Автореферат (1140425), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Факторы антиапоптоза также преобладают у молодых мужчин (р53 –17.2±0.33%, р<0.05; Bcl-2 – 43.2±0.44%, р<0.05).Впервые выявлено, что в сперматогониях при фокальном варианте Сертоликлеточного синдрома (гипосперматогенезе, субтотальной герминальной аплазии)позитивная реакция на PLAP (ve «+»), в норме экспрессируемого только всперматогонияхвантенатальномразвитии,являетсяхарактернымдляидиопатического бесплодия и указывает на присутствие в семенных канальцахмалодифференцированных форм сперматогоний (гоницитов).В сперматогонияхотрицательнаяпринеобструктивнойиммунологическаяазооспермииреакциянавпервые показанаантителакCD117,чтосвидетельствует об отсутствии перспективы вступления их в мейоз.
Впервыеобнаружено, что положительная реакция на CD117 в гаметах мужчин пожилоговозраста (начиная со второго (эквационного) мейотического деления) на стадиивторичногосперматоцитауказываетнаснижениеуровнейполовойдифференцировки, в отличие от лиц молодого возраста, где данный факторвыявляется уже на стадии митоза сперматогоний.Впервые доказано, что уровни иммуномечения в сперматогониях на IGF-I у лиц сидиопатическим бесплодием значительно ниже (гипосперматогенез – 7.0±0.1%,р<0.05; блок созревания – 5.3±0.6%, р<0.05) или отсутствует по сравнению создоровыми мужчинами молодого возраста (40.0±0.33%, р<0.05).Появление и последующее усиление фактора митохондриального (внутреннего)путиапоптоза (каспазы-9) в клетках Сертоли напрямую зависит от степенипоражения семенных канальцев при необструктивной азооспермии в динамике:гипосперматогенез→ Сертоли-клеточный синдром→ тубулярная атрофия.Теоретическая и практическая значимость8Теоретическая значимость ретроспективного исследования заключается в том,патогенез идиопатической формы мужского бесплодия связан с нарушениемрегуляциисперматогенеза,приводящиекснижениюпролиферацииидифференцировки гамет и увеличению уровня апоптоза при участии такихрегуляторных белков, как Ki-67, Bcl-2, p53, caspasa-9, PLAP, CD117, IGF-I.Предложен клинико-морфологический алгоритм диагностики идиопатическойформы мужского бесплодия, который включает в себя комплекс морфологических,иммуногистохимических и молекулярных методов исследования.
На первом этапедиагностического поиска при обращении к урологу-андрологу осуществляется:сборанамнеза,физикальныйосмотр,лабораторнаяцитогенетическаяимолекулярно-генетическая диагностика, исследование гормонов. На втором этапепроводится биопсия яичка, по результатам которой выставляется предварительныйдиагноз по данным гистологического анализа. Для окончательной верификации, натретьем этапе, проводят иммуногистохимические реакции (Ki-67, Вcl-2, p53,каспаза-9, PLAP, CD117, IGF-I) и ПЦР-диагностику.Методология и методы исследованияДляретроспективногоисследованияиспользованбиопсийныйматериал,полученный от 30 мужчин (22 – 35 лет), страдающих первичным бесплодием, атакже секционный материал от мужчин 22 – 35 (n=10) и 64 – 75 (n=10) лет.
Объектисследования – яички изучали при световой микроскопии (совмещая свидеокамерой).Методы:клинико-инструментальные(ультразвуковоеисследование), лабораторные (гормоны: ФСГ, ЛГ, тестостерон; спермограмма сMAR-тестом),цитогенетическаяимолекулярно-генетическаядиагностика;гистологический, гистохимический, иммуногистохимический с последующейстатистической обработкой фото и видео IT цифрового материала.Степень достоверности и апробация работыДостоверностьрезультатовобусловленаадекватностьюсформированныхконтрольных групп в сочетании с достаточным количеством пациентов,отражённых в настоящем клиническом ретроспективном научном исследовании исравнением результатов, полученных различными гистологическими методами,9закрепленыпредложеннымиколичественнымитестамиморфометриииподтверждены проведённым статистическим анализом.Основные результаты исследования докладывались и обсуждались на: I съездефизиологов СНГ (г.
Сочи, 2005 г.); Всероссийской научной конференции «Человеки лекарство» (г. Москва, 2005 г.); Всероссийской научной конференции«Бабухинские чтения в Орле» (г. Орел, 2006 г.); совместной научной конференциикафедр гистологии, цитологии, эмбриологии лечебного и педиатрическогофакультетов РГМУ (г. Москва, 2009 г.), заседании Учёного совета Факультетасоциальной медицины ГКА им. Маймонида (г. Москва, 2014 г.); заседании Учёногосовета НУЗ НКЦ ОАО «РЖД» (г. Москва, 2016 г.); семинаре ФГБНУ НИИМорфологии человека РАН (г. Москва, 2016 г.); семинаре в Институте биологииразвития им. Н.К.
Кольцова РАН (г. Москва, 2016 г.); «International Conference andexhibition on cytology and histology» (Birmingham, UK, 2016); 23rd meeting of theEAU section of Urological research (Parma, Italy, 2016); European association ofUrology (EAU), section of Andrological urology (ESAU). Scientific meeting (Turkey,Bodrum, 2017).Апробациядиссертациисостояласьнанаучнойконференциикафедрыпатологической анатомии имени академика А.И. Струкова Первого Московскогогосударственного медицинского университета им. И.М. Сеченова (СеченовскийУниверситет) «01» «ноября» 2017 года.Личный вклад автораАвтору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования,постановкицелиВыполненныеизадач,вморфологическоеихклинико-морфологическойисследование,анализиреализации.интерпретация,полученных данных ретроспективной научной работы проведены авторомсамостоятельно.
