Автореферат (1141251), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Первичные данные,полученные в результате проведения настоящего исследования, получены припомощи современных методов анализа, являются достоверными и точными, чтоподтверждено в ходе проведения процедуры валидации. Использованное в работе7оборудование имело действующие свидетельства о поверке и зарегистрировано вРеестре средств измерений, что позволяет считать результаты исследованиядостоверными.
Все результаты обработаны статистически.Апробация результатов исследования. Основные положения работы ирезультаты исследования доложены на научном совете НИИ Фармации«Достижения и перспективы молодых ученых НИИ Фармации» (Москва, 2014 г.),на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемыфармации и медицины» (Шымкент, 2015 г.), на VII Научно-практическойконференции «Актуальные проблемы оценки безопасности лекарственныхсредств» (Москва, 2016 г.), на VI Международной научно-методическойконференции«Путииформысовершенствованияфармацевтическогообразования. Создание новых физиологически активных веществ» (Воронеж,2016г.),наXIIНаучно-практическойконференции«Биомедицинаибиомоделирование» (Москва, 2016 г).
Апробация работы проведена на Научномсовете Научно-исследовательского института фармации Первого МГМУ им. И.М.Сеченова (21 июня 2016 г.).Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в проведенииэкспериментальных исследований, анализе и обобщении полученных результатов.Автором лично проведена разработка и валидация методики определениятиозонида в плазме крови человека, статистическая обработка результатов.Автору принадлежит ведущая роль в проведении анализа плазмы крови здоровыхдобровольцев, принимавших оригинальный препарат Тиозонид в рамкахклинического исследования с целью изучения фармакокинетики препарата припомощиразработаннойопределенияметодики.концентрацийСтатистическийтиозонидавплазмеанализкровиирезультатовпараметровфармакокинетики проводился с использованием статистических программ.
Вкладавтора является определяющим на всех этапах исследования: от постановки задач,их экспериментально - теоретической реализации до обсуждения результатов внаучных публикациях, докладах и внедрения в практику.8Внедрениерезультатовисследования.Методикаколичественногоопределения тиозонида в плазме крови человека методом ВЭЖХ с массспектрометрическимдетекторомвнедренавпрактическуюдеятельностьЛаборатории биоаналитических исследований ФГБУН НЦБМТ ФМБА России, атакже используется в Лаборатории клинической фармакологии ФГБУ ГНЦ«Институт иммунологии» ФМБА России, что подтверждается Актами овнедрении (от 27.06.2016 и 30.06.2016 соответственно).РезультатыдальнейшегофармакокинетическогоизучениялекарственныхпрепаратаисследованияТиозонидсредств,использованы(Государственныйэлектронныйдляреестрресурс:http://grls.rosminzdrav.ru/CiPermitionReg.aspx?DateBeg=&DateEnd=&DateInc=&NumInc=&RegNm=&Statement=&Protocol=&Torg=%d0%a2%d0%b8%d0%be%d0%b7%d0%be%d0%bd%d0%b8%d0%b4&LFDos=&Qualifier=&Producer=&Recearcher=&OrgDocOut=2&Status=1&NotInReg=0&All=0&PageSize=8&order=date_perm&orderType=desc&pagenum=1).Соответствие диссертации паспорту научной специальностиНаучные положения диссертации соответствуют формуле специальности14.04.02 «Фармацевтическая химия, фармакогнозия».
Результаты проведенногоисследования соответствуют области исследования специальности, конкретнопункту 4 паспорта специальности «Фармацевтическая химия, фармакогнозия»Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наукДиссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы НИИФармации Первого МГМУ имени И.М.
Сеченова «Разработка современныхтехнологийподготовкиспециалистовсвысшиммедицинскимифармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологическихисследований», номер государственной регистрации 01.2.006.06352.Объем и структура диссертации.Диссертационная работа изложена на 117 страницах машинописного текста,состоит из введения, 5 глав, содержащих обзор литературных данных поизлагаемой проблеме (1глава), экспериментальной части(собственногоисследования), где описаны: материалы и методы, использованные в ходепроведенияэксперимента(2глава),9разработкаивалидацияметодикиопределения тиозонида в плазме крови человека (3 глава), применениеразработаннойметодикидляизученияфармакокинентикиоригинальногопротивотуберкулёзного препарата Тиозонид в клиническом исследовании,статистическаяобработкафармакокинетическихполученныхпараметровпрепаратазначенийпослеиндивидуальныхприемавизучаемыхдозировках (4 глава), обсуждения полученных результатов (глава 5), спискасокращений и условных обозначений и списка литературы.Диссертация включает 19 таблиц и 35 рисунков.
