовали требованиям НД (ГОСТов, ТУ, фармакопейных статей ГФ XIII, PhEur, USP30-NF25).7Рис.
1. Общая формула производного индолокарбазола ЛХС-1208,где Y – NH2, X1 = X2 – H, Z – H; Gly – арабинозаМетоды исследований:1. Метод получения ИЛФ ЛХС-1208К 2,97 г субстанции ЛХС-1208 добавляют 50 мл ДМСО, перемешивают дополучения прозрачного оранжевого раствора (раствор А). Отдельно готовятраствор Kollidon 17 PF в воде для инъекций: 192 г субстанции Kollidon 17 PFрастворяют при перемешивании в 720 мл воды для инъекций до полученияпрозрачного слегка желтоватого раствора (раствор Б). Затем в раствор Б, не убираямешалки, приливают по частям раствор А.2.
Стерилизация и лиофилизация ИЛФ ЛХС-1208С целью стерилизации полученный раствор ЛХС-1208 фильтруют черезполиэфирсульфоновые фильтры (ПЭС-фильтры), имеющие размер пор 0,22 мкм.Стерильный раствор дозируют по 3 мл во флаконы и лиофилизуют в камересублимационной сушки.3. Методы анализа ИЛФ-лио ЛХС-12083.1. Качественный хроматографический анализ ИЛФ-лио ЛХС-1208Для установления подлинности компонентов разработанной ИЛФ-лио ЛХС1208применяютметодметодтонкослойнойхроматографии(ТСХ)сиспользованием пластинок «Sorbfil» размером 150×100 мм и две системырастворителей: бензол/спирт 95% (1:1) – для обнаружения ЛХС-1208 (Rf=0,66),спирт 95% / 25% аммиак (3:2) – для обнаружения Kollidon 17 PF (Rf=0,69).3.2.
Количественный спектрофотометрический анализ ЛХС-1208 в ИЛФ и ИЛФлиоКоличественноесодержаниепрепаратаопределяютметодомспектрофотометрии с использованием стандартного образца (СО) при длине волны320±2 нм на спектрофотометре Cary 100. Оптическую плотность растворов ИЛФ8лио ЛХС-1208 и СО измеряют относительно ДМФА.3.3. Определение рН ИЛФ-лио ЛХС-1208Определение рН осуществляют методом потенциометрии с использованиемрН-метра. Для определения значения рН лиофилизата к нему добавляют 20 млводы, перемешивают до получения однородного гомогенного раствора и измеряютзначение рН. Предварительно измеряют значение рН воды.
Измерения проводят винтервале температур от 20 до 25°С.Результаты собственных исследований1. Разработка состава и технологии получения ИЛФ ЛХС-12081.1. Разработка состава ИЛФ ЛХС-12081.1.1. Определение концентрации ЛХС-1208 в ДМСОСубстанция ЛХС-1208 нерастворима в воде и большинстве органическихрастворителей, но хорошо растворима в ДМСО.
Для получения модельных ЛФиспользовали минимально возможную концентрацию ДМСО (5%), исходя из того,что для биологического исследования (внутривенное введение) концентрациясубстанции ЛХС-1208 в растворе должна составлять не менее 2 мг/мл.1.1.2. Выбор состава модельной ЛФ ЛХС-1208 для внутривенного введенияПодобраны составы модельных ЛФ ЛХС-1208 с использованием такихсолюбилизаторов как Cremophor ELP – состав 1, Kolliphor HS15 – состав 2, Kollidon17PF – состав 3, концентрация ЛХС-1208 – 3 мг/мл, которые обеспечиваютконцентрацию действующего вещества (ДВ) на уровне 0,2-0,3% от состава ЛФ, истабильны в растворе в течение 1 суток (табл.
