Автореферат (1139675), страница 6
Текст из файла (страница 6)
В то же время, соединение 39D малоактивно в отношении P.aeruginosa. Соединение с лабораторным шифром 39D не уступает поактивностипрепаратамсравнениядиоксидину,нитрофурантоину,фосфомицинуимирамистину.При внутрибрюшинном введении соединения с лабораторным шифром 39D показательострой токсичности при внутрибрюшинном введении колебался от 331 до 541 мг/кг.Токсичность вещества не зависела от вида и пола лабораторных животных. Привнутрижелудочном введении мышам наблюдали закономерный рост показателя ЛД 50 до 642850 мг/кг. При накожном нанесении исследуемого соединения в максимально возможнойконцентрации пирролохинолон 39D не вызывал гибель животных.
Соединение относится кумеренно токсичным веществам.24В группе наиболее перспективных соединений, полученных на основе 6-аминоиндолов,и отобранных для биологического этапа исследования, противомикробную активностьпроявили вещества с лабораторными шифрами 243D, S3 и 7D. Соединение S3 высокоактивно вотношении грамотрицательных микроорганизмов, в том числе P.aeruginosa. Обладаетспособностью подавлять рост и размножение грамположительных микроорганизмов. Амид S3активен в отношении антибиотикоустойчивых штаммов S.aureus, в том числе MRSA штамма,E.coli и P.aeruginosa.Соединение с лабораторным шифром 7D также активно в отношении кишечной палочкии некоторых других грамотрицательных микроорганизмов.
Циклический амид 7D активен вотношении антибиотикоустойчивых штаммов S.aureus, в том числе MRSA штамма, E.coli иB.cereus, а также подавляет рост и размножение M.tuberculosis. Соединения с лабораторнымишифрами S3 и 7D не уступают по активности препаратам сравнения диоксидину,нитрофурантоину, фосфомицину и мирамистину. Соединение 243D обладает низкойпротивомикробной активностью и узким спектром противомикробного действия.Таблица 2 – Показатели МПК исследуемых соединений в отношении тест-штаммовмикроорганизмов№Шифрп/писследуемогосоединения12ДляДляДляДляДля P.aeruginosaS.aureusS.pyogenesE.coliB.cereus27853,29213,1238,25922,96,мкг/млмкг/млмкг/млмкг/млмкг/мл3456716D≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250217≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250≤ 25035D7,831,2512562,5≤ 25043D≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250≤ 25052D≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250664 D≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250732 D≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250843 D12562,5≤ 250125≤ 2509243 D125125≤ 250250≤ 25010235 D12562,525062,52501166 D125125≤ 250250≤ 25025123456Продолжение71239 D31,2531,25250125≤ 25013S362,525031,2525062,5147D12525062,562,5≤ 25015HD59117108117184161D≤ 250125≤ 250125≤ 250174D125125125125≤ 25018КПХ≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250≤ 25019ТФПХ≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250≤ 250Таблица 3 – Показатели МПК исследуемых соединений в отношении опытных штаммовмикроорганизмов№ШифрДляДляДляДляДляп/писследуемогоStaphylococccusStreptococcusE.coli,B.cereus,P.aeruginosa,соединенияspp., мкг/млspp., мкг/млмкг/млмкг/млмкг/мл125-100064-10008-250-125-10001-1002-1002-300--1Диоксидин2Нитрофурантоин3Фосфомицин0, 5-5002-2500,5-250-0,5-5004Мирамистин1,0-1001,0-1002,0-5001,0-1002,0-50055D3,9-50031,25-75062,5-100062,5-1000≤ 250643 D250-100062,5-1000≤ 500125-1000≤ 5007243 D250-1000125-750≤ 500250-1000≤ 5008235 D125-100062,5-1000250-100062,5-750500-1500966 D125-1000125-1000≤ 500125-1000≤ 5001039 D31,25-100015,6-750500-1500125-750≤ 50011S331,25-1000125-100031,25-500250-100062,5-1000127D62,5-1000250-100031,25-50062,5-500≤ 50013HD14,25-100028,5-100059,0-1000117-1000184-1000141D≤ 50062,5-1000≤ 500117-1000≤ 500154D125-100062,5-1000125-1000125-1000500-150026При внутрибрюшинном введении соединения с лабораторными шифрами S3 и 7Dпроявляли свойства умеренно токсичного вещества, тогда как при внутрижелудочном введениикрысам и накожном нанесении в максимально возможном объеме и максимально возможнойконцентрации для данных способов введения соединения S3 и 7D не вызывали гибельэкспериментальных животных, вследствие чего определение средней смертельной дозы непредставлялось возможным.По совокупности полученных результатов, изучаемые соединения с лабораторнымишифрами S3 и 7D относятся к практически нетоксичным веществам.Группа соединений, полученных на основе замещенных 7-аминоиндолов, наиболееперспективная по результатам скринингового этапа исследования, показала различнуюпротивомикробную активность.
