Диссертация (1141334), страница 18
Текст из файла (страница 18)
Учитывая, чтонаиболееудовлетворительнымитехнологическимисвойствами,извсехисследованных гранулятов, обладал гранулят № 9, то все дальнейшиеисследования проводили с ним. Следовательно, исследуемые капсулы спрепаратом получили название «СЭРШК-9». Опыты проводились в начале летана 86 мышах-самцах массой 18-26 г, пробывших в карантине 14 дней. СЭРШКвводили внутрижелудочно, через зонд, предварительно растворив его в воде.Поскольку высокие дозы не удавалось растворить в объёме воды на одновведение (2 мл), из-за того, что образовывалась очень густой раствор, тодозировку разбивали на три части и вводили в три приёма с интервалом в 45минут.
Учёт гибели животных проводили в течение 2-х недель с моментавведения вещества. Первые сутки за животными наблюдали непрерывно.Экстракт вводили в возрастающих дозах по методу Кёрбера [9, 63] вследующих дозах: 15 г/кг, 21 г/кг, 27 г/кг, 33 г/кг, 36 г/кг, 42 г/кг.При введении низких доз у животных наблюдалось уменьшениедвигательной активности, снижалась реакция на прикосновение. С повышениемдозы у животных наблюдалось беспокойство, урежение дыхания, снижениетонуса тела и чередование передвижения и лежания. При введении больших дозу животных отмечалось наступление сна и быстрая смерть (в течение 24 часов смомента введения вещества).LD50 рассчитывали по методу Кербера:log(10)ED50= 0,5[log(10) D N + log(10) D N − 1− ∑ (log(10) Di+ 1− log(10) Di− 1)⋅ Li ]где,(6)127DN- наибольшая (последняя) из испытанных доз;DN− 1 -предшествующаяDNдоза;Di− 1- доза, предшествующая дозе с номером i;Di+ 1- доза, следующая заLiDi − 1;- отношение числа животных, у которых от введения дозы с номеромiнаступила положительная реакция, к общему числу животных, которымвведена эта доза.Результаты исследования острой токсичности представлены в таблице(табл.6.1).Статистическаяобработкарезультатовэкспериментапоисследованию острой токсичности экстракта по показателю смертностиэкспериментальныхживотныхпометодуКерберапоказала,чтоприоднократном внутрижелудочном введении белым беспородным мышам-самцамсухого экстракта СЭРШК, LD50 составляет 33,3 г/кг ± 0,18 г.Таблица 6.1 – Результаты определения LD50 препарата СЭРШК-9Наименование Дозы г/кгКоличество животныхпрепаратаВ группе, штСЭРШК-9ТакимLD50, г/кгВыжило, штПогибло, шт156602165127633336333661542606образом,былоустановлено,чтоСЭРШК-933,3±0,18являетсямалотоксичным лекарственным средством и по степени токсичности относитсяк 4 классу опасности (вещества малоопасные).6.2 Определение актопротекторного действияИзучение актопротекторного действия СЭРШК-9 осуществляли припомощи теста «повторное плавание», определяющего среднюю устойчивость кфизической нагрузке животного при плавании с грузом весом 7% от массы телаживотного.
Данный тест позволяет оценить способность животных выполнять128физическую нагрузку до отказа. А также оценить такие показатели, как:выносливость организма, физическая работоспособность, восстановлениепосле физической нагрузки до полного утомления (рассчитывался какпродолжительность повторного плавания,выраженнаяв процентах отпродолжительности первичного плавания). Он является довольно простым втехническом отношении, что позволяет широко применять его в лабораторныхисследованиях. Существенным недостатком данного метода является широкийразброс экспериментальных данных (до 30 %).
Для существенного сниженияколебаний разброса используются следующие методические рекомендации [79,136]:в плавательном бассейне использовалась только кипячёная вода, чтобыудалить из неё пузырьки воздуха;температура воды держалась на постоянном уровне и составляла 28 °С;масса груза отягощения составляла 7 % от массы животного;критерием завершения эксперимента являлся отказ животного отпродолжения выполнения нагрузки и окончательное погружение под воду.Эксперимент был проведён на 108 нелинейных мышах-самцах массой 19-26 г.Животные отбирались по результатам предварительного плавания, которыепопадали в интервал 13-19 минут.
