Автореферат (1141106), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Дополнительным критерием являлась глубина поражения, котораярегистрировалась в специальном журнале учета. Все критерии определяли каждую неделю.- Микроскопическая оценка эффективности лечения по элиминации возбудителя из очаговпоражения. Для этого проводили подсчет количества лейшманий в мазках, с использованиемшкалы: «0» – отсутствие лейшманий; «+» – 1 лейшмания на 1–9 полей зрения; «++» – от 2 до 10лейшманий в 1-м поле зрения; «+++» – от 11 до 50 лейшманий в 1-м поле зрения; «++++» –более 50 лейшманий в 1-м поле зрения. Микроскопию отделяемого язвы проводили 2 раза вмесяц.- Проводили фоторегистрацию динамики кожного процесса у животных до начала лечения, на30-й и на 60-й дни от начала лечения.6.Статистическая обработка материала.
Обработка результатов исследованийпроведена с использованием пакета статистических программ “STATISTICA 6.0». Данныешифровали в программе EXCEL. Описательная статистика количественных признаковпредставлена средними и среднеквадратичными отклонениями (в формате M±m). Для анализанормально распределенных признаков применяли параметрические методы (t-критерийСтьюдента).СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫРЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙИсследование эффективности препаратов для терапии ЗКЛ in vitro. Для проведенияисследований использовались высоковирулентные штаммы культуры L. major.
Изучалиактивность трех антибактериальных препаратов (опытные группы): цефотаксим (Франция),цефтриаксон (Россия), доксициклин (Россия). Контрольные группы: 1 группа – пробирки сжидкой средой 199 с солями Хенкса (требования протокола); 2 группа – меглумина антимонат(МА), являющийся «золотым стандартом» при лечении любых форм лейшманиоза.9Культуру лейшманий на кровяных средах поддерживали без применения антибиотиков.В контрольные пробирки вносили чистую среду, а в опытные пробирки – среду, в которуюпредварительно добавили суспензию промастигот лейшманий. Смесь разливали по минипробиркам в объеме 0,47 мл, затем в каждую опытную пробирку вносили двукратныеразведения испытуемых веществ, в объеме 0,03 мл.
Через 5 дней инкубации при 22–25°С втемноте содержимое пробирок исследовали в свежем и окрашенном мазке. Определялиминимальную концентрацию препарата, которая полностью подавляет рост промастигот.Последовательное увеличение концентрации препаратов по методике проводилосьпошагово – в 2, 4, 6, 8, 10 раз. Разведение порошков лекарственных препаратов проводили всоответствии с инструкциями фирм производителей. Анализ результатов дан с использованиемдвух вариантов концентраций, обозначенных как min и max.
В связи с тем, что форма выпускаМА – раствор, то увеличение концентрации в 6, 8 и 10 раз привело бы к излишнему объему виспытуемых пробирках, поэтому увеличение концентрации МА проводилось только в 2 и 4раза. В опытах было три варианта концентрации с 0,009 г, 0,018 г и 0,036 г (max) в растворе.Min концентрация препаратов доксициклин, цефотаксим, цефтриаксон в 10 разотличалась от max.
Данная серия опытов повторялась трижды.Результаты исследования эффективности доксициклина in vitro. В опытах было шестьвариантов концентрации в растворе: 0,0006; 0,0012; 0,0024; 0,0036; 0,0048; 0,006. Проведеносравнение эффективности min (0,0006 г) и max (0,006 г) доз доксициклина с двумяконтрольными группами – МА и питательная среда 199.
Сравнение числа промастигот в трехпробирках с min дозами препаратов: доксициклина (5,083 при min дозе 0,0006 г) и МА (7,92 приmin дозе 0,009 г) показало, что специфическая активность доксициклина в 1,6 раза выше, чемМА (p<0,05). Сравнение числа промастигот в трех пробирках с max дозами препаратов:доксициклина (3,167 при max дозе 0,006 г) и МА (5,42 при max дозе 0,036 г) свидетельствует,что специфическая активность доксициклина достоверно в 1,7 раза выше, чем у МА (p<0,05). Вконтрольных пробирках с 0,03 мл среды 199 число промастигот несколько уменьшилось посравнению с исходным значением за счет естественной гибели паразитов вследствие отсутствияпассажей и твердой фазы питательной среды.
Увеличение min терапевтической дозыдоксициклина в 10 раз лишь в 1,6 раза увеличивало его эффективность (5,083 против 3,167промастигот в одном поле зрения). При использовании, как min, так и max доз, подвижныеформы не выявлены, что является доказательством эффективности min дозы препарата,обладающей ингибирующей активностью.Результаты исследования эффективности цефотаксима in vitro. В опытах было шестьвариантов концентрации в растворе: 0,0075; 0,015; 0,03; 0,045; 0,06; 0,075. Проведено сравнениеэффективности min (0,0075 г) и max (0,075 г) доз цефотаксима с двумя контрольными группами10– МА и питательная среда 199. Сравнение числа промастигот в трех пробирках с min дозамипрепаратов: цефотаксима (8,917 при min дозе 0,0075 г) и МА (7,92 при min дозе 0,009 г)свидетельствует, что специфическая активность цефотаксима идентична таковой у МА (p>0,05).Сравнение числа промастигот в трех пробирках с max дозами препаратов: цефотаксима (4,672при max дозе 0,075 г) и МА (5,42 при max дозе 0,036 г) свидетельствует, что специфическаяактивность цефотаксима идентична таковой у МА (p>0,05).
