А.Т. Мокроносова - Малый практикум по физиологии растений (1134226), страница 39
Текст из файла (страница 39)
См. разд. 1, задача 1. Результаты поместите в таблицу. Сделайте выводы об изменениях содержания свободных сахаров и крахмала у исследуемых вариантов культуры клеток моркови. ПРИЛОЖЕНИЕ !. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАКТИВОВ Аитроиояый реактив 200 мг зитроиа растворяют я !00 мл коицеитрироязииой серной кислоты (удельизя плотность 1,84). Гиаякол (0,4тюй раствор) Если газякол изходится я твердом виде, его предязрительио расплавляют из теплой бане. После охлаждения набирают пипеткой реактив (использовать автоматическую пипетку яли стеклянную пипетку с грушей'.) и по каплям вносят его в стскляииый стекая, установленный из песах. Взяту и ю пиеску (0,4 г) растворяют я 50 мл дистиллироязииой воды.
Раствор ысо переносят я мери ме иую колбу объемом !00 мл, оползскиззют стакан исскол ол . Резки зз водой для количественного переноса резктизз я мерную колбу, еактиз хранят и темной склянке. 2,4-дияитрофеиол (!Π†' М раствор) Дииит офеиол (молекуляризя месса 184,!2) я количестве !8,! мг растр иоряют я !О мл дистиллпроззияой воды, добавлял для подшелзчиззиия по каплям концентрированную шелочь. Затем раствор осторожно доводят до рН 7,8 концентрированной НС!.
Пероксид водорода (0,1'!',-й раствор) 0,5 мл 80"б-го раствора пероксида зодородз разбавляют дистиллированной водой до !50 мл. Для проеерки з растворе содсржзиия НгОз пробы !57 ложениый в воронку Бюхнера, а затем через стеклянный фильтр № 3. Получазот прозрачный зеленоватый раствор гипохлорита натрия. Определяют концентрацию путем титровання его тносульфатом натрия. Раствор ве должен содержать кальция, что проверяется реакцией с щавелевокнслым аммоннем.
Порядок приготовления культуральных сред 1. Приготовить хранящиеся растворы макроэлементов, микроэлементов, витаминов и регуляторов роста растений (см. ниже Среда МС). 2. Поместить литровый сосуд на магнитную мешалку, налить в него около 700 мл дистиллированной воды, добавить определенный объем каж- дого хранящегося раствора при постоянном перемешивании. 3.
Добавить миоинозит и сахарозу, растворить их полностью, добавить еще воды, если необходимо. 4. Довести объем до 950 мл дистиллированной водой, 5. Довести рН 5,8 — 5,9 с помощью 0,5 М раствора ХаОН. 6. Довести объем до 1 л, перемешать жидкость. Среда Мурасиге и Скуга — МС (Т. МшазЫйе, Р. Яйоой) Гипохлорит кальция (бо(а-й раствор) Объем хранящегося раствора яа 1 л среды, мл Ковцевт- рация хравяпхе- гоея раствора, мг1л меловая хранения запасного рве~вора, О Молярвость в среде Состав Главные неорганические питательные вещества КН 14(0 К)(Оа СаС1з. 2НтО 548504 7Н40 КНхР04 2,06 10 ' 1,88 10 ' 3,00 1О ' 1,50 1О з 1,25 1О з 33 000 38 000 8 800 7 400 3 400 Раствор ПК1 50 Раствор ацетокармина Источник железа Ре504.7НзО Мах ЭДТА 2НзО 5 560 7 460 1,00.10 4 1,00.10 4 Органические добавки Миоинозит Никотиновая кислота Пиридоксиа-НС! Тиамин-НС! Глицин 20 000 100 100 100 400 4,90 10 4 4,66 10-в 2,40.
10 — з 3,00.10 ' З,ОО 10 ' — 20 Источник углерода Сахароза 880 10 ' 30 г!л 169 !68 этого раствора титруют 0,05 и. раствором КМп04 до появления устойчивой розовой окраски (на 5 мл раствора Нз0, должно расходоваться 5 мл КМпОб титрование проводят в присутствии 5 мл 4 н. раствора Нз804). В зависимости от результатов титрования к приготовленному раствору НаО* добавляют либо воду, либо пероксид водорода, доводя его до нужной концентрации.
Приготовленный раствор хранят в темной склянке не более 2 — 3 сут. 3,5-Динитросалициловая кислота (! Яа-й раствор) 1 г 3,5-Динитросалицнловой кислоты растворяют в !О мл дистиллированной воды, затем приливают 20 мл 2 н. раствора ХаОН и доводят объем дистиллированной водой до 50 мл, Через !2 ч к раствору прибавляют ЗО г сегиетовой соли (кнасан404ьс4нхО). Объем доводят водой до !00 мл; содержимое фильтруют через стеклянный фильтр. Данныл раствор поглощает СО„поэтому его хранят в закрытой темной склянке 5 г хлорной извести растворяют в 80 — 90 мг дистиллированной воды на мешалке в течение 30 мин, затем раствор фильтруют через складчатый фильтр, доводят объем до 100 мл водой, приливают 5 капель Таина-80 и размешивают до полного растворения.
Раствор гипохлорита кальция готовят в день использования. Твин-80 (смачнвающий агент] добавляют для того, чтобы облегчить доступ стерилизующего раствора в сухие полости нли щели, поскольку многие семена и ткани имеют неровную поверхность и могут задерживать микроорганизмы. 2,5 1з растворяют в 50 мл НяО, затем к этому раствору добавляют 5 г К!, растворяют и тщательно перемешивают. Для опыта используют 10а(в-й раствор !,К!, сливая 1 мл исходного раствора и 9 мл НзО. 9 мл ледяной уксусной кислоты, 11 мл дистиллированной воды, 0,1 и ацетокармина кипятят на водяной баве с обратным холодильником в течение 3 ч. После охлаждения фильтруют.