Затем мыши были распределены случайнымобразом на пять групп:первая (контроль) – 24 животных, получавших воду очищенную;вторая (опыт) и третья (опыт)– 42 животных, получавших водный растворСЭРШК в дозах 1,8 г/кг и 3,6 г/кг;четвертая и пятая (препарат сравнения) – 40 животных, получавших водныйраствор деалкоголизированного экстракта родиолы розовой (Камелия) в дозах 0,5 г/кги 1,0 г/кг.Исследовали следующие показатели: время первичного плавания, времявторичногоплавания(продолжительностьпервичного плавания).ипоказательповторноговосстановленияплаваниявработоспособностипроцентах,относительно129Животных опытной группы делили на две подгруппы, которые в течение 3недель получали водный раствор СЭРШК в дозах 1,8 г/кг и 3,6 г/кг. Животныеконтрольной группы получали дистиллированную воду в эквивалентномколичестве.
Животных группы сравнения делили на две группы, которыеполучали водный раствор деалкоголизированного аптечного экстракта родиолырозовой в дозах 0,5 г/кг и 1,0 г/кг.В21-йденьэкспериментапроводилииспытаниянафизическуювыносливость. Мышам крепили груз весом 7% от массы тела мыши изаставляли плавать до полного утомления в сосуде с водой, позволяющем исвободно двигаться. Время плавания фиксировалось при помощи электронногосекундомера. За состояние полного утомления принимали полное погружениеживотного под воду и отказ от дальнейшей работы.
Животное извлекали,обсушивалиполотенцемипомещаливобогреваемуюклеткудлявосстановления. Через час снова проводили плавание до полного утомления.Результаты заносили в таблицу 6.2.ПрепаратСЭРШК-9достоверноувеличивалпродолжительностьповторного плавания мышей в дозе 1,8 г/кг. Введение препарата СЭРШК-9 вдозе 3,6 г/кг увеличивало работоспособность на 160 %.Таблица 6.2 - Влияние введения СЭРШК-9 на общую физическуювыносливость мышей по тесту продолжительности повторного плаванияИсследуемые Доза, г/кгЧислоПродолжительностьпрепаратынаблюденийпервого плавания в повторного плаванияминутах (M ± m)КонтрольСЭРСЭРШК-9Продолжительностьмин.%652415,1±2,29,8*±1,20,52017,3±1,222,8**±1,8 132**1,02020,1±1,428,1**±1,8 140**1,82118,2±1,328,2**±2,8 155**3,62121,4±1,434,2**±2,8 160**Примечание: * - достоверное различие с результатом первого плавания животных тойже группы (Р<0,05); ** - достоверное различие с соответствующим результатом контрольнойгруппы (Р<0,05).130В процессе эксперимента было выявлено, что у группы «контроль» ненаблюдалось полного восстановления физической работоспособности послевосстановительного периода.
Продолжительность их повторного плаваниясоставила 65 % от продолжительности первичного. В группе, принимавшейСЭР в дозах 0,5 г/кг и 1,0 г/кг, было выявлено полное восстановлениефизической работоспособности и увеличение её в среднем на 36 %. Уживотных,которымдавалиСЭРШК-9,такженаблюдалосьполноевосстановление работоспособности, с последующим её увеличением на 55 % уживотных, принимавших СЭРШК-9 в дозе 1,8 г/кг и на 60 % - у животных,принимавших СЭРШК-9 в дозе 3,6 г/кг.Исследование проводилось в Лаборатории «Разработки и доклинических*исследованийлекарственныхсредств»Институтафармацииитрансляционной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.
