Автореферат (1141106), страница 2
Текст из файла (страница 2)
В исследованиях in vitro эффективностьцефтриаксона была высокой, в in vivo – животные погибали.Впервые in vivo установлен факт повышения эффективности доксициклина и меглуминаантимоната в комплексной терапии с интерфероном альфа-2b человеческим рекомбинантным.Выявлен синергизм данных препаратов.Теоретическая и практическая значимость работы: при количественном учете числапромастигот установлено преобладание специфической активности цефтриаксона наддоксициклином в 2,6 раза (2,250 и 5,083) при min терапевтических дозах обоих. При этом minтерапевтическая доза первого в 15 раз больше, чем второго (0,009 г и 0,0006 г, соотвественно).Золотистыехомяки,являющиеся«золотымстандартом»экспериментальной модели ВЛ, могут быть использованы и для ЗКЛ.5длявоспроизведенияУчитывая эффективность цефтриаксона в эксперименте in vitro и доказанную еготоксичностьювэкспериментеinтребуетсяvivo,егодополнительноеизучение.Доказанный in vivo факт высокой антилейшманиальной эффективности доксициклина приэкспериментальном ЗКЛ, повышение его эффективности в сочетании с интерфероном альфа-2bчеловеческим рекомбинантным расширяет показания для их использования.Основные положения, выносимые на защиту1.Доксициклин и цефтриаксон in vitro обладают высокой специфической активностью вотношении возбудителя ЗКЛ, значительно большей, чем меглумина антимонат.2.Доксициклин,меглуминаантимонатиинтерферональфа-2bчеловеческийрекомбинантный при изучении их токсичности in vivo на золотистых хомяках не обладаюттаковой.
Выраженной токсичностью обладают цефотаксим и цефтриаксон.3.Меглумина антимонат и доксициклин эффективны при лечении ЗКЛ у золотистыххомяков. Цефтриаксон и цефотаксим в терапевтической дозе вызывают их гибель. Комплекснаятерапия (меглумина антимонат / доксициклин +интерферон альфа-2b человеческийрекомбинантный) обладает более высокой эффективностью в сравнении с монотерапией.Личный вклад автора.
Автором проведен анализ отечественной и зарубежнойлитературы по изучаемой проблеме, сформулированы цели и задачи, научная новизна ипрактическая значимость, положения, выносимые на защиту. Разработан дизайн исследования.Вся экспериментальная работа in vivo и in vitro с регистрацией полученных результатов вспециальных журналах истатистическаяобработка полученных данных выполненысамостоятельно. Лично написаны статьи, настоящая диссертация, подготовлены доклады ипрезентации на научных конференциях.Внедрение результатов исследования.
Результаты исследования внедрены в учебныйпроцесс кафедр тропической медицины и паразитарных болезней МПФ ФГАОУ ВО ПервыйМГМУ им. И. М. Сеченова; кожных и венерических болезней с курсом медицинскойкосметологии ФГБОУ ВО «Смоленский государственный медицинский университет» МЗ РФ;дерматовенерологии и косметологии ФГБУ ДПО «Центральная Государственная МедицинскаяАкадемия» Управления делами Президента РФ; кафедры дерматовенерологии ФГБОУ ВО«Оренбургский Государственный медицинский университет» МЗ РФ; дерматовенерологии икосметологии ФГБОУ ВО «Саратовский ГМУ им.
В.И. Разумовского» МЗ РФ.Степень достоверности и апробация результатов: Материалы исследования доложеныи обсуждены на Всероссийском конгрессе «Инфекционные болезни у детей: диагностика,лечениеипрофилактика»(С-Пб,на2014);научно-практическихконференцияхсмеждународным участием «Инфекции и противоинфекционный контроль в дерматологии»(Москва, 2017, 2018). Апробация диссертации состоялась в Институте медицинской6паразитологии, тропических и трансмиссивных заболеваний им. Е.
И. Марциновского (Москва,27.08.2018).Соответствиесоответствуетдиссертациишифру научнойпаспортуспециальности:научной03.02.11специальности.Диссертация«Паразитология»иформулеспециальности. Область исследований при ЗКЛ соответствует пункт 6 (изучение клиникиболезни у животных), 7 (разработка новых методов лечения паразитарных болезней).Публикации.
По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из них: 2 статьи сматериалами собственных исследований и 3 статьи обзорные в рецензируемых журналах ВАКРФ; 1 руководство; 4 тезиса конференций; 2 статьи в журналах, не рецензируемых ВАК РФ.Объемиструктурадиссертации.Диссертацияизложена на 109страницахмашинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов иметодов исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, практическихрекомендаций. Список литературы включает 118 источников, в том числе 44 отечественных и74 зарубежных авторов.
