Автореферат (1141373), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Причинаразличия в УФ-спектрах Ройлевина, горминона и спиртового экстракта корней шалфеязаключалась в наличии в экстракте паразамещенного фенола с максимумом поглощения278-279 нм. В ходе технологического процесса получения Ройлевина это соединениеотбрасывается с липидной фракцией. Поэтому метод анализа содержания горминона всырье, шроте и в ходе постадийного контроля технологического процесса разработан поаналогии с технологией получения Ройлевина.
Разработка методики анализа спиртовогоэкстракта сырья. К 10 мл раствора спиртового извлечения прибавляют 100 млдистиллированной воды и упаривают на роторном испарителе до объема 50-60 мл,подкисляют 4 мл 5% кислотой хлористоводородной, переносят в плоскодонную колбуобъемом 300 мл и добавляют 100 мл хлороформа. Помещают колбу на качалку на 30 минут,переносят в делительную воронку объемом 250 мл, взбалтывают 5-6 раз и оставляют дополного разделения слоев.
Хлороформное извлечение помещают в плоскодонную колбуобъемом 300 мл, прибавляют 75 мл 1% раствора натрия гидроксида, смесь помещают накачалку на 30 минут, переносят в делительную воронку объемом 250 мл, взбалтывают 5-6раз и оставляют до полного разделения слоев. Подщелоченный раствор переносят вхимический стакан и оставляют под тягой до полного удаления паров хлороформа,периодически перемешивая. Извлечение подкисляют 5% кислотой хлористоводородной дозначения рН=2 и оставляют на 10 минут до получения хлопьевидного осадка.
Полученный22осадок отфильтровывают на воронке через обеззоленный бумажный фильтр, промывают 40мл дистиллированной воды, подсушивают, обрабатывают 40 мл 96% спирта, собираяраствор в мерную колбу вместимостью 50 мл и объем доводят до метки этим же спиртом.Оптическую плотность раствора измеряют на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя10 мм при длине волны 273 нм.
В качестве раствора сравнения используют спирт этиловый96%.Содержание горминона в процентах рассчитывают по формуле:Х =D ⋅ 50 ⋅ 25%5 ⋅ 10 ⋅ A11см, гдеD – оптическая плотность испытуемого раствора;1%А1см- удельный показатель поглощения горминона 395.7. ВалидацияВалидационная оценка для предложенной методики разрабатывалась по следующимпоказателям: специфичность, линейность, точность (прецизионность) и правильность.Специфичность определялась сопоставлением УФ-спектров СО горминона и испытуемогораствора Ройлевин. В обоих случаях λmax=273 нм. Линейность оценивалась для растворовгорминона в диапазоне 4,0-27,2 мкг/мл, коэффициент корреляции 0,9994.
Прецизионностьоценивалась по результатам 9 параллельных измерений. Правильность определяласьдобавлением раствора горминона с известной концентрацией к исследуемому растворуРойлевина. Сходимость результатов находилась в интервале 98,3-101,7%, что соответствуеттребованиям критерия приемлемости.На основе полученной субстанции Ройлевин с содержанием горминона не менее 35%была разработана фармацевтическая композиция антимикробного действия (гель 1%), Патентна изобретение №2596500.ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1.Установлены морфолого-анатомические характеристики подлинности сырья – корнейшалфея лекарственного. По данным микроскопического исследования ройлеанонылокализованы в клетках коры и сердцевинных лучах.2.Впервые из корней шалфея лекарственного в дополнение к ройлеанону, горминону иацетоксигорминону, выделены 7-оксоройлеанон, таксохинон и 6,7-дегидроройлеанон. Спомощью ВЭЖХ показана нативность всех ройлеанонов.
Отмечена связь между строениеммолекулы ройлеанонов и степенью их антимикробной активности.3.Разработана схема получения субстанции Ройлевин путем перевода суммыройлеанонов в горминон щелочной обработкой хлороформного экстракта, подтвержденная23стабильностью горминона в щелочной среде методом ЯМР-спектроскопии и отсутствиемконкурирующих реакций в процессе щелочного гидролиза ацетоксигорминона.4.В качестве сопутствующих горминону веществ в субстанции Ройлевин выделены иидентифицированы олеаноловая, урсоловая, впервые в корнях шалфея лекарственного –эускафиковая, 19-дезоксиэускафиковая, 2α, 21β, 22α–тригидроксиолеаноловая кислоты (новоесоединение). У тритерпеновых кислот также выявлена антимикробная активность.5.Разработаны методы установления подлинности Ройлевина.