При заборе биопсийного материала урологом-андрологом упациентов, соискатель принимал непосредственное участие с целью разработкинаиболее эффективных разных подходов диагностики мужского идиопатическогобесплодия.Авторомличнобылиосвоеныипримененыметодыиммуногистохимического анализа; компьютерного моделирования структур яичка,проведеноисследованиеморфофункционального10состоянияяичекусловноздоровых мужчин разных возрастов (контрольная группа) и страдающихбесплодием, для сравнения с результатами клинико-лабораторных исследованийпациентов; математическая обработка полученных данных; выбор и описаниеиллюстративного материала, написание выводов и практических рекомендаций.Вклад автора является определяющим в обсуждении результатов исследования внаучных публикациях и их внедрения в практику.
Автором установленыопределённые патогенетические механизмы идиопатической формы мужскогобесплодия, а также иммунофенотипические признаки интраорганной регуляциисперматогенеза в норме.Внедрение результатов диссертации в практику.Результаты исследований используются при диагностики идиопатических форммужского бесплодия в Центральном патологоанатомическом отделении ФГАОУВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, при чтении лекций и проведениипрактических занятий на кафедре патологической анатомии им. академика А.И.Струкова.Публикации результатов работыОсновное содержание диссертации отражено в 12 научных работах соискателя, втом числе в 9 статьях в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки России, 2из которых индексируемы SCOPUS, а также 1 тезис на английском языке вжурнале, индексируемом SCOPUS.Объём и структура диссертацииДиссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описанияматериалов и методов, собственных результатов и их обсуждения, заключения,выводов и списка литературы, включающего 145 источников отечественных (38) изарубежных (107) авторов.
Материалы диссертации изложены на 141 страницемашинописного текста и иллюстрированы 57 микрофотографиями, 16 графиками,24 таблицами, а также приложение (7 страниц иллюстративного материала).Соответствие диссертации паспорту научной специальностиДиссертация соответствует паспорту научной специальности 14.03.02. –Патологическая анатомия, а также области исследования согласно пунктам 1, 2, 3,и 4.11СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериал и методыРетроспективное исследование проводили на базах: ФГАОУ ВО Первый МГМУим.
И. М. Сеченова, кафедра патологической анатомии имени академика А. И.Струкова (заведующая кафедрой – д.м.н., профессор Е.А. Коган); НУЗ НКЦ ОАО«РЖД», урологический центр (руководитель – д.м.н., профессор О.В. Теодорович).Исследуемый материал представлен двумя группами:I. – группа с условным контролем физиологического течения сперматогенеза, всемейном анамнезе – одно и более деторождений (возрастная выборка проводиласьпо Г.Г. Автандилову, 1998; A.C. Леонтюк с соавт., 2000): А – мужчины 22–35 лет(28.5±6.5, n=10); Б. – мужчины 64–75 лет (69.5±5.5, n=10).
Объектом исследованияв этой группе служил аутопсийный материал правых яичек, полученные приранних вскрытиях трупов мужчин (не более 6 часов после констатациибиологической exitus letalis). Яички исследовались макроскопически на предметналичия/отсутствия воспалительного и/или опухолевого процесса.Во II группу были включены мужчины зрелого возраста 22–35 лет (28.5±6.5) склинически (и морфологически) подтверждённым диагнозом идиопатическогобесплодия (азооспермия) (n=30).
Объектом исследования в этой группе служилибиоптаты правых яичек. Медицинскими показаниями для получения биоптатовяичек была азооспермия.Клиническийматериал(биоптатыяичеку30мужчин,страдающихидиопатическим бесплодием) были получены при биопсии под местной анестезией(Клиника урологии им. Р.М. Фронштейна Первого МГМУ им. И. М. Сеченова,урологический центр НКЦ ОАО «РЖД», клиника «Мать и дитя»). Причинойобращениявфертильностимедицинские(первичноеучреждениябесплодие)пациенты(n=24),аназывалитакженарушениеневынашиваниябеременности, неудач экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионовили неудач интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ICSI) (n=6).Изначально было обследовано 50 мужчин, обратившихся на приём к урологамандрологам с проблемами фертильности (возраст 22 – 35 лет). Из дальнейшегоисследованиябылиисключены2012пациентов(критерииисключения):отягощённый лекарственный анамнез (n=4; андрогены или анти-эстрогены),системныезаболевания(n=9),хромосомныетранслокации(n=1),гипогонадотропный гипогонадизм (n=6), а также другие эндокринные заболевания,ведущиекснижениюсекрециитестостерона:гипотиреоз,тиреотоксикоз,гиперпролактинемия (определяется на основании уровней тиреотропного гормона,свободного тироксина Т4, пролактина), декомпенсация сахарного диабета,гиперкортицизм,атакжепочечнаяилипеченочнаянедостаточность,воспалительные заболевания урогенитального тракта в стадии обострения.Все исследования проведены с соблюдением требований протокола № 10-16 от09.11.16, одобренного Этическим комитетом ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
