Автореферат (1139663), страница 6
Текст из файла (страница 6)
Для этой целинами были подвергнуты исследованию комары родов Culex, Anopheles иAedes, отловленных «методом на себя» или эксгаустером в местах дневок вМосковской, Тверская и Нижегородской областях (с 2006 по 2011 гг).В качестве праймера для постановки ПЦР с материалам полученным изкомаров – переносчиков дирофилярий мы использовали тот же праймер - туже генетическую последовательность, что и для разработанной намидиагностики дирофиляриозов у людей.Энтомологическиймониторингзараженностикомаров-переносчиков дирофиляриями проводился в 2006-2011 гг.
в ЦАО России.Зараженность комаров разных родов D.repens различалась незначительно– от 1,9% у Aedes до 3,3% у Anopheles. Для D.immitis эти показателисоставили – от 0,8% у Aedes, до 1,3% у Culex. Этот патоген былобнаружен только у одной самки Anopheles за все время наблюдений.Для оценки зараженности комаров использовали индекс MFIR(Minimum field infection rate), вычисляемый по формуле: число проб, вкоторых были обнаружены зараженные комары/общее число комаров х 1000.В наших исследованиях было обнаружено достоверное увеличение числазараженных комаров на протяжении всех лет исследования (2006 - 2011 гг.).Пик зараженности отмечали в августе, причем максимальная зараженностьбыла зарегистрирована в 2011 году.Таким образом, удалось не только создать разноообразныйинструментарий (ПЦР-диагностикумы) для выявления возбудителей33актуальных паразитозов, но материально наполнить разработаннуюметодологию молекулярного мониторинга за социально значимымипаразитарными болезнями.Как показали практические испытания созданных нами ПЦРдиагностикумовприменениеэпиднадзорепаразитарными болезнямизамолекулярно-биологическихметодовввозможно при работе встационарных условиях для:•рутинной диагностики паразитарных болезней, например примассовых обследованиях, или в сложных для традиционных методовдиагностики случаях•оперативного определения степени контаминации окружающейсреды паразитарными объектами патогенными для человека и оценки уровнябиологической опасности этих объектов•определения наличия лекарственной устойчивости паразитов ивозможности выбора оптимальной тактики лечения (сохранение возбудителяна фоне стандартной этиотропной терапии служит признаком появлениярезистентности патогена к используемому лекарственному препарату)• верификации изменения ареалов паразитарных болезней, болееширокое распространение которых, можно предполагать на основаниирезультатов изучения изменения климата, полученных современнымикомпьютернымикартографическимиметодами–географическимиинформационными системами (ГИС).Расширение спектра диагностических методов за счет увеличениядоли ПЦР в рутинной диагностике паразитарных болезней позволяетоптимизировать лабораторную диагностику, улучшить дифференциальнуюдиагностику в сложных случаях и при микст-инфекциях/инвазиях, а такжеснизить трудозатраты при массовых обследованиях.
Это достигается за счетболее высокой по сравнению с другими методами чувствительностью,34специфичностью и более низкой зависимостью от квалификации персонала,то есть от так называемого «человеческого фактора».Значительные возможности представляются при комбинированиимолекулярных методов с методами медицинской географии. При наложенииданных, полученных с помощью молекулярно-паразитологических методовна цифровые тематические карты ГИС можно отслеживать измененияареалов распространения различных видов и штаммов возбудителейпаразитарных болезней, а также их переносчиков.
Особое значение это имеетпри мониторинге распространения паразитарных и тропических заболеванийна новые территории, как следствие соответствующих климатическихизменений.Точностьиадекватностькомпьютерныхкартареаловпаразитарных болезней и их переносчиков радикально увеличивается, еслидля их построения использовать данные, подтвержденные молекулярнобиологическими методами.35ВЫВОДЫ1.
В рамках концептуально нового понятия «молекулярная паразитология»разработанаметодологиямониторингазасоциальнозначимымипаразитарными болезнями на основе использования молекулярнобиологических методов.2. Показана возможность индикации и идентификации фрагментов геномапаразитарных патогенов на только в тканях и жидкостях организмабольного, но в фекальных массах и организме членистоногих –переносчиков.3.
Подобраны уникальные праймеры и экспериментально определеныоптимальныепараметрыдиагностикикакдирофиляриозы,таквыполнениятрансмиссивных:имолекулярно-биологическоймалярия,нетрансмиссивных–лейшманиозы,лямблиоз,амебиаз,бластоцистоз, криптоспоридиоз – паразитозов.4. Возможностьприменениямолекулярныхметодовдиагностикипаразитозов лимитируется наличием генетических фрагментов патогена вдоступном для исследования биологическом материале пациента.Поэтому малоэффективной оказалась ПЦР-диагностика токсоплазмоза вобразцах периферической крови.5.
СопоставлениеэффективностиПЦР-диагностикибластоцистозас«золотым стандартом» - микроскопическим определением патогенапоказало совпадение в 88,8% с набором праймеров Bh1 и 94,1% - снабором Bh2.6. Для проведения массового скрининга населения на инвазированностькишечными протозоозами создана комплексная ПЦР-система дляодновременного выявления в одной пробе кала фрагментов геномавозбудителей наиболее массовых и социально значимых протозоозов –36лямблиоза, амебиаза, бластоцистоза и криптоспоридиоза.7. С помощью ПЦР-диагностики удалось доказать формирование вэндемичныхповисцеральномулейшманиозуочагахдетей–бессимптомных носителей Leishmania infantum.8. Показано, что в очагах висцерального лейшманиоза в Узбекистане ворганизмелиц,персистированиепереболевшихвозбудителянаэтойинфекцией,протяжении1-10возможнолетпослевыздоровления на фоне проведенной специфической этиотропнойтерапии глюкантимом.9.