Фенолят натрия СаНаОХа 5 г перегнанного фенола н 2,5 г КаОН растворяют в 100 мл воды. 0,055а-й нитропруссид натрия — й(ая (Ре(СХ)зХО) 2Н О Сначала приготовляют !о(о-й раствор, его хранят в холодильнике, ио не. более двух недель. Нз !Та-го раствора непосредственно перед употреблением приготовляют 0,05%-й; он быстро разлагается, особенно на прямом свету. Гипохлорит натрия ХаОС( (4в(а-й по хлору) 100 г хлорной извести растворяют в !70 мл воды при сильном перемешивании в течение !5 мин (прн этом часть вещества остается нерастворенной).
Приливают раствор ХазСОа (70 г в !70 мл воды) и тщательно переме. шивают. Сначала смесь застывает, потом превращается в молочно-белую жидкость. Ее фильтруют при отсасывании через двойной слой полотна, по- Микроэлементы К! НзВОз МпЯ04 4НзО ХазМо04.2НзО СоС!х 6НзО Сп304 5НхО ХпЯ04 7НзО 5,00 10 а 1,00 10 " 9,99 10 ' 1,00 1О а 1,00 10 ' 1,00.!О " 2,99 10 з 166 1240 4460 50 5 5 1720 7. Перенести по 75 — 100 мл среды в чистые конические колбы объемом 250 мл; закрыть двойным слоем фольги, целлофаном, укрепить резинкой и автоклавировать 15 мин прн 120'С (1,06 кг(смг). В процессе автоклавпровапия рН сред может слегка снижаться.
Составм широко используемых культуральных сред Среды Спсгаа сред, мггл 5«ьапь, Н~!аа- Ьгаиара Шпзпз«1е 5кппк'з Приготовление комбинированной (двухслойной) питательной среды для культивирования пыльников табака На На!1пг'а %1Ш«'з В работе используется двухслойная среда: нижний слой — агаризованная среда, в которую добавлен актнвнрованный уголь, верхний слой — жидкая среда. 142 81 2500 3000 1900 1650 600 300 134 500 150 250 75 750 125 400 200 74 370 440 65 12 170 150 0,1 0,01 1 1 О,ОЗ рН 5,6 — 5,8 1.
Приготовить 100 мл среды Ннч, концентрированной вдвое: навески, необходимые для 200 мл среды, развести в 100 мл бидистиллироваииой воды. Довести р1-! до величины 5,6 — 5,8. 2. Приготовить 75 мл 1,4агюго раствора агара на бидистнллнрованной воде. 3. Соединить 75 мл расплавленного агара с 75 мл концентрированной среды. Добавить актнвированный уголь в виде пудры до конечной концентрации 0,55а. Разлить в пенициллиновые флаконы по 2,5 мл. Автоклавировать. 4. Оставшиеся 25 мл концентрированной среды разбавить бндистиллированной водой вдвое. Стерилизовать автоклавнрованием или фильтрацией через мембранные фильтры «Миллипор» (0,22 мкм). 5.
Перед началом работы добавить во флаконы с застывшей агаризованной средой по 0,5 мл жидкой среды. Такого количества среды хватает на 66 флаконов. 0,03 0,03 РеС!з 6Н»0 Ре50а 7Н»0 Ре(30з) з Сиквестрен-ЗЗОРе Ха,ЭДТА 15 27,86 2,46 20 37,26 100 10 1 1 100 0,4 1000 5 г 0,5 ПРИЛОЖЕНИЕ П.
ПОРЯДОК РАБОТЫ НА ПРИБОРАХ И УСТАНОВКАХ Фотоэлектроколориметр ФЭК-56-М Миоинознт Тиазгпн-г!С! Никотииовая кислота Пиридокснн-НС( Дрожжевой экстракт 100 1. Проверить заземление, включить прибор в сеть. 2. Включить тумблер прибора, прогреть прибор в течение 15 мин. 3. Установить необходимый светофвльтр. 4, Установить нуль на обоих барабанах прибора. 5.
Прн закрытой шторке установить стрелку гальванометра на «О» ручкой «нуль». 6. Поместить в левую кассету кювету с растворителем, в правую (двойную) — две кюветы: в левое гнездо кювету с рабочим раствором, в правое — кювету с растворителем. 7. Установить в правой кассете рибочий раствор по ходу луча, открыть шторку и левьгм барабаном поставить стрелку гальванометра иа «0», уравняв 20 000 20 000 — ! 30 000 30 000 Сахароза 20 000 30 000 5,9 5 5 рН Примечание, Сложные добавки (кокосовое молоко, регуляторы роста) не приведены. !71 170 Са(ХОз)г КХоз ХаХО, Х1!4ХОз ХН Н РО, (ХН ) ЭО МВБО .7Н,О СаС1» 2Н»0 КС1 КН»Р04 Ха,Н,РО, Н,О МП504 ° Нго Мп80« 4Н»0 К! Н ВО, ЗпЗОа 7Н»0 Сц30, Сц50г 5Н»0 Ха,Мооа 2Нго СоС!г 6Н»0 А!С1, Х1С! 6Нго 1О 1 5 ! 0,2 0,1 0,1 !О 0,75 3 2 0,025 0,25 0,025 22,3 0,83 6,2 8,6 0,025 0,25 0,025 Состав среди КХО. ХНгХО Мя50а.7Нго СаС!г КНгРО« Ге-ЭДТА Сахарова 1.-Серии Глутамин Миоинознт ,иг(л 950 720 185 166 68 !О-' М 20 000 100 800 5000 таким образом растворитель — контроль н рабочий раствор — опыт.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