Библиографический списоксодержит 108 источников, из них 43 на иностранных языках.Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, изних 2– в изданиях из Перечня ВАК, включенных в базу Scopus и Web of Science.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованияОбъекты исследования: Стандартный образец: тиозонид цитрат, субстанция-порошок (предоставленЗАО «Фарм-Синтез», серия 09112012, чистота более 99 %, Россия) Образцы плазмы после однократного перорального приема препаратаздоровыми добровольцами в дозе 25 мг, 200 мг, 400 мг и 600 мг.Реактивы: ацетонитрил Super Gradient, Lab-Scan Analytical Sciences; муравьинаякислота (х.ч.); вода очищенная; вода Milli-Q; метанол (Scharlau, Испания, класс«для ВЭЖХ»).Оборудование: жидкостной хроматограф Agilent 1200 с масс-спектрометрическимдетектором MS 6120, AgilentTechnologies, США; весы аналитические OHAUS DV214C, Китай; портативный рН-метр 728 рН lab, Metrohm AG, Швейцария;центрифуга Eppendorf 5415D, Германия; встряхиватель типа вортекс ELMI,Латвия;концентраторEppendorfConcentratorplus,Германия;дозаторыпеременного объема Ленпипет 10 – 100 мкл и 100 – 1000 мкл, Россия;холодильник Indesit, SD 125, Россия; морозильная камера для плазмы Sanyo,Япония; система водоподготовки Millipore, Milli-Q Advantage A10, Франция;микропробирки Eppendorf 1,5 мл; колбы мерные класса «А» вместимостью 20, 5010и 100 мл; пипетки аналитические класса «AS» вместимостью 5, 10 мл.
Всеиспользуемые в работе средства измерения зарегистрированы в государственномреестре средств измерений и имели действительные свидетельства о поверке.Статистическую обработку полученных данных при разработке и валидацииметодики количественного определения тиозонида проводили при помощипрограммногообеспеченияChemStation(ver.B.03.01-SR1),AgilentTechnologies,США. Фармакокинетические параметры и описательную статистикурассчитывали модельно-независимым методом при помощи пакета MS Excel срасширениемдляпроведенияфармакокинетическогоанализаBoomer(разработано JoelI.
Usansky, Ph.D., AtulDesai, M.S. and DianeTang-Liu, Ph.D.;Department of Pharmacokinetics and Drug Metabolism Allergan, Irvine, CA 92606,США).Приготовление растворов и пробоподготовкаОбразцы чистой и исследуемой плазмы крови хранили в морозильнойкамере (Sanyo, Япония) при температуре от минус 75 до минус 80оС.Стандартные растворы хранили в холодильнике (Indesit, SD 125, Россия) притемпературе от 2 до 8 оС.Для приготовления исходного стандартного раствора тиозонида точнуюнавеску стандартного образца тиозонида (0,001 г) помещали в мерную колбувместимостью 100 мл, добавляли 3 мл метанола до полного растворения, а затемдоводили объем раствора водой Milli-Q до метки и перемешивали.
В полученномрастворе концентрация тиозонида составляла 10 мкг/мл. Рабочие стандартныерастворы готовили путем разведения исходного стандартного раствора тиозонидаводой Milli-Q.ПробоподготовкаВ качестве способа пробоподготовки было выбрано осаждение белков плазмыс использованием ацетонитрила в качестве осаждающего реагента в соотношении1:1.В микропробирки Eppendorf вместимостью 1,5 мл помещали 500 мклплазмы крови, затем прибавляли 500 мкл ацетонитрила, встряхивали на вихревой11мешалке в течение 1-2 мин, центрифугировали при 13200 оборотов в минуту(об/мин) в течение 10 минут и отделяли надосадочную жидкость.
Полученнуюнадосадочную жидкость переливали в виалы на 2,0 мл и помещали в автосэмплерхроматографа.Дизайн фармакокинетического исследованияПроводилиодноцентровоепроспективноенерандомизированноеисследование с последовательным включением добровольцев с эскалацией дозыдля оценки безопасности, переносимости и изучения фармакокинетическогопрофиля препарата Тиозонид, капсулы 100 мг (ЗАО «Фарм-Синтез», Россия). Висследовании принимали участие 4 группы здоровых добровольцев (по 10добровольцев в каждой группе), которые принимали перорально препарат в дозах25 мг (капсулы были изготовлены для исследования), 200, 400 и 600 мг (по 2, 4 и 6капсул по 100 мг соответственно).
График отбора проб крови для изученияфармакокинетики был следующим: 0 (до приема препарата), 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9, 10, 12, 24, 36, 48, 72, 96, 120,144, 168 часов после приема препарата.Результаты исследованияРазработка методики количественного определениятиозонида в плазме крови человекаТиозонид является инновационным лекарственным средством, в литературеотсутствуют данные по биоаналитическим методикам определения тиозонида вплазме крови людей.По химической структуре тиозонид представляет собой - {1R,2S + 1S,2R}-1(6-Бром-2-хлорхинолил-3-ил)-4-(диметиламино)-2-(нафталин-1-ил)-1фенилбутан-2-ол - порошок белого или белого с желтоватым оттенком цвета,нерастворим в воде, не растворим в изотоническом растворе, 1г/л растворим вметаноле, 10 г/л в хлороформе (раствор облучают на ультразвуковой бане втечение 10 минут). Структурная формула тиозонида представлена на Рисунке 1:12Рисунок 1. Cтруктурная формула тиозонида ({1R,2S + 1S,2R}-1-(6-Бром-2-хлорхинолин-3-ил)-4-диметиламино-2-(нафталин-1-ил)-1-фенилбутан-2-ол).Молекулярная масса: 559.93.Условия анализа подобраны экспериментально.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