ПЦР-исследованиекомаровродовCulex,AedesиAnophelesвЦентральном административном округе России доказало наличиеместной циркуляции Dirofilaria repens и D.immitis; и позволило оценитьрискзаражениялюдейдирофиляриозами.Применениеметодовмолекулярной паразитологии в диагностике паразитозов у пациентов сподозрением на паразитарную патологию позволяет оптимизироватьдиагностику и сократить трудозатраты.10.С помощью массового ПЦР-обследования населения ранее эндемичныхочагов трехдневной малярии в Республике Таджикисан удалось доказатьдостижениеэлиминациималяриивреспублике,чтопослужилооснованием для ВОЗ начать процесс сертификации элиминации маляриив Таджикистане.37ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ1.ШирокоедиагностикувнедрениепаразитарныхПЦРвболезнейклиническуютребуетлабораторнуюповышенияуровняинформированности медицинских работников о теоретических основах ивозможностяхПЦР,иповышенияквалификациивсовременныхметодических подходах к интерпретации результатов ПЦР-анализа.2.
Сцельюувеличениядиагностическойэффективностивкомплексном обследовании больных с диарейным синдромом при анализефекалий рекомендуется сочетать микроскопический метод с молекулярнобиологическим(ПЦР),чтонаиболеецелесообразнопримассовыхпрофилактических осмотрах декретированных лиц, детей в организованныхколлективах,прирасследованиивспышекОКИнапредприятияхобщественного питания.3. Для определения особенностей этиотропной терапии пациентов сдиарейнымсиндромом,вызваннымпатологическимиморфологическисходными между собой простейшими кишечника необходимо применениеметодов молекулярной паразитологии, позволяющих точно определитьэтиологическую причину.4.
Молекулярные методы позволяют не только идентифицироватьвозбудителя, но и выявить его источник (больные люди, домашние,сельскохозяйственные, дикие животные). Рекомендуется использовать этиметоды для выявления источника биологической угрозы и повышениябиобезопасности систем коммунального водоснабжения.5. С целью повышения выявляемости объектов паразитарной природырекомендуетсямаксимальноширокоеиспользованиебиологических методов в санитарной паразитологии.38молекулярно-6.
Рекомендуется расширить спектр исследований существующихцентров молекулярной диагностики за счет увеличения числа анализов напаразитозы.39СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕДИССЕРТАЦИИ1.Асланова, М.М. Эффективная лабораторная диагностика –основа мониторинга паразитарных болезней / М.М. Асланова, К.Ю.Кузнецова, Е.Н. Морозов // Здоровье населения и среда обитания.
– 2016.–№1. – С. 34-37.2.Ганушкина, Л.А. Оценка риска возникновения арбовирусныхинфекций в России / Л.А. Ганушкина, Е.Н.Морозов, И.В.Патраман,О.И.Вышемирский // Медицинская паразитология и паразитарныеболезни. – 2017. – № 1. – С. 9-14.3.Дарченкова, Н.Н. Распространение дирофиляриоза человека вРоссии / Н.Н.
Дарченкова, В.Г. Супряга, М.В. Гузеева, Е.Н. Морозов, Л.А.Жукова, В.П. Сергиев // Медицинская паразитология и паразитарныеболезни. – 2009. – № 2. – С.3-7.4.Державина, Т.Ю. Мониторинг за малярией в Тульской области,как результат системного взаимодействия с референс-центром / Т.Ю.Державина, М.А. Мертешева, А.А. Чернышева, Е.Н. Морозов, Е.А.Черникова, В.П. Сергиев // Медицинская паразитология и паразитарныеболезни. – 2010.
– № 2. – С. 24-26.5.Жиренкина, Е.Н. Особенности эпидемиологии висцеральноголейшманиоза в Папском районе Наманганской области Узбекистана,выявленные при обследовании детей методом ПЦР / Е.Н. Жиренкина, Е.Н.Понировский, М.В. Стрелкова, Е.Н. Морозов, П.Н. Флегонтов, А.А.Колесников, В.И. Пономарева, Р.М. Насырова, Д.А. Коваленко, А.А.Фатуллаева, Ш.А. Раззаков, Л. Шнур, Ч.
Джаф, Г. Банет, А. Варбург, Г.Шониан // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. – 2011.– № 3. – С. 37-41.6.Иванова, Н.В. Последовательность ITS1, 5.8S и ITS2 рДНК А-типа Plasmodium vivax и разработка метода ретроспективной ПЦРдиагностики малярии по окрашенным препаратам крови «толстая капля» /40Н.В. Иванова, Е.Н. Морозов, И.В.
Кукина, Е.В. Максаковская, С.А.Рабинович, А.Б. Полтараус // Молекулярная биология. – 2001. – Т. 35. - №3. – С. 515-525.7.Коваленко, Д.А. Висцеральный лейшманиоз у людей и собак вПапскомрайонесероэпидемиологическиеД.А.Коваленко,иГ.Банет,Узбекистана:исследования/В.И.Пономарева,А.А.Фатуллаева,М.В.Стрелкова,Е.Н.Жиренкина,Е.Н.Понировский,Ч.Джаф,областисероэпизоотологическиеР.М.Насырова,Ш.А.Разаков,Е.Н.Морозов,НаманганскойЛ.Шнур,А.Варбург,Г.Шониан//Медицинская паразитология и паразитарные болезни.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
