Автореферат (1139675), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Новый способопределения противомикробного действия (бактериостатическое или бактерицидное) основаннавычислениикоэффициентакультивированияоптическоймикроорганизмовсплотностикультуральнойпротивомикробнымисредысоединениямиввходежидкойпитательной среде. Преимущества способа заключаются в быстром и качественномопределениитипапротивомикробногодействиябиологическиактивныхсоединений,использование небольшого количества питательной среды при достаточно коротком временноминтервале, составляющем 24 ч.Новизна способа состоит в разработке опытным путем формулы расчета и определениипоказателей коэффициента оптической плотности культуральной среды, соотносящиеся сбактериостатическим типом действия и бактерицидным типом действия исследуемыхсоединений.Способ определения типа противомикробного действия новых соединений, обладающихантимикробной активностью, включает проведение исследования оптической плотностикультуральной жидкости в объеме 1 мл в стерильных кюветах при длине волны 600 нм, далеезависимость оптической плотности нового соединения со штаммом бактерий Staphylococcusaureus 6538-P обнуляется по показателям оптической плотности исследуемого соединения.Определяется оптическая плотность культуральной среды в присутствии штамма бактерийStaphylococcus aureus 6538-P, культивируемого при МПК в объеме 1 мл и при двух-, четырех- ишестикратном увеличении МПК исследуемого соединения.
Определяется оптическая плотностькультуральной среды с исследуемым микроорганизмом при культивировании без исследуемогосоединения. На основе полученных показателей вычисляется коэффициент оптическойплотности культуральной среды по формуле (1):KD =D1 + D2 + D3n+ Dn100,(1)где КD – коэффициент оптической плотности культуральной среды,D–оптическаяплотностькультуральнойжидкостиприкультивированиимикроорганизмов в присутствии различных концентраций противомикробного соединения,n – количество исследованных концентраций соединения.Показатель КD с исследуемым соединением более 1 свидетельствует, что исследуемоесоединение обладает бактериостатическим типом действия в отношении исследуемого36микроорганизма, если менее 1 – исследуемое соединение обладает бактерицидным типомдействия в отношении исследуемого микроорганизма.Для препаратов сравнения с доказанным бактерицидным и бактериостатическимдействием был рассчитан показатель КD.Показатель КD с ампициллином оказался менее 1 (формула 2), это свидетельствует о том,что противомикробный препарат обладает бактерицидным типом действия в отношенииStaphylococcus aureus 6538-P АТСС.0,003 + 0,0029 + 0,003 + 0,0028100 = 0,293(2)4Показатель КD с азитромицином более 1 (формула 3), следовательно, противомикробныйKD =препарат обладает бактериостатическим типом действия в отношении Staphylococcus aureus6538-P АТСС.KD =0,018 + 0,014 + 0,010 + 0,007100 = 1,234(3)Показатель КD с исследуемыми соединениями составлял более 1.Например, показатель КD с циклическим амидом HD в отношении Staphylococcus aureus6538-P АТСС (формула 4).KD =0,030 + 0,019 + 0,011 + 0,005100 = 1,6254(4)Показатель КD с амидом 7D в отношении Staphylococcus aureus 6538-P АТСС (формула5).0,060 + 0,030 + 0,012 + 0,004100 = 2,65(5)4Это свидетельствует о том, что исследуемые соединения, синтезированные на основеKD =замещенных4-,5-,6-,7-аминоиндоловобладаютбактериостатическимтипомпротивомикробного действия в отношении исследуемых микроорганизмов.
С помощью новогоспособа определения типа противомикробного действия подтверждено бактериостатическоедействие исследуемых соединений, изученное с помощью классической методики привоздействии исследуемых соединений в физиологическом растворе при комнатной температуреи коротких экспозициях.37Исследование противомикробной активности исследуемых соединений на моделиэкспериментальной хирургической раневой инфекции, вызванной грамположительными играмотрицательными микроорганизмами в условиях in vivoИсследования на модели экспериментальной хирургической раневой инфекции in vivoбыли проведены для оценки эффективности местного применения исследуемых соединений, слабораторными шифрами 5D, 7D, S3 и HD, против экспериментальной раневой инфекции умышей, вызванной прямой инокуляцией S.aureus и соединений, с лабораторными шифрами S3и HD, против экспериментальной раневой инфекции у мышей, вызванной прямой инокуляциейP.aeruginosa, в поверхностные хирургические раны.
Исследуемые микроорганизмы наиболеечасто являются возбудителями раневых инфекций у человека. На этой модели исследуемыештаммы S.aureus и P.aeruginosa хорошо размножались в тканях кожи экспериментальныхмышей и сохранялись в большом количестве в ранах в отсутствие эффективной терапии(таблицы 5, 6).Местное лечение исследуемыми соединениями, растворенными в глицерине, приводилок сокращению числа жизнеспособных микроорганизмов в ранах значительно раньше, чемможно было бы ожидать при естественном заживлении необработанных ран, что приводило кэлиминации бактерий из инфицированной ткани (рисунки 4, 5).Исследуемыесоединенияэффективнопрепятствовалираспространениюмикроорганизмов в подлежащие ткани и генерализации инфекционного процесса.
