Автореферат (1141383), страница 3
Текст из файла (страница 3)
545(ОФС.1.21.0008.15)Растворы, приготовленныедля теста «Прозрачность»,бесцветныеБесцветный или не болееGY6 (5 % раствор в этаноле)Раствор, приготовленный для теста«Прозрачность», должен быть бесцветнымТемпература плавления, 0СГФ XIII, Том 1, стр. 560(ОФС.1.2.1.0011.15)Удельное вращение, оГФ XIII, Том 1, стр. 605(ОФС.1.2.1.0018.15)Вода, % ГФ XIII, Том 1, стр.
719(ОФС.1.2.3.0002.15)Тяжелые металлы ГФ XIII, Том 1,стр. 708 (ОФС.1.2.2.2.0010. 15)Сульфатная зола, %ГФ XIII, Том 1, стр. 714(ОФС.1.2.2.2.0014.15)177-178177,5178,5177,5179.0От 177,0 до 182,0От 177 до 179 с разложением-9,3-9,0-10,0От -8,5 до -10,5От -8,5 до -10,50,050,100,09Показатель отсутствуетНе более 0,20,0010,0450,0010,0670,001Не более 0,001%Не более 0,10,04412Не более 0,001%Не более 0,1Таблица 3Основные спектральные характеристики растворов стандартного образцадилепта в этаноле (95%)Длина волны, нмОптическаяплотностьМолярныйпоказательпоглощенияКонцентрациярастворовМаксимумы207±0,20,430159020,01%225±0,20,30911427278±0,20,435163900,001%0,01%Минимумы218±0,20,27010173249±0,20,0501883Таблица 4Основные спектральные характеристики растворов стандартного образца ГБ115 в этаноле (95%)Длина волны, нмОптическаяплотностьМолярныйпоказательпоглощенияМаксимумы504957934204Минимумы45161619Концентрациярастворов290±0,2282±0,2219±0,20,5020,5670,4180,004%287±0,2245±0,20,4490,1610,0004%0,004%На рисунках № 5 и № 6 представлены ИК-спектры стандартных образцовДилепта и ГБ-115.
Подготовку проб осуществляли методом прессованияобразца с калия бромидом. Представленные типичные ИК-спектры имеютхарактеристические полосы поглощения, специфичные для идентификации.Данные представлены в таблицах № 5 и № 6.Таблица 5Характеристические полосы поглощения ИК-спектра стандартного образцадилептаДиапазон, см-1Отнесение3312валентные колебания ОН- и NH-групп, связанныеводородной связью1735валентное колебание С=О (алифатич. сложные эфиры)1660;1640валентное колебание С=О (амид I); валентноеколебание >N-C=O1594,1519скелетные колебания ароматических углерод-углеродныхсвязей822деформационные колебания СН ароматического кольца(пара-замещение)Таблица 6Характеристические полосы поглощения ИК-спектра стандартного образцаГБ-115Диапазон, см-1Отнесение3402валентные колебания NH2-группы3360, 3197связанные валентные колебания NH-групп2927-2852валентные колебания СН (as, s)1640, 1619валентное колебание С=О (амид I)1505 1509валентные колебания ароматических циклов1240, 1201валентные колебания НN-C=O738 739деформационные колебания СН ароматического кольца(орто-замещение)697деформационные внеплоскостные колебания NНC=OРисунок 5.
Типичный ИК-спектр стандартного образца Дилепта14Рисунок 6. Типичный ИК-спектр стандартного образца ГБ-115Необходимым в подтверждении подлинности стандартных образцовявляется получение спектров 13С ЯМР, в отличие от подтвержденияподлинности субстанции. В ходе теоретических расчетов, обработки иинтерпретации спектров Дилепта и ГБ-115 использовали компьютерноепрограммное обеспечение ACD Labs [ACD Labs 10 (сборка 18036, версия17.01.2008). Навеску стандартных образцов, составляющую 50 мг, растворяли в0,6 мл ДМСО-d6 помещали в стеклянную ампулу для ЯМР-спектроскопии.
Нарисунках № 7 и № 8 представлены расчетные и полученные спектрыстандартных образцов Дилепта и ГБ-115.Рисунок 7. Спектр ЯМР 13С Дилепта в DMSO-d615Рисунок 8. Спектр ЯМР 13С ГБ-115 в DMSO-d6В раздел «Подлинность» фармакопейных статей включены три методики:УФ-спектрофотометрии(характеристикамаксимумовиминимумовпоглощения, а также расчет молярного показателя поглощения), ИКспектрометрии и ЯМР-спекроскопии по соответствию прилагаемым рисункамспектров.В связи с высокими требованиями, предъявляемыми к фармакопейнымстандартным образцам, а также низкой чувствительностью методики ТСХ,метод ВЭЖХ выбран для анализа чистоты стандартных образцов Дилепта и ГБ115.
Посторонние примеси в стандартных образцах Дилепта и ГБ-115определяли по ранее опубликованным методикам. (Гусев М.В., ГрушевскаяЛ.Н., Авдюнина Н.И. и др, Пятин Б.М., Прокофьева В.И./ Вопросы биол., мед.и фарм. хим.2009. Т. 7. № 2. С. 38-41., Клумова В.С., Грушевская Л.Н.,Авдюнина Н.И. и др, Пятин Б.М., Сергеева М.С., Гаевая Л.М., Дуденкова М.Е./Химико-фармацевтический журнал. Хим.-фарм. журн. 2011. Т.45. № 10. С.5356.На рисунке № 9 представлена хроматограмма методом ВЭЖХ модельнойсмеси стандартного образца Дилепта и возможных примесей, а на рисунке № 10– ВЭЖХ-хроматограмма стандартного образца Дилепта.16.Рисунок 9.
