Автореферат (1140611), страница 2
Текст из файла (страница 2)
gingivalis, P. intermedia, T. forsythia и T. denticola). Доля потенциальнойпротекторной микрофлоры (V. parvula) при этом достоверно возрастает, новеличина прироста остается небольшой, составляя ~1 цикл относительного Ct (тоесть ~ в 2 раза). Эти наблюдения объясняют краткосрочность достигаемоголечебного эффекта местной антимикробной терапии хронического пародонтита.Впервыепоказано,чтофотодинамическаятерапиясприменениемфотосенсибилизатора на основе хлорина е6 (коммерческое название препарата –«Гелеофор») и светодиодного излучателя АФС «Спектр» (6 Дж/см2) приводит кдостоверному снижению в составе поддесневой биопленки пародонтопатогеновA. actinomycetemcomitans, T. forsythia, P. gingivalis и T.
denticola, не оказываявлияния на содержание P. intermedia. Доля в консорциуме потенциальныхпротекторов V. parvula и S. sanguinis существенно возрастает. В отличие оттрадиционной антимикробной терапии эффект после ФДТ сохраняется в течение3 мес., что соответствует кратности посещений при динамическом наблюдениипациентов с ХГП средней и тяжелой степеней.Теоретическая и практическая значимостьПредложена оригинальная методика молекулярного анализа в форме ПЦР вреальном времени, позволяющая проводить количественную оценку соотношенияуровня представленности в поддесневом зубном налете пародонтопатогенов ипародонтопротекторов. Использование этой методики позволяет оцениватьстойкость достигаемого лечебного эффекта при лечении пародонтита, отслеживаяизменение соотношения видов бактерий в составе поддесневой биопленки в7отдаленные сроки лечения.Показано, что оценка представленности в микробиоме поддесневого зубногоналета потенциальных пародонтопротекторов V.
parvula и S. sanguinis наряду ссодержанием основной группы пародонтопатогенов существенно расширяетвозможности индивидуальной диагностики состояния пародонта у пациентов сХГП средней и тяжелой степеней.С использованием разработанной методики показано, что традиционная схемалечения ХГП с применением местных антибактериальных средств не позволяетобеспечить стойкого лечебного эффекта, так как практически не влияет насоотношениечисленностиосновныхпатогеновипотенциальныхпародонтопротекторов в составе поддесневого зубного налёта, за исключением A.actinomycetemcomitans.Использование курса фотодинамической терапии в комплексном лечениипациентов существенно снижает содержание в поддесневой микрофлоре наиболеечасто встречающихся пародонтопатогенов: A. actinomycetemcomitans, P.
gingivalis,T. forsythia и T. denticola. Одновременно наблюдается существенное увеличениедоли потенциальных протекторов V. parvula и S. sanguinis. В совокупности,наблюдаемыйрезультатфотодинамическойтерапииможноназватьблагоприятным с точки зрения нормализации соотношения патогенной и условнопатогенной микрофлоры в ПК, что снижает риск обострения хроническогопародонтита.Методология и методы исследованияДиссертация выполнена в соответствии с принципами и правиламидоказательной медицины.В исследование включались здоровые лица и пациенты с ХГП средней итяжелой степеней обоих полов в возрасте от 35 до 67 лет. Контрольная группа 1включала 50 человек с интактным пародонтом. Основная группа 2 включала 50пациентов с ХГП средней и тяжелой степеней, получавших комплексноепародонтологическое лечение с включением местной антибактериальной терапии8препаратом «Метрогил-Дента».
Основная группа 3 включала 50 пациентов,которым в составе комплексного лечения применяли фотодинамическуютерапию.Постановка диагноза и оценка эффективности лечения пациентов с ХГПосуществлялисьнаосновекомплексасовременныхклинических,рентгенологических и молекулярно–генетических методов исследования сиспользованием адекватных методов статистического анализа.Наряду с клиническим стоматологическим обследованием у каждого пациентаотбирали по четыре образца поддесневого содержимого (два образца с верхнейчелюсти и два – с нижней челюсти с каждой стороны). У пациентов контрольнойгруппы образцы поддесневой микрофлоры отбирали однократно, у пациентовосновных групп – непосредственно до начала лечения, через 30 и 90 дней послеего окончания.Из полученных образцов выделяли суммарную ДНК, которую анализировалинасодержаниеобщейбактериальнойДНК,пятипародонтопатогенов(P.
