Автореферат (1141373), страница 2
Текст из файла (страница 2)
При выполнении работы были использованы фармакогностические, химические,инструментальные физико-химические и микробиологические методы исследования.ДостоверностьнаучныхположенийивыводовДостоверностьвыполненныхисследований подтверждается точностью регистрации данных в первичной документации,получением результатов с использованием современных методов анализа, а также статистическойобработкой полученных данных и сопоставлением с данными литературы.Апробация результатов исследования Основные положения работы доложены на III и IVнаучно-практической конференции с международным участием «Молодые ученые и фармацияXXI века» (г.
Москва, 2015, 2016); Международной научно-практической конференции«Биологические особенности лекарственных и ароматических растений и их роль в медицине (г.Москва, 2016). Апробация работы прошла 30 мая 2017 года на заседании Секции по разработке иисследованию биологически активных веществ и фитопрепаратов Ученого Совета ФГБНУВИЛАР.Личный вклад автора Автору принадлежит ведущая роль в определении темы, впостановке цели и задач исследования диссертационной работы, анализе и обобщенииполученных результатов.
Все экспериментальные работы выполнены лично автором. Автором7разработана следующая нормативная документация: проект НД на субстанцию антимикробногодействия, методики количественного определения горминона в сырье, промежуточных продуктахтехнологического процесса и готовой субстанции, ТУ на горминон СО. Вклад автора являетсяопределяющим на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментальнотеоретической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах ивнедрения их в практику.Внедрение результатов исследования Результаты, полученные диссертантом в процессеисследования, внедрены в учебный процесс для аспирантов ФГБНУ ВИЛАР (Акт внедрения от02.05.2017 г.), а также использованы отделом фармацевтической технологии ФГБНУ ВИЛАР дляразработки лекарственных форм антимикробного действия. Получен патент № 2596500«Фармацевтическая композиция антимикробного действия».
Дата регистрации 10 августа 2016года.Соответствие диссертации паспорту научной специальности Научные положения,изложенные в данной диссертационной работе, соответствуют паспорту специальности 14.04.02- фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведения исследования соответствуютпаспорту специальности конкретно пунктам 2,3,6.Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки Работавыполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ФГБНУВИЛАР с 2014 по 2017 год (№ государственной регистрации 0576-2014-0009).Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 143 страницахмашинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы, посвящённой методам иобъектам исследования, четырех глав экспериментальной части, списка литературы иприложений.
В диссертации содержатся 21 таблица, 39 рисунков. 3 схемы. Список литературывключает в себя 134 источника, из которых 78 на иностранных языках.Публикации Основное содержание диссертации опубликовано в 7 научных работах, из них5 статей в журналах, рекомендуемых ВАК Министерства образования и науки РФ, и 1 патент РФ.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫОбъекты и методы исследования Объектом исследования служили подземные органышалфея лекарственного Salvia officinalis L., сем.
Яснотковые (корни), культивируемого в районестаницы Васюринской, Краснодарского края после использования растений для заготовки листьев втечение нескольких вегетационных периодов. Корни предназначались для ликвидации передвозобновлением на данной площади новой плантации. Для изучения химического составаиспользовали корни 6-7 летнего возраста, собранные в ноябре 2012 г. и 3х летнего возраста,собранные в ноябре 2013 г. Для лабораторного регламента использовали корни 3х летнего возраста(2013 г.) с содержанием горминона 0,22%.8Измельчение сырья проводили на экспериментальном измельчителе растительногоматериала МИР-1. Номинальная частота вращения 3000 об/мин.
Производительность 40 кг/ч. Отборпроб и анализ растительного сырья производили по методике ГФ XIII, т.1, ОФС.1.10005.15 иразработанными нами методиками количественного определения ройлеанонов. Качественныйанализ (подлинность) осуществляли предложенным нами способом: 1) ройлеаноны – реакцияокрашивания раствора в фиолетово-сиреневый цвет при добавлении водного раствора аммиака илигидроксида натрия, данные 1Н ЯМР спектра, УФ-спектра и масс-спектра, ТСХ-, ВЭЖХхроматограммы, 2) тритерпеноиды – по положительному результату реакции Либермана-Бурхарда,Н ЯМР, масс- спектры.1Микроскопический анализ сырья. Анализ цельного сырья проводили согласно статье«Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительногосырья и лекарственных растительных препаратов» ГФ XIII, т.2, ОФС.1.5.3.0003.15 с помощьюбиологического микроскопа «Альтами БИО 2 LED» с цифровой насадкой фирмы ООО «Альтами»(Россия).