Показатель качестваРойлевина – процентное содержание горминона – предложено определять методом прямойспектрофотометрии. Разработан способ получения СО горминона, определены числовыепоказатели параметров качества СО. Составлены и утверждены ТУ на СО горминона ТУ9369188-04868244-2015 от 15 октября 2015 года, проект НД на Ройлевин, лабораторный регламентна производство субстанции антимикробного действия «Ройлевин» ЛР 14868244-01-2016.Практические рекомендации Работа может и должна быть продолжена в направлениивнедрения Ройлевина в производство, т.к.
потребность в препаратах антимикробного действиярастительного происхождения в связи с резистентностью антибиотиков высока. Помимосуществующей сырьевой базы в Краснодарском крае, следует обратить внимание напоявившуюся возможность получения сырья с плантаций Крыма. По данным 70-х годовпрошлого века это сырье отличалось более высоким и стабильным содержанием ройлеанонов,чем выращенное в Краснодарском крае, где менее благоприятные климатические условия.Учитывая локализацию ройлеанонов в коре корня шалфея при очистке сырья от земли следуетконтролировать целостность коры.Перспектива дальнейшей разработки темы В связи с обнаружением словацкимиучеными (Мастеровá с соавт., 2004 г.) у ройлеанонов цитотоксического действия на клеткиопухоли кишечника и печени человека, согласующегося с данными российскихисследователей (Спиридонов с соавт., 2003 г), следует провести изучение Ройлевина в этомнаправлении.Список работ, опубликованных по теме диссертации:1.Савина, А.А.
Изучение химического состава корней шалфея лекарственного.Ройлеаноны / А.А. Савина, В.И. Шейченко, Т.А. Сокольская, М.М. Ильин, Т.В. Фатеева, О.Ф.Ласская, М.К. Булушева, И.А. Кирьянова, А.И. Громакова // Вопросы биологической,медицинской и фармацевтической химии. - 2015. - №4. – С. 3-6.2.Булушева, М.К.
Изучение химического состава корней шалфея лекарственного.Терпеноиды / М.К. Булушева, А.А. Савина, В.И. Шейченко, С.В. Горяинов, Т.А. Сокольская,24О.Ф. Ласская, Н.С. Тропина // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтическойхимии. - 2015. - №12. – С. 3-7.3.Булушева, М.К. Изучение химического состава корней шалфея лекарственного (Salviaofficinalis L.) / М.К. Булушева, А.А. Савина, О.Ф. Ласская // Молодые ученые и фармация XXIвека: сборник трудов третьей научно-практической конференции. – Москва, 2015. – С. 208-213.4.Булушева, М.К. Изучение химического состава корней шалфея лекарственного.Терпеноиды II.
2α, 21β, 22α-тригидроксиолеаноловая кислота / М.К. Булушева, А.А. Савина,В.И. Шейченко, С.В. Горяинов, О.Ф. Ласская, Н.С. Тропина // Вопросы биологической,медицинской и фармацевтической химии. - 2016. - №6. – С. 16-19.5.Патент на изобретение №2596500, МПК А61К36/537, А61Р31/04. Фармацевтическаякомпозиция антимикробного действия / Джавахян М.А., Давыдова А.В., Савина А.А.,Булушева М.К., Дул В.Н., Сайбель О.Л., Родичева Е.В., Малышева Н.А., Сокольская Т.А.,Громакова А.И., Джавахян Д.Р., Сидельникова Г.Ф., Боровкова М.В., Ляшенко П.Н.,патентообладатель:Федеральноегосударственноебюджетноенаучноеучреждение«Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматическихрастений» (ФГБНУ ВИЛАР).
- №2015130139. заявл. 22.07.2015, опубл. 10.09.2016, Бюл. №25.6.Булушева, М.К. Химические свойства, медико-биологические характеристики ираспространение ройлеанонов (обзор) / М.К. Булушева, А.А. Савина // Вопросыбиологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2017. – № 6. – С. 3-17.7.Булушева, М.К. Моделирование реакции щелочного гидролиза ацетилгорминона настадии жидкофазной экстракции получения субстанции антимикробного действия из корнейSalvia officinalis L. / М.К.
Булушева, В.И. Шейченко, А.А. Савина // Вопросы биологической,медицинской и фармацевтической химии. - 2017. – № 8. – С. 18-21..
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