Хроматограмма метода ВЭЖХ модельной смеси Дилепта ивозможных посторонних примесей в концентрации 0,1% 1 – Метиловый эфир Lтирозина, 2- N-капроил-L-пролил-L-тирозин, 3 -N-капроил-L-Пролин, 4 - ДилептРисунок 10. Типичная хроматограмма методом ВЭЖХ стандартного образцаДилептаНа рисунке № 11 представлена хроматограмма модельной смесистандартного образца ГБ-115 и возможных посторонних примесей, а на рисунке№ 12 – типичная хроматограмма стандартного образца ГБ-115, полученныеметодом ВЭЖХ.17Рисунок 11. Хроматограмма модельной смеси ГБ-115 и возможныхпосторонних примесей в концентрации 0,1%, полученная методом ВЭЖХ1 – этиловый эфир L-триптофана хлорогидрат, 2 - N-(6-фенилгексаноил)глицин,3-ГБ-115, 4- 6-фенилгексановая кислота, 5 – ГБ-111Рисунок 12.
Типичная хроматограмма метода ВЭЖХ стандартногообразца ГБ-115Согласно требованиям нормативной документации на субстанции нормасодержания посторонних примесей составляет – не более 1,0% суммы всехпримесей. Проведенные исследования продемонстрировали снижениесодержания посторонних примесей в стандартных образцах послеперекристаллизации в сравнении с фармакопейными субстанциями.
При анализе3 образцов Дилепта и ГБ-115 во всех пробах содержание посторонних примесейне превышает чувствительности методики. Таким образом, может быть сниженанорма содержания посторонних примесей в стандартных образцах Дилепта и ГБ115 – суммарное содержание всех единичных примесей не более 0,1 %.Согласно требованиям ведущих Фармакопей, содержание остаточныхорганических растворителей в стандартных образцах должно контролироваться спомощью метода газовой хроматографии, так как стандартные образцыполученыпутемперекристаллизациисубстанцийизорганическихрастворителей. Разработана методика определения остаточных органическихрастворителей с применением статического парофазного метода ГХ- HS нагазовом хроматографе, снабженным HS-устройством для отбора проб (дозаторомравновесного пара).
Парофазный метод выбран исходя из особенностей физико18химических свойств исследуемых лекарственных средств. В таблицах № 3 и № 4представлены условия проведения анализа.Таблица № 3Условия проведения хроматографического анализаХроматографГазовый хроматограф Carlo Erba 6000 Vega Series 2 GC(фирмы «Carlo Erba Strumentazione», Италия).КолонкаКапиллярная колонка DB-624 длиной 60 м, внутреннимдиаметром 0,53 мм и фазой, состоящей из 6% цианпропилфенила и 94%-диметилполисилоксана (толщинапленки 3 мкм).ДетекторПламенно-ионизационный детектор (ПИД).Температура детектора230 оСТемпература инжектора210оСТемпература термостатаколонкиврежимепрограммированияНачальная температура 50оС в течение 4 мин., затемповышение температуры со скоростью 15оС/мин. до 200оС иудерживается в течение 5 мин.Газ-носитель (азот)Скорость потока 4,9 мл/мин.Сплит-системаДеление потока 1:5ВодородСкорость потока - 30 мл/мин.ВоздухСкорость потока - 300 мл/мин.Таблица № 4Параметры статического парофазного пробоотборника.85 оСТемпература head space виалыВремя термостатирования (уравновешивания) head space 40 мин.виалыТемпература линии переноса135 оСHS-давление (давление наддува виалы)0,7 МпаВремя нагнетания (подачи под давлением)5 мин.Время отбора пробы10 секОбъём вводимой дозы равновесного пара1 ,0 мл19Для оценки содержания остаточных органических растворителейпредложен метод внутреннего стандарта.
В фармакопейных стандартныхобразцах Дилепта определяли этилацетат, а в стандартных образцах ГБ-115 содержание остаточного этанола. Внутренним стандартом для этилацетата былвыбран н-пропиловый спирт, а внутренним стандартом для этанола был выбранбутилацетат, раствором сравнения – диметилсульфоксид в обеих методиках. Нарисунках № 13 и 14 представлены типичные ГХ-хроматограммы стандартныхобразцов Дилепта и ГБ-115.Рисунок 13.
Типичная ГХ-хроматограмма Рисунок 14. Типичная ГХ-хроматограммастандартного образца Дилептастандартного образца ГБ-115(1-Этилацетат, 2- н-пропанол)(1-этанол, 2- бутилацетат, 3 –диметилсульфоксид)В таблице № 5 представлены результаты определения содержания остаточныхорганических растворителей в стандартных образцах Дилепта и ГБ-115.Таблица № 5Результаты определения остаточных органических растворителейДилепт(Этилацетат)ГБ-115(Этанол)Содержание остаточных растворителей, %Серия IСерия IIСерия III0,151 ± 0,0110,159 ± 0,0130,110 ± 0,0140,052 ± 0,0140,078 ± 0,011200,062 ± 0,013РегламентированнаянормаНе более 0,2%Не более 0,1%Нами проведена валидация разработанных методик определения«Остаточных органических растворителей» по следующим параметрам:селективность,линейность,правильность,прецизионность,пределколичественного определения, устойчивость (робастность).