Фотографии были обработаны на компьютере в программе «Adobe Photoshop 7.0».Для экстракции БАВ, колоночной и тонкослойной хроматографии использовалирастворители и реактивы марки «ч» и «хч»:-вода очищенная (ФС 2.2.00.15);-спирт этиловый ректификованный (ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный изпищевого сырья);-хлороформ (ГОСТ 20015-88. Хлороформ);-кислота соляная (ГОСТ 3118-77.
Реактивы. Кислота соляная);-метанол-яд (ГОСТ 6995-77. Реактивы. Метанол-яд);-ангидрид уксусный (ГОСТ 5815-77. Реактивы. Ангидрид уксусный);-кислота серная (ГОСТ 4204-77. Реактивы. Кислота серная) ;-ванилин (ГОСТ 16599-71. Ванилин);-силикагель 40/100µ для хроматографии, Chemapol, Praha;-пластинки для тонкослойной хроматографии «Silufol UV 254» 20х20 см, 15х15 см, 6х15 см, Kavalier,Czechoslovakia.Приготовление реактивов, используемых в экспериментальной части осуществлялисогласно ГФ XIII, т.1, ОФС.1.3.001.15.Концентрирование извлечений и упаривание растворителей осуществляли в вакуумвыпарном ротационном испарителе IKA RV 10 (Германия).Тонкослойная хроматография (ТСХ).
ТСХ использовалась для предварительной оценкиэкстрактов, для оценки элюатов в ходе колоночной хроматографии, для оценки чистотыиндивидуальных веществ и для сравнения исследуемых веществ с аутентичными образцами,9выделенными и охарактеризованными ранее в ВИЛАР Романовой А.С. с сотр. (1972-73гг.).Хроматографирование проводили в герметически закрытых вертикальных стеклянных камерах.Исследуемые растворы наносили на хроматографические пластинки при помощи стеклянныхкапилляров и стеклянной пипетки.
Исследования проводили согласно ГФ XIII, т.1,ОФС.1.2.1.2.0003.15.Для тонкослойной хроматографии использовали систему растворителей: хлороформ 100%,хлороформ- метанол 8:2, 9:1, 95:5, хлороформ-метанол-вода 61:32:6. Проявление зон адсорбциипроводили просматривая пластинки UV-254 под ультрафиолетовой лампой SPECTROLINE modelENF-240C/FE, 230 volts, 50 HZ, 0,17 AMPS (254 нм и 365 нм), (США) и затем обрабатывая парамиаммиака(ройлеаноны).Наличиевеществнеройлеаноновогохарактера,вчастноститритерпеноидов, фиксировали проявлением пластинки 5% спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты с последующим нагреванием при температуре 100оС±2оС в течение 2-3минут с появлением темно-зеленого окрашивания зон адсорбции, а также окрашиванию зонадсорбции в светло-голубой цвет под действием реактива ванилин-серная кислота.ВЭЖХ-хроматограммы получены при следующих условиях: хроматограф Agilent 1100Series с диодной матрицей, колонка Halo C-18 (США), (150x4.6 мм, 2.7 мкм, элюент 1% ТЭА, 100%ацетонитрил, градиент от 5 % до 100 % ацетонитрила за 1 час).
Температура термостата колонки20оС, УФ 280 нм. Запись результатов проводится согласно ГФ XIII, т.1, ОФС.1.2.1.2.0005.15.Спектры 1Н ЯМР получены на спектрометре Gemini 200 Varian (Великобритания) с рабочейчастотой 200 МГц, растворители CDCl3, CD3OD, О-ТМС. Приготовление образца для записи 1НЯМР спектра: 5-6 мг ройлеанона и 10-12 мг тритерпеноида растворяли в соответствующем дейтерорастворителе.
Запись спектра осуществляли согласно ГФ XIII, т.1, ОФС.1.2.1.1.0007.15.УФ-спектры регистрировались на приборе CARY 100 SCAN (Австралия) с диапазономдлин волн от 200 до 800 нм. Растворитель - 96% этанол. Концентрация порядка 0,001%. Записьспектра производится согласно ГФ XIII, т.1, ОФС.1.2.1.1.0003.15.Масс-спектры получены на приборе JMS GCmate II (JEOL, Япония) в режиме прямоговвода.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
