Автореферат (1139663), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Е.И.Марциновского ГБОУ ВПО Первого•МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава РФ в проведении учебных курсов ВОЗи Минздрава РФ по эпидемиологическому надзору за паразитарнымиболезнями;Проведенные исследования являются результатом многолетнегонаучного сотрудничества медицинских учреждений стран СНГ: РоссийскойФедерации, Кыргызской Республики, Республики Узбекистан и РеспубликиТаджикистан.Внедрение материалов исследований в практику:Разработанный метод ПЦР-диагностики малярии внедрен в практикуРеференс-центра по мониторингу за малярией, лейшманиозам и филяриозам(приказ Министерства здравоохранения РФ от 17.03.2008 №88) попаразитарным заболеваниям, функционирующего на базе НИИ МПиТМ им.Е.И.Марциновского ГБОУ ВПО Первого МГМУ им.
И.М.СеченоваМинздрава РФ.Материалыдиссертациивключенывметодическиеуказания:«Профилактика дирофиляриоза» МУ 3.2.1880-04, 2004 г., «Санитарнопаразитологический анализ воды» МУК 4.2.2314-08, 2008 г., СанитарнопаразитологическиерастительнойисследованияпродукцииМУКплодоовощной,4.2.3016-12,72012плодово-ягоднойг.,и«Лабораторнаядиагностика гельминтозов и протозоозов» МУК 4.2.3145-13, 2014 г.,«Профилактика энтеробиоза» Санитарно-эпидемиологические правила СП3.2.3110-13, 2014 г. и«Лабораторная диагностика малярии и бабезиоза»МУК 4.2.3222-14, 2014 г.Результаты диссертационного исследования опубликованы в разделесправочника «Методики клинических лабораторных исследований» том 3под ред.
В.В.Меньшикова, Москва, 2009 г. и в разделе практическогоруководства «Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней»под ред. Г.Г.Онищенко и В.В.Кутырева, Москва, 2013 г.Основные положения диссертации вошли вспециализированныйраздел Практического руководства «Стандарты и алгоритмы мероприятийпри инфекционных и паразитарных болезнях» Алма-Ата, Казахстан, 2008 г.Апробация результатов исследованияОсновные положения диссертации были доложены на:I международной конференции «Молекулярная медицина ибиобезопасность», Москва, 26-28 октября 2004 годаIXсъездеВсероссийскогонаучно-практическогообществаэпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, 26-28 апреля 2007годаVIIВсероссийскойнаучно-практическойконференциисмеждународным участием «Молекулярная диагностика – 2010», Москва, 2426 ноября 2010 годаВсероссийскойконференции«Актуальныеаспектыпаразитарных заболеваний в современный период», Ростов-на-Дону, 28-29сентября 2011 годаVIIIВсероссийскойнаучно-практическойконференциисмеждународным участием «Молекулярная диагностика – 2014», Москва, 1820 марта 2014 года8Научно-практической конференции с международным участием«Современные вопросы медицинской паразитологии и инфекционныхзаболеваний», Самарканд, Республика Узбекистан, 28-29 октября 2014 годаII Всероссийской конференции с международным участием«Социально-значимые и особо опасные инфекционные заболевания», Сочи,02-05 ноября 2015 годаXIX форуме «Национальные дни лабораторной медицины –2015», Москва, 23-25 сентября 2015 годаXXIIIРоссийскомнациональномконгрессе«Человекилекарство», Москва, 11-14 апреля 2016 годаXVI семинаре-конференции проекта 5-100, Москва, 06-08 июня2016 годаII Российском конгрессе лабораторной медицины, Москва, 12-14октября 2016 годаIII Всероссийской конференции с международным участием«Социально-значимые и особо опасные инфекционные заболевания», Сочи,01-04 ноября 2016 годаIX Ежегодном всероссийском конгрессе по инфекционнымболезням с международным участием, Москва, 27-29 марта 2017 годаIXВсероссийскойнаучно-практическойконференциисмеждународным участием «Молекулярная диагностика – 2017», Москва, 1820 апреля 2017 годаIII Российском конгрессе лабораторной медицины, Москва, 11-13октября 2017 годаДиссертация апробирована на совместном заседании институтамедицинской паразитологии, тропических и трансмиссивных заболеванийим.Е.И.Марциновского и кафедры тропической медицины и паразитарныхболезней МПФ ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.И.М.Сеченова МинздраваРоссии (Сеченовский Университет) (протокол № 7 от 19 октября 2017 года).9Личное участие автора в получении научных результатов,изложенных в диссертацииАвторличносформулировалновоенаучноенаправление–молекулярную паразитологию, широко пропагандировал его на различных, втом числе и международных, научных форумах, уточнил и апробировалподходы к экспериментальному конструированию ПЦР-диагностикумов,спланировал и осуществил экспериментальную часть работы.Е.Н.Морозовым предложена и обоснована возможность применениямолекулярно-паразитологических методов не только в стационарныхлабораторных условиях, но и в условиях мобильной паразитологическойлаборатории.