Наиболее активными оказались соединения с лабораторнымишифрами HD и 4D, проявившие широкий спектр действия и способны задерживать рост иразмножение грамположительных, в том числе M.tuberculosis, и грамотрицательныхмикроорганизмов. Циклический амид HD в дозе от 117 мкг/мл способен подавлять рост иразмножение P.aeruginosa. Изучаемый циклический амид HD активен в отношенииантибиотикоустойчивых штаммов S.aureus, E.coli и P.aeruginosa. Соединения с лабораторнымишифрами HD и 4D не уступают по активности препаратам сравнения диоксидину,нитрофурантоину, фосфомицину и мирамистину.В рамках исследования биологических свойств была исследована острая токсичность 6гидрокси-2,3-диметил-6-(трифторметил)-1,6,7,9-тетрагидро-8H-пирроло[3,2-h]хинолина-8-она(HD) и 1,2,3,9-тетраметил-6-(трифторметил)-1,9-дигидро-8H-пирроло[3,2-h]хинолин-8-он (4D).Как и амид S3 и циклический амид 7D, исследуемые вещества проявили умеренныетоксические свойства при внутрибрюшинном введении.
При этом токсичность привнутрижелудочном введении и накожном способе нанесения для крыс определить не удалосьпо объективным причинам.Полученные результаты изучения острой токсичности, в частности, невозможностьустановить показатель ЛД50 при внутрижелудочном введении на фоне определяемойтоксичности при внутрибрюшинном введении указывают на то, что ряд производных невсасывается при приеме внутрь и для них создание пероральных лекарственных форм сожиданием развития резорбтивного эффекта – бесперспективно.На основании изложенных рассуждений для дальнейшего углубленного изученияспектра противомикробной активности, механизмов антимикробного действия, эффективностина моделях экспериментальных инфекций в опытах in vivo нам необходимо было отобрать 3-4наиболее перспективных вещества.
Для решения этого вопроса мы воспользовалисьфункциональными возможностями метода бинарной логистической регрессии, который27позволяет учесть вклад отдельных факторов в формирование общего эффекта кандидата влекарственное средство.На основе расчета показателей отношения шансов для коэффициента предикцииактивности (Ра), значения среднего межгруппового показателя ЛД50 (среднее значение длясамцов и самок мышей), активности в отношении грамположительных и грамотрицательныхмикроорганизмов построили ROC-кривую уравнения бинарной логистической регрессии,представленную на рисунке 1.Рисунок 1 – ROC-кривые для изученных показателей активности соединенийВ таблице 4 представлены значения основных параметров кривой для изученныхпоказателей.Анализ показателей, изображенных на ROC-кривой, показал, что они являютсячувствительными индикаторами для выделения наиболее перспективных фармакологическихагентов по совокупности и оптимальному сочетанию критериев противомикробной активностии безопасности.28Таблица 4 – Значения показателей ROC-кривой для критериев, характеризующихбезопасность и противомикробную активность потенциальных химиотерапевтическихлекарственных средствДоверительный ЧувствительностьПоказательРаAUCSEpинтервал на–95% уровнеСпецифичность,значимости(%)0,6750,0320,0370,517-0,83473,6 – 65,90,6600,0240,0430,505-0,81487,3 – 45,90,6690,0410,0320,514-0,82376,4 – 48,4ЛД50 привнутрибрюшинномвведенииАнти Гр(+)/Гр(-)активностьПримечание: AUC – площадь под кривой; SE – среднеквадратичное отклонение; значения рменее 0,05 имеют статистическую значимостьТаким образом, используя вышеописанный математический подход, нам удалосьвыявить вещества, наиболее перспективные для последующего изучения: циклические амиды5D, 7D, HD и нециклический амид S3.Закономерности зависимости противомикробной активности от структуры молекулы ихарактера заместителей в исследуемых индолиламидах и пирролохинолонахНаряду с вышеуказанным, при исследовании зависимости биологической активностииндолиламидов, енаминокетонов, пирролохинолонов от их элементного состава и строениянами доказано, что полученный и исследованный новый класс противомикробных соединенийвесьма перспективен, поскольку их основой являются структуры метаболитов, встречающиесяв некоторых живых организмах.