Увеличение min терапевтическойдозы цефотаксима в 10 раз в 1,9 раза увеличивает его эффективность (8,917 против 4,672промастигот в одном поле зрения). Отсутствие подвижных форм промастигот отмечается лишьпри max дозе, увеличенной в 10 раз рекомендованной инструкцией. Это указывает нанеобходимость проверки безопасности этой дозы в исследовании in vivo.Результаты исследования эффективности цефтриаксона in vitro. В опытах было шестьвариантов концентрации в растворе: 0,009; 0,018; 0,036; 0,054; 0,072; 0,09. Проведено сравнениеэффективности min (0,009 г) и max (0,09 г) доз цефтриаксона с двумя контрольными группами –МА и питательная среда 199. Сравнение числа промастигот в трех пробирках с min дозамипрепаратов: цефтриаксона (2,25 при min дозе 0,009 г) и МА (7,92 при min дозе 0,009 г)свидетельствует, что специфическая активность цефтриаксона достоверно в 3,5 раза выше, чему МА (p<0,05). Сравнение числа промастигот в трех пробирках с max дозами препаратов:цефтриаксона (1,42 при max дозе 0,09 г) и МА (5,42 при max дозе 0,036 г) показало, чтоспецифическая активность цефтриаксона достоверно в 3,8 раза выше, чем у МА (p<0,05).Увеличение min терапевтической дозы цефтриаксона в 10 раз лишь в 1,6 раза увеличивает егоэффективность (2,25 против 1,42 промастигот в одном поле зрения).
При использовании, какmin, так и max доз цефтриаксона, подвижные формы не выявлены, что являетсядоказательством эффективности min дозы, которая обладает высокой ингибирующейактивностью. Сравнительный анализ эффективности препаратов in vitrо представлен в таблице1.Таблица 1 – Мin и max терапевтические концентрации антибиотиков во взвеси паразитовЛейшмании в одном поле зренияМННДоза, гКоличество промастигот Подвижность промастигот*Доксициклинmin 0,00065,083max 0,0063,167Цефтриаксонmin 0,0092,250max 0,091,420Цефотаксимmin 0,00758,917+max 0,0754,672МАmin 0,0097,920++max 0,0365,420++КонтрольСреда 19919,160++*Использовались обозначения: «-» – неподвижные лейшмании; «+» – малоподвижные лейшмании, зачастуюдвижения только жгутика, без передвижения; «++» – активные лейшмании, передвигающиеся по всему полюзрения свободно.11Ингибирующая активность препаратов при min дозе составляла 2,25 (цефтриаксон); 5,083(доксициклин); 8,917 (цефотаксим) промастигот в поле зрения.
Она уменьшалась от препарата кпрепарату в 2,3 и 1,8 раза. В то же время инактивация подвижности промастигот наступала придозе доксициклина в 15 раз меньшей, чем цефтриаксона (0,0006 г против 0,009 г,соответственно). Все визуализируемые особи были неподвижными при min дозах. При min дозецефотаксима (8,917) ингибирующая активность была слабой, т.к. отмечались колебанияжгутиков.Сравнение двух контрольных групп свидетельствует, что в 1-ой контрольной группе сиспользованием МА min ингибирующая активность препарата составляла 7,92 жгутиковых вполе зрения, что в только в 2,2 раза меньше, чем во 2-ой контрольной группе (среда 199 –19,16). При этом имели место активные лейшмании, передвигающиеся свободно по всему полюзрения.
Не исключено, что это связано с несколько заниженной концентрацией препарата всвязи с использованием его жидкой лекарственной формы. Эксперимент in vivo даствозможность получить более достоверные данные. Увеличение терапевтической концентрациипрепаратов в 4 раза (МА) и в 10 раз (антибиотики) свидетельствует о незначительномповышении специфической активности: только в 1,5 раза для МА (5,42 против 7,92); 1,6 разадля доксициклина (3,167 против 5,083); в 1,5 раза для цефтриаксона (1,42 против 2,25) и в 1,9раза для цефотаксима (4,672 против 8,917).
Увеличение терапевтической концентрации вклинической практике не рекомендуется и не оправдано, т.к. минимальная концентрация ужеобладает ингибирующей активностью.Проверканалабораторноймоделитоксичностипрепаратовспротиволейшманиальным эффектом, доказанным in vitro. Для изучения токсичностиуказанных препаратов использовали методику, принятую в клинической фармакологии длядоклинических исследований на животных [Миронов А.Н., 2012]. Для этой цели отобраны по 5GSH для каждого изучаемого препарата.
Доза препаратов рассчитывалась исходя измаксимальной рекомендуемой дозы по инструкции фирмы производителя для человека сосреднестатистическим весом 60 кг. Для GSH эта доза определялась на 100 г массы тела.Максимальныйпериоднаблюдениязаживотнымисоставил3нед.Максимальнаятерапевтическая доза доксициклина составила 0,00033 г на 100 г массы животного. Препаратвводили в/м однократно в дозировках, превышающих максимальную в 5 раз (1 и 2 животные), атакже – в 10 раз (3-5 животные) (табл. 2).Таблица 2 – Оценка токсичности доксициклина in vivo на GSH№ GSH иКоличествоКоличестворазведениепрепарата на 100вещества,1 деньдоксициклинаг массы GSH (г)введенного в/м (г)№1 в 5 раз0,0016*0,001490№2 в 5 раз0,0016 *0,001610312Масса GSH (г)16 день21 день93 (+3,3%)106 (+3%)94 (+4,4%)108 (+5%)№3 в 10 раз№4 в 10 раз№5 в 10 раз0,0032*0,0032 *0,0033*0,00330,00360,004102111122102 (0%)116 (+4,5%)125 (+2,5%)105 (+3%)120 (+8,1%)123 (+1%)*рекомендованное инструкцией количество препарата в пересчете на 100 г веса лабораторной модели,увеличенное в 5 и 10 разВес GSH до начала эксперимента колебался от 90 до 122 г.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