Автор принимал консультативное и методическое участие навсехэтапахразработкирабочейконструкторскойдокументациинамобильную паразитологическую лабораторию на базе автобуса ПАЗ.Им сформулированы практические рекомендации по использованиюмолекулярно-биологических методов в системе эпиднадзора за массовыми исоциально-значимыми паразитарными болезнями.Авторрезультатысамостоятельновыполненныхпроанализировалимисследований,литературныепровелданные,статистическуюобработку полученных данных.Публикации.
По материалам исследований опубликовано 44 печатныхработ, из них в рецензируемых научных журналах, включенных в переченьВАК России – 35, патент Российской Федерации № 2568516 - 1 и разделы в 4монографиях, а также четыре публикации в зарубежных научных журналах.Связь диссертационной работы с планами НИРДиссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы НИИмедицинскойпаразитологииитропическоймедициныим.Е.И.Марциновского ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М.
Сеченова«Совершенствованиеметодовпрофилактикиилечениямассовыхсоциально значимых паразитозов», № гос. регистрации 012101255415.10иСоответствие темы диссертации паспорту научной специальностиОбластью исследования представленной диссертационной работыМорозова Евгения Николаевича являются: формулирование концепциипримененияметодовмолекулярнойбиологиивпаразитологиииформирование нового для Российской Федерации научного направления –молекулярной паразитологии.
Задачи и научные положения диссертации,выносимые на защиту, соответствуют формуле специальности 03.02.11«паразитология». Результаты проведенного исследования соответствуютобласти исследования паспорту специальности 03.02.11 «паразитология»,конкретно пунктам 7, 8, 9.Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 198страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы,материаловиисследований,методовисследований,обсуждениячетырехрезультатов,главзаключения,собственныхпрактическихрекомендаций, списка литературы, включающего 205 публикаций, изкоторых 99 иностранных и четырех приложений.
Работа иллюстрирована 21таблицей, 9 рисунками.БлагодарностиВыражаюискреннююпризнательностьнаучномуконсультанту,заведующему кафедрой тропической медицины и паразитарных болезнейМПФ Первого МГМУ им. И.М.Сеченова, главному научному сотрудникуНИИМПиТМим.Е.И.Марциновского,докторумедицинскихнаук,профессору, академику РАН Владимиру Петровичу Сергиеву за помощь навсех этапах выполнения диссертационной работы.ВыражаюблагодарностьсотрудникамНИИМПиТМим.Е.И.Марциновского Первого МГМУ им. И.М.Сеченова за экспертную помощьд.м.н., профессору А.М.Барановой, д.м.н., профессору М.Н.Лебедевой, к.м.н.А.В.Кондрашину,к.м.н.Т.В.Продеус,к.м.н.С.К.Литвинову,д.б.н.,профессору Е.Н.Понировскому, д.б.н.