gingivalis, A. actinomycetemcomitans, T. forsythia, T. denticola, P. intermedia) идвухкандидатныхпародонтопротекторов(V.parvulaиS.sanguinis).Флуоресцентный сигнал, полученный при исследовании каждого конкретногобактериального вида, нормировали на сигнал общей бактериальной массы (16SрДНК), получая, таким образом, показатель, характеризующий долю бактерии всоставе исследуемого микробиома – относительный Ct. Эти показателииспользовались для усреднения по группам, после чего проводили оценкудостоверности различия между группами методом непараметрического анализапо Манну–Уитни.Положения, выносимые на защиту1.
С применением методов молекулярно-генетического анализа на основе ПЦРвреальномвременипоказаносущественноболеенизкоесодержаниепотенциальных пародонтопротекторов V. parvula и S. sanguinis у пациентов с ХГПсредней и тяжелой степеней по сравнению с группой лиц с интактным9пародонтом.Такимобразом,полученыдоказательствавозможностииспользования относительного содержания V. parvula и S.
sanguinis в качествемолекулярных маркеров для оценки состояния тканей пародонта.2. Комплекснаяконсервативнаятерапиясместнымприменениемантимикробного препарата «Метрогил-Дента» эффективна для лечения пациентовс ХГП с высокой обсеменённостью пародонта A. actinomycetemcomitans, но менееэффективна в снижении относительной обсеменённости пародонта другимипародонтопатогенами: P. gingivalis, P. intermedia, T.
forsythia и T. denticolа.Данный вид лечения, как правило, приводит к снижению доли в поддесневоммикробиоме потенциальных протекторов V. parvula и S. sanguinis.3. Фотодинамическаятерапиясприменениемпрепарата«Гелеофор»эффективна для снижения обсеменённости пародонта A. actinomycetemcomitans,T. forsythiaP. gingivalisиT. denticolа. Посравнению с традиционнойантимикробной обработкой ПК, ФДТ положительно влияет на содержание вподдесневом микробиоме потенциальных пародонтопротекторов V.
parvula иS. sanguinis.Степень достоверности и апробация результатовСтепень достоверности выводов определяется участием в исследованиинеобходимого количества пациентов всех групп (в общей сложности – 150человек), сбалансированностью половозрастных характеристик контрольной иосновных групп, использованием современных диагностических методов. Припроведении молекулярного анализа для определения общей бактериальной массыобразца и пяти пародонтопатогенов методом ПЦР в реальном временииспользован коммерчески доступный сертифицированный набор «Дентофлор».Для выявления потенциальных пародонтопротекторов V.
parvula и S. sanguinisиспользован оригинальный комплект реагентов, разработанный при участиидиссертанта. При анализе градуально изменяющихся переменных (относительныеCt) применялись адекватные методы статистической обработки данных:непараметрическийкритерийМанна–Уитни.10Добровольностьвовлеченияпациентов в исследование подтверждена их письменным информированнымсогласием.Результаты исследования доложены на научно–практических конференциях:XVI Форум «Стоматология 2014», (Москва, 2014); VIIIЕжегодный научныйфорумнаучно-практической«Стоматология2016»(Москва,2016);VIIконференции молодых ученых (Москва, 2016); Общероссийской конференции«Новое в этиологии, патогенезе и совершенствовании способов профилактики илечения стоматологических заболеваний» (г. Тверь 17 – 18 ноября 2016).Апробация диссертационной работы состоялась «4» июля 2017 г.
насовместномзаседаниипрофессиональногосотрудниковобразованиякафедрыФГАОУСтоматологииВОПервыйИнститутаМосковскийгосударственный медицинский университет им. И.М. Сеченова МинздраваРоссии, отделения терапевтической стоматологии, отделения эндодонтии икариесологии, отделения профилактики стоматологических заболеваний ФГБУ«ЦНИИС и ЧЛХ» Минздрава России.Внедрение результатов исследованияОсновныепреподаваниярезультатыдиссертационнойординаторам,работыврачам-стоматологамвнедренынакурсахвпроцессповышенияквалификации на кафедре Стоматологии ИПО ФГАОУ ВО Первый Московскийгосударственный медицинский университет им.