Известно, что индольная и пирролохинолиновая системыявляются структурными элементами молекул многих природных соединений.Противомикробная активность, полученных и изученных производных аминоиндолов ипирролохинолонов, на основе анализа результатов наших исследований и литературныхданных, обусловлена боковой цепью молекул.Обнаружено,чтопротивомикробнойактивностьюобладаютN-индолиламиды,полученные из замещенных 4-, 5-, 6-, 7-аминоиндолов и трифторацетоуксусного эфира,29имеющие трифторметильный заместитель в амидной части молекулы (5D, HD, 235D, 43D, S3,7D, 66D, 243D, 4D).Обнаруженная активность N-индолилтрифторацетоацетиламидов определяется тонкойструктуроймолекул.Излитературныхданныхизвестно,чтоважнымиклассамиантимикробных препаратов являются спирты и амиды, т. е.
соединения содержащие НО- илиО=С-NH-функции. Этим требованиям отвечают, полученные и исследованные нами,циклические амиды HD, 5D, 7D, в молекулах которых имеются как закрепленнаягидроксильная, так и амидная группы. Действительно эти соединения по сравнению с другимипоказывают наибольшую противомикробную активность.Активность нециклических амидов зависит от характера замещения в бензольном ипиррольном кольцах индольной системы, а также положения амидной группировки.Спектрами ЯМР1Н установлено в растворе ДМСО (димексид) индолиламидынециклического строения образуют равновесную систему, состоящую из четырех возможныхтаутомеров: a, b, c, d.HNOOHNF3COaHOIndIndF3CNHONIndF3COHbOHcIndF3COdИсходя из структур, наиболее активными должны быть таутомеры b, имеющие, как ициклические амиды, гидроксильную и амидную группы. Поэтому большую активностьследовало ожидать от соединений в молекулах которых замещенный индольный фрагментспособствует стабилизации b таутомерной формы.
Из общих закономерностей распределенияэлектронной плотности дестабилизирующим фактором для существования амидного фрагментав b форме является электронно-донорное влияние замещенного индолильного радикала, причемэто влияние больше в индолил-5-амидах, чем в амидах, на основе замещенных 6-аминоиндолов.Действительно более высокую активность в этом ряду показывают амиды на основезамещенных 6-аминоиндолов, например, S3 по сравнению с индолил-5-амидами (3D, 235D, 43Dи др.), что связано, по-видимому, с более высокой концентрацией b форм в растворах ДМСОравновесной системы.Как для производных 5-, так и для 6-индолиламидов противомикробная активностьусиливается с введением в α-положение пиррольного кольца индола фенильного заместителя.Это объясняется как некоторым электронно-акцепторным влиянием фенильной группы, так иувеличением длины цепи сопряжения b таутомерной формы молекулы, что способствует еестабилизации и увеличению концентрации в растворе ДМСО.30OHNHN* *O*HO*NHO CF3HH(CH3)(CH3)****N * ****H(CH3)**CF3 **H(CH3)bbHHON** ****** ********HO CF *N**3****H *H(CH3)(CH3)cНаличие или отсутствие метильных групп в индольном фрагменте амидов не вносятсущественного изменения противомикробной активности, т.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