1). Однако при исследованиисостава, содержащего Kolliphor HS15, на интактных мышах выявлена высокаятоксичность данного солюбилизатора (мыши погибли уже при введенииоднократной внутривенной дозы 20 мг/кг), что заставило отказаться от егоприменения.1.1.3. Оценка влияния стерилизующей фильтрации на содержание ЛХС-1208 вмоделях ЛФОценивали влияние процесса стерилизующей фильтрации с использованиемПЭС-фильтров и нейлоновых (Н) фильтров на содержание ЛХС-1208 в растворе.Фильтрация растворов модельных ЛФ через Н-мембраны привела к снижениюконцентрации ЛХС-1208 в обеих ЛФ более чем на 10%. Потери ДВ при9фильтрации раствора ЛХС-1208 через ПЭС-фильтры не превышают 1%.Таблица 1Модельные составы ЛФ ЛХС-1208 с солюбилизаторами№п/п1.2.3.Состав модельной ЛФ(Вода для инъекций до 10 мл)в мгМассовоесоотношениеЛХС-1208 /солюбилизаторв%ЛХС-120825ДМСО550Cremophor ELP 2000ЛХС-12080,25ДМСО5,00Cremophor ELP 20,001/80ЛХС-1208ДМСОKolliphor HS15205502500ЛХС-12080,20ДМСО5,00Kolliphor HS1525,001/125ЛХС-1208ДМСОKollidon 17PF305502000ЛХС-1208ДМСОKollidon 17PF1/670,305,0020,00Внешнийвид водногорастворапрозрачныйрастворжелтогоцветапрозрачныйрастворжелтогоцветапрозрачныйоранжевыйрастворЗначениерНводногораствора3,87,33,91.1.4.
Изучение стабильности моделей ЛФ ЛХС-1208 в процессе храненияСтабильность моделей ЛФ, содержащих в качестве солюбилизатораCremophor ELP и Kollidon 17PF, исследовали во времени при хранении вхолодильнике (температура (4±2)ºС) в течение 1 суток. Оценку стабильностипроводили по параметрам: внешний вид раствора, значение рН, содержание ЛХС1208 в % от свежеприготовленного. ЛФ, содержащая в своем составе Kollidon17PF, стабильна по указанным выше параметрам в течение 1 суток. ЛФ,содержащая в качестве солюбилизатора Cremophor ELP, сохраняла надлежащийвнешний вид и значение рН, но концентрация ДВ через 1 сутки снижалась на 1%.На основании этого была выбрана ЛФ, содержащая в своем составе Kollidon 17PF.1.1.5. Оценка качества раствора ЛХС-1208 в процессе храненияОценено изменение качества раствора ЛХС-1208 в процессе хранения втечение 4 месяцев – внешний вид и значение рН остаются неизменными, асодержание ДВ снижается на 4% от первоначального.
Этот факт обуславливаетнеобходимость применения лиофилизации как высокотехнологичного методастабилизации и нецелесообразность дальнейшего хранения раствора ЛХС-1208.1.2. Разработка технологии лиофилизации ИЛФ ЛХС-12081.2.1. Исследования по разработке методики лиофилизации модельной ЛФЛХС-1208 с Kollidon 17PFОптимальный режим лиофилизации концентрата ЛХС-1208 с Kollidon 17PF10выбирали эмпирически после проведения ряда экспериментов в разных режимах насублимационной сушке Minifast 10 и последующего физико-химического контроляготовогопродуктанаоснованиипроведенныхисследований.Напродолжительность сублимационной сушки оказывает влияние толщина слояисходного раствора, а также время и температура досушивания препарата.
Послесублимации модельной ЛФ ЛХС-1208 часть флаконов с препаратом былаотбракована в связи с тем, что часть лиофилизата подтаяла.ДляпроведениясублимационнойсушкиисследованийпоЛФиспользовалиЛХС-1208усовершенствованиюобъемырежиманаполненияфлаконов: 2, 3, 4, 5, 6 мл и различные режимы лиофилизации:1) с предварительным длительным (12 часов) замораживанием раствораЛХС-1208 в низкотемпературной камере при температуре -45С и установкойфлаконов на полки сублимационной сушки, предварительно охлажденных втечение 1 часа при температуре -47С (режим 1);2) без предварительного замораживания в низкотемпературной камере, сзамораживанием при температуре -45С на полках сублимационной сушки,предварительно охлажденных в течение 1 часа при температуре -47С (режим 2);3) без предварительного замораживания в низкотемпературной камере, сзамораживанием на полках сублимационной сушки при температуре -45С без ихпредварительного охлаждения (режим 3).Оценивали эффективность предложенных режимов по уровню бракованнойпродукции (число подтаявших флаконов по отношению к общему числувысушенных флаконов), который определяли визуально (рис.
2). В результатесерии экспериментов выбран оптимальный температурный режим лиофилизации,нетребующийпредварительногозамораживанияраствораЛХС-1208ипредварительного охлаждения полок сублимационной сушки (режим 3), иопределен наиболее приемлемый объем заполнения флаконов – составивший 3 мл.Данный режим был отработан на сублимационной сушке Minifast 10 (рис. 3).Проведение лиофилизации согласно выбранному режиму на данной установкеобеспечивало получение качественного лиофилизата, представляющего собойсухую пористую массу желтого цвета, из раствора, дозированного по 3 мл.11Рисунок 2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
