Диссертация (1140426), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Разработать алгоритм клинико-морфологического исследования длядиагностики идиопатическом бесплодия.Научная новизнаВыявленымолекулярно-биологическиеособенностипролиферации,дифференцировки и апоптоза мужских гамет (прежде всего сперматогоний)припатологическомсперматогенезевсравненииснормальнымгаметогенезом в молодом и пожилом возрастах:Впервые доказано, что в сперматогониях при мужском идиопатическомбесплодии на фоне низкой степени пролиферации (Ki-67 – 12.0±0.34%,р<0.05) отмечается увеличение показателей готовности к апоптозу (Bcl-2 –1.0±0.1%; р53 – 40,0±0.44%; р<0.05) в то время, когда закономерностьтечениянормальногосперматогенезадемонстрируетзначительноепреобладание процесса пролиферации над апоптозом у молодых мужчин поданным иммуногистохимического анализа и ПЦР-РВ.Впервыеустановлено,чтовнормесоотношениеактивностииммунофенотипирования клеток на факторы пролиферации и апоптозасперматогенеза меняется в зависимости от возраста: у молодых лицпоказатели пролиферации (Ki-67 – 42.0±0.34%, р<0.05) и апоптоза (caspasa-9– 25.2±0.44%, р<0.05) выше чем у пожилых (Ki-67 – 34.1±0.6%, р<0.05;caspasa-9 – 18.1±0.3%3, р<0.05).
Факторы антиапоптоза также преобладают умолодых мужчин (р53 – 8.1±0.22%, р<0.05; Bcl-2 – 14.1±0.2%, р<0.05).Впервые выявлено, что в сперматогониях при фокальном вариантеСертоли-клеточногосиндрома(гипосперматогенезе,субтотальнойгерминальной аплазии) позитивная реакция на PLAP (ve «+»), в норме8экспрессируемого только в сперматогониях в антенатальном развитии,является характерным для идиопатического бесплодия и указывает наприсутствиевсеменныхканальцахмалодифференцированныхформсперматогоний (гоницитов).В сперматогониях при необструктивной азооспермии впервые показанаотрицательная иммунологическая реакция на антитела к CD117, чтосвидетельствует об отсутствии перспективы вступления их в мейоз.
Впервыеобнаружено, что положительная реакция на CD117 в гаметах мужчинпожилого возраста (начиная со второго (эквационного) мейотическогоделения) на стадии вторичного сперматоцита указывает на снижение уровнейполовой дифференцировки, в отличие от лиц молодого возраста, где данныйфактор выявляется уже на стадии митоза сперматогоний.Впервые доказано, что уровни иммуномечения в сперматогониях на ИФР 1у лиц с идиопатическим бесплодием значительно ниже (7.0±0.22%) илиотсутствует по сравнению со здоровыми мужчинами молодого возраста(40.0±0.33%).Появлениеипоследующее(внутреннего) путиусилениефакторамитохондриальногоапоптоза (каспазы-9) в клетках Сертоли напрямуюзависит от степени поражения семенных канальцев при необструктивнойазооспермиивдинамике:гипосперматогенез→Сертоли-клеточныйсиндром→ тубулярная атрофия.Теоретическая и практическая значимостьПатогенезидиопатическойформымужскогобесплодиясвязанснарушением регуляции сперматогенеза под действием митогенов и факторовроста, цитокинов, гормонов и факторов стресса и реализуется по тремсигнальным путям: МАРК, NF-κB, каскад каспаз.
Передача МАРК (митогенактивирующая протеинкиназа), вызывающая стресс, может приводить кгибели клеток. Транскрипционный фактор клеточного цикла NF-κBзапускаетширокийспектрбиологических9реакций,включаядифференцировку и воспаление. Апоптоз индуцируется активацией каспаз. Врезультате реализации одного из трех путей снижается пролиферация идифференцировка гамет, активируется апоптоз, приводящий к бесплодию.Клинико-морфологический алгоритм диагностики идиопатической формымужскогобесплодиявключаетвсебякомплексморфологических,иммуногистохимических и молекулярных методов исследования. На первомэтапе диагностического поиска при обращении к урологу-андрологуосуществляется:сборанамнеза,физикальныйосмотр,лабораторнаяцитогенетическая и молекулярно-генетическая диагностика, гормональныйстатус.
На втором этапе проводится биопсия яичка, по результатам которойвыставляется предварительный диагноз на основе гистологического анализа.Дляокончательнойверификации,натретьемэтапе,проводятиммуногистохимические реакции (Ki-67, Вcl-2, p53, каспаза-9, PLAP, CD117,IGF-I) и ПЦР-диагностику.Разработаннаясхемаморфометрическойоценки(стандартысперматогенного эпителия и периваскулярной области) сперматогенезарекомендована врачам-патологоанатомам и гистологам-эмбриологам прианализе степени поражения яичек при идиопатической форме мужскогобесплодии.Основные положения, выносимые на защиту:1. Идиопатическая форма мужского бесплодия характеризуется снижениемуровня пролиферации сперматогоний на ранних стадиях (гипосперматогенез,блок созревания) по сравнению с нормальными показателями и полнымотсутствием пролиферации сперматогоний на более поздних стадияхразвитияэтойпатологии(фокальныйвариантСертоли-клеточногосиндрома).