Исследуемыесоединения были столь же эффективны в устранении S.aureus и P.aeruginosa и ускорялизаживление зараженных ран, как и препарат сравнения диоксидин, хорошо зарекомендовавшийсебя, как средство для местного лечения кожных инфекций.Эффективность изучаемых соединений в отношении экспериментальных микробныххирургическихраневыхинфекций,продемонстрированнаявэтомисследовании,свидетельствует о противомикробной активности при местном применении.В целом, антибактериальные свойства исследуемых индолиламидов in vitro и in vivoподдерживают использование этих новых противомикробных соединений в качестве местныхантибактериальных агентов.38P.aeruginosa АТСС 27853S.aureus АТСС 4330010871070710706106051050410403103021020110100 01 день2 день3 день4 день5 день6 день7 деньКоличество микроорганизмов, КОЕ/ранаКоличество микроорганизмов, КОЕ/рана80День после инфицированияКонтрольДиоксидин5D6106051050410403103021020110100 01 день2 день3 день4 день5 день6 день7 деньДень после инфицирования7DS3HDКонтрольДиоксидинS3HDРисунок 4 – Количественные показателиРисунок 5 – Количественные показателимикроорганизмов в инфицированных ранах в процессемикроорганизмов в инфицированных ранах в процессеформирования экспериментальных хирургических ран,формирования экспериментальных хирургических ран,инфицированных S.aureus (метод поверхностныхинфицированных P.aeruginosa (метод поверхностныхсмывов)смывов)39Таблица 5 – Динамика показателей среднего микробного числа в ранах, инфицированныхS.aureus, на фоне лечения исследуемыми соединениями (метод поверхностных смывов)ДеньСреднее значение микробного числа в смывах с ран, Log КОЕ/рана(±m)*послеКонтрольДиоксидининфици-ЦиклическийАмид S3амид 5 DЦиклическийЦиклическийамид 7Dамид HDрования123456717,15±1,4-----27,68±1,56,66±1,65,37±0,76,19±1,36,85±0,85,99±1,337,92±2,15,98±0,74,94±1,65,98±2,06,03±2,25,82±0,947,89±3,05,87±1,34,52±1,65,75±0,95,83±1,45,38±2,157,86±2,04,85±0,54,26±2,14,93±1,55,32±2,44,94±1,567,82±1,04,41±2,13,74±0,84,54±0,54,93±0,94,21±1,377,75±1,43,79±1,32,87±0,53,75±1,33,88±0,53,86±2,1105,43±0,4-----142,93±2,4-----* – среднее отклонение.Таблица 6 – Динамика показателей среднего микробного числа в ранах, инфицированныхP.aeruginosa, на фоне лечения исследуемыми соединениями (метод поверхностных смывов)День послеСреднее значение микробного числа в смывах с ран, Log КОЕ/рана(±m)*инфицированияКонтрольДиоксидинАмид S3Циклический амид HD16,4±1,4---26,94±1,55,9±1,35,92±2,25,99±1,335,91±2,15,35±1,35,76±1,25,82±0,945,78±3,04,97±2,14,98±0,65,38±2,155,76±2,04,69±1,34,86±1,14,94±1,565,81±1,04,27±1,54,57±0,74,78±0,775,88±1,43,81±0,73,91±2,33,86±2,1104,21±2,5---143,82±1,0---* – среднее отклонение.40Выводы1.
Реализованы синтетические возможности использования в качестве исходных соединений 16замещенных 4-, 5-, 6-, 7-аминоиндолов и синтезирована серия из 32 индолиламидов, енаминов ипирролохинолонов, для 18 (соединения с лабораторными шифрами 17, 6D, 5D, 39D, 2D, 3D,32D,64D,43D,235D,66D,243D,7D,S3,HD,1D,4D,ТФПХ)изкоторыхвнеэкспериментальный прогноз наличия противомикробной активности в фармакологическомспектре составил более 50 % (Ра более 0,500 вне зависимости от вероятности и прогнознойстепени токсичности).2.Полученныеновыесоединения,наосновезамещенного2-фенил-4-аминоиндола(циклический амид с лабораторным шифром 5D), замещенных 5-аминоиндолов (нециклическиеамиды с лабораторными шифрами 43D, 66D, 235D и пирролохинолон 39D), замещенных 6аминоиндолов (нециклические амиды с лабораторным шифром 243D, S3 и циклический амид7D) и замещенных 7-аминоиндолов (циклический амид с лабораторным шифром HD,пирролохинолоны 1D и 4D), способны оказывать в диапазоне МПК 3,9-1500 мкг/млнеблагоприятное воздействие на рост и размножение прокариотических микроорганизмов.3.
Выявлены амиды и пирролохинолоны, полученные на основе замещенных 4-, 5-, 6-, 7аминоиндолов(лабораторныешифры5D,39D,S3,7D,HD,4D),обладающиепротивомикробной активностью в диапазоне МПК 3,9-1000 мкг/мл и широким спектромантимикробного действия.4. Наиболее активные амиды, полученные на основе замещенных 4-, 6- и 7-аминоиндолов(лабораторные шифры 5D, S3, 7D, HD) являются практически нетоксичными соединениям(класс токсичности III-IV) при различных путях введения в условиях in vivo (диапазон LD50 5961753 мг/кг при внутрибрюшинном введении, 751-1994 мг/кг – при внутрижелудочном, принакожном – более 5000 мг/кг).5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