Работа иллюстрирована 17 таблицами и 19 рисунками.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙЭкспериментальный раздел работы выполнен в Институте медицинской паразитологии,тропических и трансмиссивных заболеваний им. Е. И. Марциновского Первого МГМУ им. И.М. Сеченова. Изучена активность нескольких лекарственных препаратов, зарегистрированных вРоссии: антибиотики доксициклин (Россия), цефотаксим (Франция) и цефтриаксон (Россия), атакже интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный. Препарат 5-валентной сурьмымеглумина антимонат использовали в контрольной группе.Для выполнения поставленных задач применены следующие методы исследования.1. Выбор лабораторной модели животного. В исследовании в качестве лабораторноймодели использовали золотистых хомяков – Golden Syrian hamster (GSH) – классическуюмодель для висцерального лейшманиоза [Миронов и соавт.
А.Н., 2012]. Выбор GSH былобусловлен и тем, что использованная лабораторная культура L. major, хранилась долгое времяв криобанке института и требовала поиск более чувствительной экспериментальной модели длязаражения.2. Отбор биологического материала для заражения лабораторных животных. Для этойцели использованы штаммы, хранящиеся в криобанке Института медицинской паразитологии,тропических и трансмиссивных заболеваний им. Е.
И. Марциновского Первого МГМУ им. И.М. Сеченова. По журналу отбирали наиболее вирулентные штаммы L. major. Биомассасчиталась годной для проведения исследований при среднеарифметической численностипромастигот в поле зрения 72, что соответствовал 28000000 паразитов в 1 мл двухфазнойсреды.73. Изучение специфической активности препаратов для лечения ЗКЛ in vitro. КультураL. major получена от больных, проживавших в эндемичных по КЛ регионах Узбекистана.Возбудитель выделялся путем аспирации из очага инфекции. Для оценки специфическойактивности препаратов in vitro применяли методику из в «Руководства по проведениюдоклинических исследований лекарственных средств» под редакцией проф. А.Н.Миронова(2012).
Увеличение min концентрации препаратов в несколько раз (max доза) дало возможностьвыяснить влияние их концентрации на специфическую антилейшманиальную активность.4. Изучение токсичности проводилось по методике, описанной в «Руководстве попроведению доклинических исследований лекарственных средств» под редакцией проф.А.Н.Миронова (2012) с коррекцией на имеющиеся разрешения для использования этихпрепаратов в клинической практике. Были отобраны по 5 GSH для каждого изучаемогопрепарата. Суточная терапевтическая концентрация препаратов определялась максимальнойконцентрацией, рекомендованной инструкцией для человека со среднестатистическим весом 60кг для внутримышечного введения. Осуществляли последовательное увеличение концентрацииизучаемых антибактериальных препаратов в 5 и 10 раз, меглумина антимоната – в 3 и 5 раз,интерферона альфа-2b человеческого рекомбинантного – в 10 и 20 раз. Максимальный периоднаблюдения за животными составлял 3 нед.
Токсичность препарата оценивалась по изменениюмассы тела животных на 16-ый и 21-ый дни эксперимента по сравнению с исходной.Учитывались их поведенческие реакции и изменение аппетита, в некоторых случаях смертьGSH.5. Изучение эффективности препаратов in vivo на лабораторной модели ЗКЛ.
Этапы.-Подготовкаинфекционногоматериаладлязаражения.ЭкспериментальныйЗКЛвоспроизводили промастиготами лейшманий, которые культивировали на питательных средах.Для сохранения вирулентности биомассы высоковирулентных штаммов L. major проводился 12-кратный пассаж возбудителей на питательных средах. Культуру лейшманий выращивали притемпературе 23–25°С на среде NNN. Для заражения использовали 10-14- дневную культуру.Взвесь для инфицирования была годной при концентрации паразитов 106 в 0,05 мл.- Методика введения инфекционного агента. Каждому животному путем внутрикожнойинъекции вводили около 2 млн. паразитов в виде суспензии культуры L.
major. Инъекцииделали в две области: пах и уши. Это увеличивало вероятность развития инфекционного.Обязательным условием являлось появление в месте инъекции эффекта «лимонной корочки».- Критерии отбора GSH для эксперимента in vivo. Основным критерием являлась степеньместного поражения кожи, которая определялась по специальной шкале: «0» – отсутствиепоражения; «+» – инфильтрация; «++» – изъязвление; «+++» – образование язвы с коркой;8«++++» – обширная язва; «++» – затихание процесса, начало эпителизации; «+» – дальнейшеезаживление, сопровождающееся шелушением; «0» – полная эпителизация.- Визуальная оценка эффективности препаратов по динамике кожного процесса. Для этогоиспользовали животных при степени местного поражения «+++» и «++++».
Рассчитывалсясредний показатель поражения кожи в каждой группе до начала лечения и после завершениякурса терапии. Он равнялся сумме всех крестов в группе, деленной на число животных в ней.Учитывался размер язв, который определялся измерением ее длины и ширины с последующим1вычислением площади очага поражения в см2 по формуле: = 2 ×12 × , где D – длинабольшой оси эллипса, d – длина малой оси эллипса, = 3,14. Сумма площадей отдельных язв,деленная на число животных в группе, составляет средний размер лейшманиомы для этойгруппы животных.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