При этом в семенных канальцах наблюдается гипосперматогенезс резким снижением численности сперматогоний и их отсутствие при блокесозревания. В сперматогониях, в которых определяется PLAP-позитивнаяреакция, расцениваются как эмбриональные, а отсутствие мечения на фактор10дифференцировки CD117 указывает на бесперспективность дальнейшегоразвития этих клеток.2.ПатогенезблокагипосперматогенезесозреваниясвязансомужскихполовыхснижениемклетоксодержанияприIGF-Iвсперматогониях.3. Физиологический сперматогенез характеризуется доминированиемпроцессапролиферациисперматогонийнадихапоптозом.Даннаязакономерность присутствует и в популяции первичных сперматоцитов умужчин пожилого возраста, что отличает механизм старения от патогенезаидиопатического бесплодия.4.Клинико-морфологическаядиагностикаидиопатическойформымужского бесплодия должна включать в себя комплекс морфологических имолекулярныхметодовиммуноцитохимический,исследования:биопсияиммуногистохимический(Ki-67,яичек,Bcl-2,p53,каспазы-9, PLAP, CD117, IGF-I), ПЦР-РВ (на гены BAK, BAX, BCL2, BCLW).Степень достоверности и апробация работыДостоверность результатов обусловлена адекватностью сформированныхконтрольных групп в сочетании с достаточным количеством пациентов,отражённыхисследованиивнастоящемисравнениемклиническомрезультатов,ретроспективномполученныхнаучномразличнымигистологическими методами, закреплены предложенными количественнымитестами морфометрии и подтверждены проведённым статистическиманализом.Для анализа микроморфометрических структур – площади межканальцевойсоединительной ткани, извитых семенных канальцев, сперматогенногоэпителия, просвета капилляров, использована программа «Видео-Тест 4.0Морфология».Основные результаты исследования докладывались и обсуждались на: Iсъезде физиологов СНГ (г.
Сочи, 2005 г.); Всероссийской научной11конференции «Человек и лекарство» (г. Москва, 2005 г.); Всероссийскойнаучной конференции «Бабухинские чтения в Орле» (г. Орел, 2006 г.);совместнойнаучнойконференциикафедргистологии,цитологии,эмбриологии лечебного и педиатрического факультетов РГМУ (г. Москва,2009 г.), заседании Учёного совета Факультета социальной медицины ГКАим. Маймонида (г. Москва, 2014 г.); заседании Учёного совета НУЗ НКЦОАО «РЖД» (г. Москва, 2016 г.); семинаре ФГБНУ НИИ Морфологиичеловека РАН (г. Москва, 2016 г.); семинаре в Институте биологии развитияим. Н.К. Кольцова РАН (г. Москва, 2016 г.); «International Conference andExhibition on Cytology & Histology» (Birmingham, UK, 2016); 23rd Meeting ofthe EAU Section of Urological Research (Parma, Italy, 2016); EuropeanAssociation of Urology (EAU), Section of Andrological Urology (ESAU).Scientific Meeting (Turkey, Bodrum, May, 2017).Апробация диссертации состоялась на научной конференции кафедрыпатологической анатомии имени академика А.И.
Струкова Первого МГМУим. И.М. Сеченова «01» «ноября» 2017 года.Личный вклад автораАвтору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования,постановки цели и задач, в их клинико-морфологической реализации.Выполненные морфологическое исследование, анализ и интерпретация,полученных данных ретроспективной научной работы проведены авторомсамостоятельно на базе кафедры патологической анатомии имени академикаА.И.
Струкова лечебного факультета ФГАОУ ВО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова (ректор – академик РАН, д.м.н., профессор П.В. Глыбочко) и вНУЗ «Научный клинический центр ОАО «Российские железные дороги»(директор центра – д.м.н., профессор С.Ю. Шеховцов). При заборебиопсийного материала урологом-андрологом у пациентов, соискательпринималнепосредственноеучастиесцельюразработкинаиболееэффективных разных подходов диагностики мужского идиопатического12бесплодия.Авторомличнобылиосвоеныипримененыметодыиммуногистохимического анализа; компьютерного моделирования структуряичка, проведено исследование морфофункционального состояния яичекусловно здоровых мужчин разных возрастов (контрольная группа) истрадающихбесплодием,лабораторныхдляисследованийсравненияпациентов;срезультатамиматематическаяклиникообработкаполученных данных; выбор и описание иллюстративного материала,написание выводов и практических рекомендаций.
Вклад автора являетсяопределяющимпубликацияхиопределённыемужскоговобсужденииихвнедрениярезультатоввпатогенетическиебесплодия,аисследованияпрактику.механизмытакжеАвторомвнаучныхустановленыидиопатическойиммунофенотипическиеформыпризнакиинтраорганной регуляции сперматогенеза в норме.Публикации результатов работыОсновное содержание диссертации отражено в 12 научных работахсоискателя, в том числе в 9 статьях в журналах, рекомендованных ВАКМинобрнауки России, 2 из которых индексируемы SCOPUS, а также 1 тезисна английском языке в журнале, индексируемом SCOPUS.Объём и структура диссертацииДиссертационная работа состоит из введения, обзора литературы,описания материалов и методов, собственных результатов и их обсуждения,заключения, выводов и списка литературы, включающего 145 источниковотечественных (38) и зарубежных (107) авторов. Материалы диссертацииизложены на 141 странице машинописного текста и иллюстрированы 57микрофотографиями, 16 графиками, 24 таблицами, а также приложение (7страниц иллюстративного материала).Внедрение результатов диссертации в практикуРезультаты исследований используются при диагностики идиопатическихформ мужского бесплодия в Центральном патологоанатомическом отделении13ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
