И.П. Ашмарин, А.А. Каменский, Г.С. Сухова - Руководство к практическим занятия по физиологии человека и животных (1128356), страница 28
Текст из файла (страница 28)
Изучить профилактические противоязвенные эффекты блокатора Н,-гистаминовых рецепторов циметидина* на этаноловой модели язвообразования у крыс, сделать выводы о возможных механизмах его действия. Материалы и оборудование. Перфорированные поддоны для клеток; шприцы объемом 2 мл; металлический зонд с мягким пластмассовым наконечником для введения спирта в желудок через пищевод; спирт 96; 0,9%-й раствор ХаС1; подложки для желудков (например, чашки Петри); бинокулярная лупа с окуляр- микрометром; циметидин. ХОД РАБОТЫ 1.
Подготовка животных к эксперименту проводится так же, как в задаче 1. 2. Животных разделяют методом случайного отбора на конт-. рольных и опытных. Контрольным животным вводят внутрибрюшинно физиологический раствор (0,5 мл/200 г веса), опытным — исследуемый препарат (циметидин, разведенный в физиологическом растворе, вводится из расчета 400 мг/кг в объеме 0,5 мл/200 г веса). ' Вместо предложенного в данной задаче препарата можно использовать любые другие, представляющие интерес для исследователей.
Тема !. Патологические состояния, связанные с поражением желудка 3. Через час всем животным вводят внутрижелудочно с помощью зонда 96'спирт из расчета 1 мл на 200 г веса. Еще через час проводят эвтаназию, извлекают желудки и рассчитывают площадь повреждений для каждого из них (более подробно смотри задачу 1, п. б в разделе "Ход работы"'). ОБРАБОТКА И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Обработка результатов проводится, как в задаче 1.
Разница состоит лишь в том, что вместо групп животных с разными моделями язвообразования анализируются группы крыс, получавших разные виды лекарственных препаратов. При обсуждении результатов проанализируйте возможные механизмы защиты слизистой оболочки желудка исследуемыми препаратами от повреждающего воздействия этанола. Задача 3. Освоение метода вызова хронических язв в желудке у крыс. Изучение лечебного действия некоторых антисекреторных препаратов Цель работы. Освоить метод вызова хронических язв у крыс, изучить динамику их развития, оценить влияние на скорость заживления блокатора Н,-гистаминовых рецепторов циметидина. Материалы и оборудование. Перфорированные поддоны для клеток; эксикатор; эфир; маска для дачи наркоза, ножницы, пинцеты, ледяная уксусная кислота, фильтровальная бумага, хирургические шелк и иглы, иглодержатель, стрептоцид или пенициллин в порошке или в виде мази, йод, шприцы на 1 мл и иглы к ним, циметидин.
МЕТОДИКА ВЫЗОВА УКСУСНЫХ ЯЗВ Крыс после суточного голодания помещают в закрытый эксикатор и дают эфирный наркоз. После того, как животное заснет, его фиксируют на препаровальном столике бинтами за лапы в позе лежа на спине. На случай выхода животного из наркоза во время операции необходимо приготовить маску с ватой внутри„ куда периодически добавляют эфир. В качестве маски можно использовать узкий (диаметр около 3 см) стеклянный стаканчик. Необходимо помнить о том, что при непрерывной подаче эфира животное может очень быстро погибнуть, поэтому не рекомендуется применять маску более 2 — 3 мин подряд.
Делают небольшой (длиной около 2 см) разрез сначала на коже, потом — по белой линии мышечной стенки живота. Анатомическим пинцетом с плоскими браншами осторожно подтягивают желудок и на его серозную поверхность на 15 с плотно прикладывают кружок фильтровальной бумаги диаметром 7 — 8 мм, смо- 142 Часть! 1. Практические задачи по патофизиологии ченный в ледяной уксусной кислоте. Для стандартизации условий вызова язв желательно накладывать бумагу примерно на одно и то же место желудка у каждой крысы. Удобно ориентироваться по границе между дном желудка (белесая на вид, несекретирующая часть) и его телом, которое имеет более насыщенный красноватый оттенок, и апплицировать уксусную кислоту, например по указанной границе на одинаковом расстоянии от большой и малой кривизны (могут быть варианты — на большую кривизну, на малую кривизну, в область привратника и т.д.).
После аппликации кислоты поверхность желудка подсушивают фильтровальной бумагой. Разрез зашивают послойно (сначала брюшину, затем мышцы, потом кожу). Внутренние швы обрабатывают порошком пенициллина или стрептоцида (или любого другого противомикробного препарата); шов на коже обрабатывают йодом. Прооперированных животных помещают в клетку с чистыми опилками.
Обеспечивают свободный доступ к пище и воде. В первые два дня после операции проводят ежедневный осмотр наружного шва — его целостности и чистоты. Животных с нагноениями или разошедшимися швами отбраковывают. К 4 — 5-му дню после операции у правильно прооперированных крыс на СОЖ желудка под местом аппликации уксусной кислоты должна образоваться округлая язва с валиком по краю и глубоким кратером. ХОД РАБОТЫ 1. Подготовка животных к эксперименту проводится так же, как в задаче 1. 2. В день опыта животных метят, взвешивают и методом случайного отбора делят на контрольных и опытных.' 3.