И.М.Сеченова Минздрава России.Метод молекулярного анализа в форме ПЦР в реальном времени применительно кисследованию поддесневого микробиома внедрен в качестве вспомогательногосредства диагностики в отделении терапевтической стоматологии ФГБУ«ЦНИИС и ЧЛХ» Минздрава России.Личный вклад автора в выполнение работыДиссертантомличновыполненывсенеобходимыемероприятияпопланированию, подготовке и осуществлению исследования: проведен сбор ианализ публикаций по теме; выполнен отбор участников исследования в11соответствиискритериямивключения;проведеноклиническоестоматологическое обследование 150 человек с индексной оценкой состояниятканейпародонта; выполнено комплексное консервативное лечение 100пациентов с ХГП средней и тяжелой степеней, в том числе 50 человек – свключением местной антибактериальной терапии и 50 человек – с применениемфотодинамической терапии; отобрано и исследовано методом ПЦР в реальномвремени1400образцовподдесневоймикрофлоры;сформированыбазыполученных данных в электронном виде и проведена их статистическая обработкас применением непараметрических методов; выполнен анализ полученныхрезультатов; подготовлены тексты диссертации и публикаций; представленырезультаты работы в виде докладов на международных и всероссийскихконференциях.Соответствие диссертации паспорту научной специальностиДиссертациясоответствуетшифруиформулепаспортанаучнойспециальности 14.01.14 – стоматология; области исследований согласно пунктам2, 6; отрасли наук: медицинские науки.ПубликацииПо теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 8 – в журналах,рекомендуемых ВАК (7 статей и 1 тезис).Объем и структура работыДиссертационная работа изложена на 141 странице машинописного текста,состоит из введения, 3 глав, обсуждения результатов исследований, заключения,выводов, практических рекомендаций и списка литературы.
Список литературысодержит 266 источников, из них 96 отечественных и 170 зарубежных авторов.Диссертационная работа содержит 17 таблиц и иллюстрирована 18 рисунками.12Содержание работыМатериал и методы исследованияВ исследовании принимали участие 150 человек без тяжелой соматическойпатологии в возрасте от 35 до 67 лет (53 мужчины и 97 женщин), в том числе 50человек с интактным пародонтом и 100 пациентов с диагнозом «хроническийгенерализованный пародонтит» (К05.31 согласно МКБ 10-С). В общую выборкувходили 53 (35,3%) мужчины и 97 (64,7%) женщин.Согласно регламенту исследования лица с интактным пародонтом (50человек) составляли группу 1 (контрольную), а пациенты с ХГП были разделенына две группы в зависимости от схемы лечения (табл.
1).Группа 2 включала 50 пациентов с ХГП, которым в составе комплексноголечения проводили местную антимикробную терапию с применением геля«Метрогил-Дента» («Юник Фармасьютикал Лабораториз», Индия).Группа 3 включала 50 пациентов с ХГП, которым в комплексное лечениепародонтита была включена местная антимикробная обработка пародонтаметодом фотодинамической терапии.Таблица 1Распределение участников исследования по группамГруппыДиагнозКоличествопациентовПроведенное лечениегруппа 1(контрольная)интактныйпародонтn=50лечение не проводилосьгруппа 2(основная)n=50ХГП среднейстепениn=25комплексное лечение пародонтита сместным применением геля «МетрогилДента» («Юник ФармасьютикалЛабораториз», Индия)группа 3(основная)n=50n=25ХГП тяжелойстепениХГП среднейстепеникомплексное лечение пародонтита сантимикробной фотодинамическойтерапией (фотосенсибилизатор - гель«Гелеофор», источник света – аппарат АФС«Спектр» производства ООО «Лазермедцентр», Россия)n=25n=25ХГП тяжелойстепени13Для достижения цели и выполнения задач работы всем лицам, включенным висследование, было проведено клиническое стоматологическое обследование,рентгенологическое исследование (ортопантомография), исследование методомПЦР в реальном времени на предмет наличия в содержимом десневой бороздки /пародонтальных карманов общей бактериальной ДНК, пяти пародонтопатогенови двух потенциальных пародонтопротекторов (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