И.М. СеченоваМинздрава России.131Выводы к главе 6:1. Проведено исследование острой токсичности гранулята СЭРШК. Былоустановлено, что при однократном внутрижелудочном введении, LD50 гранулятаСЭРШК составляет 33,3 г/кг±0,18 г. и данное лекарственное средство являетсямалотоксичным и по степени токсичности относится к 4 классу опасности(вещества малоопасные).2. Исследована актопротекторная активность гранулята СЭРШК на животноймодели в эксперименте повторного плавания. Установлено, что курсовоеприменение исследуемого лекарственного средства достоверно увеличиваетпродолжительностьповторногоплаванияуживотныхиоказываетактопротекторное действие, которое, в виду своего проявления на измененномфункциональном фоне, свидетельствует о наличии адаптогенного эффекта.132ЗАКЛЮЧЕНИЕ1.На основе проведенного информационно-аналитического исследованиявыбраны экстрагенты и методы экстракции, наиболее перспективные для полученияСЭ корневищ и корней родиолы розовой, плодов шиповника, столбиков с рыльцамикукурузы, обоснован подбор ВВ для получения ГЛФ и вид ЛФ – твердыежелатиновые капсулы.2.Разработаныресурсосберегающиетехнологиивыделениякомплексадействующих веществ из столбиков с рыльцами кукурузы и плодов шиповникасобачьего методами трёхкратной мацерации измельченных плодов с циркуляциейэкстрагента и методом вакуумно-фильтрационной экстракции без рекуперацииспирта,соответственно.Обоснованоиспользованиеметодапротивоточногоэкстрагирования для получения СЭ ЛРС.3.Разработан состав и технология получения комбинированного ЛС дляповышения работоспособности в виде твёрдых желатиновых капсул, содержащихгранулят сухих экстрактов корневищ и корней родиолы розовой, плодов шиповникасобачьего, столбиков с рыльцами кукурузы.4.Определены показатели качества полученных СЭ и готовой ЛФ на их основе.Разработаныметодикиидентификациииколичественногоопределенияаскорбиновой и хлорогеновой кислот, флавоноидов (кверцетин, рутин), производныхгликозидов (розавин, розин, розарин, салидрозид, тирозол) методом градиентнойВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием, а также витаминов групп A, B,C, D и К методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием.
Установленсрок годности капсул СЭРШК-9, который составил 2 года.5.Изучена эффективность и безопасность полученного комбинированного ЛС invivo (острая токсичность, тест повторного плавания). Определена доза LD50.Установлено увеличение актопротекторного действия по сравнению с контрольнымпрепаратом.6.Разработан лабораторный регламент на технологию получения препаратаактопротекторного действия, представляющего собой твердые желатиновые капсулы,наполняемые гранулятом СЭРШК-9.
Разработан проект НД на лекарственную форму.133СОКРАЩЕНИЯ, ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ В РАБОТЕLD50- ПОЛУЛЕТАЛЬНАЯ ДОЗА, 50NA КМЦ- НАТРИЕВАЯ СОЛЬ КАРБОКСИМЕТИЛЦЕЛЛЮЛОЗЫPWC170- МОЩНОСТЬ МЫШЕЧНОЙ РАБОТЫ ПРИ ЧАСТОТЕСЕРДЕЧНЫХ СОКРАЩЕНИЙ В 170 УД/МИНАТФ- АДЕНОЗИНТРИФОСФАТБАВ- БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЕ ВЕЩЕСТВОБАД- БИОЛОДИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ДОБАВКАВАГ-ВЛАГОАКТИВИЗИРОВАННОЕ ГРАНУЛИРОВАНИЕВЭЖХ- ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯХРОМАТОГРАФИЯВЭЖХ-МС- ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯХРОМАТОМАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯГФ- ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯКМЦ- КАРБОКСИМЕТИЛЦЕЛЛЮЛОЗАЛВ- ЛЕКАРСТВЕННОЕ ВЕЩЕСТВОЛРС- ЛЕКАРСТВЕННОЕ РАСТИТЕЛЬНОЕ СЫРЬЕЛС- ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВОЛФ- ЛЕКАРСТВЕННАЯ ФОРМАМКЦ- МИКРОКРИСТАЛЛИЧЕСКАЯ ЦЕЛЛЮЛОЗАМЦ- МЕТИЛЦЕЛЛЮЛОЗАНТД- НОРМАТИВНО ТЕХНИЧЕСКАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯОПМЦ- ОКСИПРОПИЛМЕТИЛЦЕЛЛЮЛОЗАОЭЦ- ОКСИЭТИЛЦЕЛЛЮЛОЗАПВП- ПОЛИВИНИЛПИРРОЛИДОНПВС- ПОЛИВИНИЛОВЫЙ СПИРТПКО- ПРЕДЕЛ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯРНК- РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТАСМКЦ- СИЛИФИЦИРОВАННАЯ МИКРОКРИСТАЛЛИЧЕСКАЯЦЕЛЛЮЛОЗА134СО- СТАНДАРТНЫЙ ОБРАЗЕЦСЭР- СУХОЙ ЭКСТРАКТ РОДИОЛЫСЭРШК- СУХОЙ ЭКСТРАКТ РОДИОЛЫ, ШИПОВНИКА ИКУКУРУЗНЫХ РЫЛЕЦТСХ- ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯУФ- УЛЬТРАФИОЛЕТЦНС- ЦЕНТРАЛЬНАЯ НЕРВНАЯ СИСТЕМА135СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.Авцын А.П.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