Проводят операцию по описанной выше методике. 4. Далее опыт можно проводить в нескольких вариантах. Вариант лервый. Для изучения влияния циметидина на формирование язв опытным животным два раза в день внутрибрюшинно вводят препарат (400 мг/кг в объеме 0,5 мл/200 г веса животного) в течение 4 дней после операции. Контрольные животные в это же время получают инъекции физиологического раствора в том же объеме. Эвтаназия животных производится на 5-й день после операции. Вариант второй. Для изучения влияния препарата на процесс заживления уже сформировавшихся язв его инъекции производят с б-го по 9-й день, а эвтаназию — на 10-й день после операции. Контрольные животные в это же время получают инъекции фи~ зиологического раствора в том же объеме.
Вариант третий. Для изучения динамики развития хронических язв и влияния циметидина и на процесс формирования, и на процесс заживления язв, инъекции препарата производят со 2-го по 8-й день. Звтаназию одной четвертой части опытных и контрольных животных осуществляют на 3-й день после операции, другой — на 5-й, и далее на 7-й и 9-й дни после операции. Зтот вариант наиболее информативен, но требует достаточно большого количества экспериментальных животных. Если в каждый забой включать хотя бы по два опытных и два контрольных животных, то для проведения эксперимента потребуется не менее 16 крыс.
5. Независимо от выбранного варианта задачи, по окончании эксперимента животных эвтаназируют, извлекают желудки и оценивают под бинокулярной лупой площадь язвы и ее глубину. Процедура извлечения желудков аналогична описанной в предыдущих задачах. Площадь язвы можно рассчитывать приблизительно: простым умножением длины участка поражения на его ширину. При поражении стенки желудка насквозь может наблюдаться интенсивное ее прилипание к окружающим органам (в основном к печени). В этом случае дополнительно рассчитывается площадь области прилипания.
ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ Для каждого желудка дают описание язвы (ее формы, глубины, места локализации, наличия спаек с окружающими органами) и рассчитывают площадь простым умножением длины на ширину (по внутренним краям валика). Если язва зажила, то это обязательно отмечается в протоколе эксперимента. Язва считается зажившей, если вновь образовавшийся эпителий находится в одной плоскости с поверхностью слизистой оболочки желудка (или приподнимаются над ней), а валик исчезает*.
Результаты сводятся в таблицу (пример для третьего варианта задачи). Вводимый препа- ат Номер и вес животного Локализация и площадь язвы День эвтаназии Для контрольных и опытных животных рассчитывается средняя площадь повреждений в каждой группе и процент заживших язв. Результаты представляют в виде таблицы и/или диаграмм для каждого дня, в который производился забой животных, и делает- " Для более четкой характеристики степени заживления язв используются специальные гистологическис методы. Тема!. Патологические состояния, связанные с поражением желудка 143 Часть 11. Практические задачи по патофизиологии ся вывод о противоязвенной эффективности данного лекарствен- ного препарата. 1. Василенко В.Х., Гребенев А.Л., Шеитулин А.А. Язвенная болезнь.
М., 1987, 2. Элементы патологической физиологии и медицины/Под ред. И.П.Ашмарина. 2-е изд. М., 1997. С.54-79. 3. Рерпс ц1сег йвеаье/Ед.: 1..Р.ВгооКз, Я.Совдеп, Й..В.Бо1оюау. МХ. 1985. (Соп1етрогаг1 юцеып Вайгоеп1его! оду. 7,3). Задача 1. Экспериментальное моделирование артериальной гипертензии у крыс (на примере вазоренальной гипертензии) ВВЕДЕНИЕ Термин "артериальная гииертензия" объединяет целый ряд заболеваний, общим признаком которых является стойкое и длительное возрастание давления крови. Для изучения механизмов патогенеза гипертензии и разработки новых антигипертензивных лекарственных препаратов используют экспериментальные модели: на животных, у которых повышение давления крови обусловлено теми же причинами, что и у человека при разных формах гипертензии. Существует много случаев, когда специфических причин заболевания выявить не удается, и поэтому подъем артериального давления рассматривается как первичный процесс.
Подобные состояния называют первичной (или эссенциальной) артериальной гииертензией, или гииертонической болезнью. Развитие первичной артериальной гипертензии связывают с врожденным уменьшением количества нефронов в почках, нарушением транспорта ионов через клеточную мембрану, хроническим нервно-психическим напряжением. Поскольку для первичной гипертензии характерна выраженная наследственная предрасположенность, различные стороны ее патогенеза моделируются в эксперименте на линейных крысах. Наиболее распространена модель с использованием линии спонтанно гипертензивных крыс БНК, выведенной в Японии в 1963 г. Р.Окамото и К.Айоки.
При некоторых заболеваниях стойкое повышение артериального давления вторично по отношению к какому-то другому патологическому процессу, и такие гипертензивные состояния обо- 146 Часть 11. Практические задачи по патофизиологии значаются как вторичные (симптоматические). Они возникают, например, при атеросклеротическом поражении крупных сосудов, эндокринных нарушениях (феохромоцитоме, первичном альдостеронизме, тиреотоксикозе), ишемизации головного мозга, особенно ствола, в результате опухолевых процессов, травматических и других повреждений.
Во многих случаях артериальная гипертензия развивается при нарушении функции почек: при развитии в почках воспалительных процессов, нарушении почечного кровотока, врожденных аномалиях почек и их сосудов. Особую группу составляют вазоренальные гипертензии, обусловленные приобретенными поражениями магистральных почечных артерий. Так, сужение их просвета может происходить в результате атеросклероза, сдавливании опухолью и т.п. В экспериментах на лабораторных животных вазоренальную гипертензию моделируют путем хирургического сужения почечной артерии.