Л.А.Ганушкиной, к.б.н. В.Г.Супряге, а11также, главному специалисту-эксперту Федеральной службы по надзору всферезащиты прав потребителей иТ.М.Гузеевой.12благополучия человека, д.м.н.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованияВ качестве источника ДНК паразитов использовались пробы из банкаДНК НИИ медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского, биологический материал из специализированной КДЛ попаразитарнымболезнямКлиническогоцентраПервогоМГМУим.И.М.Сеченова, препараты из специализированных центров по борьбе спаразитарными болезнями Республик Таджикистан, Кыргызстан, Узбекистани Грузия.ДляотработкирежимовПЦРииспытанийпраймеровбылоиспользовано:•20 проб криптоспоридий•15 проб лямблий•25 проб дирофилярий•1050 проб 4-х видов возбудителей малярии•120 проб 2-х видов лейшманий•10 проб бластоцистКроме того, для постановки ПЦР использовалась кровь от больных сподозрениемнатоксоплазмоз,направляемойдлядиагностическихисследований в специализированную КДЛ по паразитарным болезнямПервого МГМУ им.И.М.Сеченова.Выделение ДНК проводилось с помощью стандартных наборовпроизводства компании Биоком (Россия) и ДНК-технология (Россия) поприлагаемым инструкциям.
Использовались следующие наборы реагентов:Проба-рапид, Проба-ГС, Проба-НК.13Для постановки ПЦР использовались готовые ПЦР смеси ПЦР-ядро(Биоком, Россия), а также наборы реагентов для постановки ПЦР безпраймеров (Ампли-сенс, Россия).Реакционнаясмесь«Ампли-Сенс-200-1»(ФГУЦНИИЭРоспотребнадзора):•Смесь нуклеотидтрифосфатов, 1,76 мМ dNTP-mix•5-х ПЦР-буфер (без Mg++)•MSO4•Деионизированнаявода,стерильная,автоклавированная,H2OMilliQ•Taq – полимераза•Минеральное масло вазелиновое•Смесь праймеров по 2 мкл каждогоКоличество ингредиентов на 10 пробирок в зависимости от объемареакционной смеси приведено в таблице 1.Таблица 1− Состав и объемы ингредиентов ПЦРРеактивыОбъемОбъемреакционнойреакционнойсмеси 30 мклсмеси 50 мклДеионизированная вода190 мкл322 мклБуфер для полимеразной30 мкл50 мклСмесь нуклеотидов30 мкл50 мклПраймер 1 ( 5 пМ/мкл )20 мкл30 мклПраймер 2 ( 5 пМ/мкл )20 мкл30 мклTaq-полимераза (5 ед/мкл)10 мкл18 мкл№пцепной реакции с Mg Cl2 (10 х)Примечание: реакционную смесь готовят на необходимое количествопроб, но не меньше чем на 5.14Реакционная смесь компании Биоком:ПЦР – ядро – 5 мкл;Смесь растворителя – 10 мкл;ДНК – 0,3-0,5 мкл;Масло для ПЦР.Общие требования к постановке идентификационной ПЦР.
Припроведении идентификации обязательно готовят следующие пробы:• ДНК – матрица положительного контроля с праймерами ксоответствующим возбудителям;•ДНК-матрица отрицательного контроля с праймерами ксоответствующим возбудителям;• ДНК-матрица отрицательного контроля с теми же праймерами• исследуемые образцы ДНК-мишени с праймерами;Для визуализации результатов ПЦР проводили электрофорез в 1,5%агарозном геле.
В качестве красителя в гель добавляли бромистый этидий(EtBr) до концентрации 0,5 мкг/мл. Для приготовления геля и проведенияэлектрофореза использовали 1хТАЕ буфер (0,04 М Трис-ацетат, 2 мм ЭДТА,рН 8,0). Перед нанесением на гель пробы смешивали с утяжеляющимраствором, содержащим 0,25% бромфенолового синего, 35% глицерина, 50мМ ЭДТА. Электрофорез проводили при напряженности поля от 2 до 15В/cм и комнатной температуре.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
